PARP-1沉默对骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的探讨沉默PARP-1对1,4-苯醌(PBQ)致大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的影响。方法以空载体BMSCs为对照组,以PARP-1沉默BMSCs为处理组,免疫印迹法检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)-1蛋白表达量。磷酸盐缓冲液(PBS)溶解PBQ,分别以0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0和320.0μmol/L PBQ染毒两组细胞,根据细胞活力检测结果选择合适染毒浓度后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,Annexin V-PE/7-AAD标记的流式细胞技术检测细胞凋亡,实时荧光定量-聚合酶链反应检测两组细胞PARP-1基因表达。结果沉默细胞PARP-1蛋白表达量〔(0.15±0.02)倍〕与对照组细胞〔(1.00±0.03)倍〕相比,下降了85%(P<0.05)。PBQ染毒24 h后,相同剂量下两组细胞的活力并无显著性差异。随着PBQ染毒剂量增加,两组细胞PARP-1表达水平和凋亡率均明显增高(P<0.05),且相同剂量下PARP-1沉默细胞比对照组细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论 PARP-1沉默BMSCs在PBQ作用下更易发生凋亡,PARP-1可能参与了PBQ诱导的细胞凋亡。     

糖尿病患者血浆减少α-突触核蛋白的磷酸化和寡聚化

目的研究2型糖尿病(type 2 diabetes,T2D)患者血浆对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)磷酸化和寡聚化聚集的影响。方法收集首都医科大学宣武医院内分泌科T2D住院患者70例,另收集年龄和性别与之匹配的健康志愿者70例作为对照组。采集抗凝血,并分离血浆。将基因重组人α-Syn在患者和对照志愿者血浆中振荡孵育,ELISA法检测各组人群血浆中寡聚化和磷酸化α-Syn形成量。结果 T2D患者血浆中寡聚化和磷酸化α-Syn形成量较对照组均有显著降低(P<0.05),且其与年龄有相关性。结论 T2D患者血浆以年龄依赖的方式减少寡聚化和磷酸化α-Syn的形成。     

基于流感病毒保守抗原的广谱流感疫苗研究进展

流感是由流感病毒感染引起的严重急性呼吸道传染病,接种流感疫苗是预防流感最经济、安全且有效的措施。目前广泛应用的传统流感疫苗的保护效果受到疫苗株与流行株表面抗原匹配程度的明显影响,难以有效应对因流感病毒发生抗原漂移或抗原转换而产生的无法预料的流行或大流行。因而开发能够诱导广谱和持久免疫的广谱流感疫苗是新型流感疫苗研发的重要方向。流感病毒基质、核蛋白和血凝素茎部结构域作为流感病毒的保守抗原,是当前广谱流感疫苗的主要靶抗原。此文就近年来基于流感病毒保守抗原的广谱流感疫苗的抗原选择、免疫保护制剂、临床研究进展做一综述。     

α-突触核蛋白对帕金森病自我免疫病理的影响

帕金森病(PD)是一种以运动功能障碍为主要症状的神经退行性疾病。近年来研究表明PD也属于一种自身免疫病。PD患者脑内炎症反应的增加和血脑屏障的破坏可以促进中枢神经系统和外周免疫系统之间的相互作用。临床研究发现,患者中枢神经系统HLA-DR阳性反应性小胶质细胞增多,胶质细胞明显激活、T淋巴细胞浸润到中枢神经系统、脑脊液和脑组织中炎症因子显著升高,这些现象与患者体内T细胞对α-突触核蛋白产生的免疫反应密切相关。小胶质细胞摄取胞外的α-突触核蛋白后形成抗原肽-MHCⅡ表达在细胞膜上,通过抗原提呈作用影响活化的T细胞或是效应T细胞,活化的效应T细胞分泌不同的细胞因子作用于神经系统,发挥着致炎或抗炎作用。本文就α-突触核蛋白与小胶质细胞中MHCⅡ表达,以及T细胞的后续分化对PD自身免疫病理的影响进行综述,以期为PD的免疫疗法供更多的理论线索。     

百可利通过调控自噬抗帕金森病的作用机制

目的帕金森病是以运动障碍为主的多巴胺能神经元退行性疾病,其特征性病变是神经元内可见路易小体,α-突触核蛋白聚集形成难以清除的寡聚体。细胞自噬有助于清除胞内损伤的细胞器与蛋白,维持细胞稳态,而α-突触核蛋白寡聚体的清除能力下降可能与胞内自噬障碍有关。百可利通过调节氧化应激与炎症反应、促进寡聚体清除等多种途径发挥神经保护作用,而这种保护作用可能与调控自噬过程有关。方法建立鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞模型,考察百可利对SH-SY5Y细胞的保护作用。Western蛋白印迹法考察鱼藤酮损伤与百可利作用后细胞内α-syn变化,并探究不同时间点下自噬标志性蛋白LC3B表达变化。选取适宜的损伤时间,提取不同组别细胞总蛋白,观察不同浓度的百可利对LC3B表达的影响。通过免疫荧光直接观察细胞中LC3B荧光的表达含量,并考察百可利对LC3B荧光强度的调节作用。进一步探究不同组别细胞蛋白中自噬上游AMPK、m TOR与自噬过程中ULK表达变化,考察自噬上游过程是否被激活。结果百可利对鱼藤酮损伤后的SH-SY5Y细胞具有保护作用,不仅提高细胞生存率,还抑制LDH过度释放,抑制细胞内α-突触核蛋白寡聚物积聚。在鱼藤酮损伤的SH-SY5Y细胞模型中,自噬标志性蛋白LC3B表达量随损伤时间增加而增加。鱼藤酮损伤24 h时,受损细胞中LC3B表达明显增加,给予百可利的细胞中LC3B含量显著下调。免疫荧光结果也证明鱼藤酮促进LC3B荧光强度增加,而百可利不仅抑制核损伤,还能降低过度增加的荧光含量。同时,鱼藤酮损伤细胞中自噬调节蛋白AMPK/m TOR/ULK均明显上调,而百可利有助于恢复至正常水平。结论百可利通过提高细胞生存率,降低LDH表达,减少α-突触核蛋白毒性发挥神经保护作用。鱼藤酮损伤促进细胞内自噬过程的活化,百可利在抑制细胞凋亡的同时,还通过调控自噬活化发挥神经保护作用,而这种保护作用与对自噬体与溶酶体合成过程的调控有待进一步探究。     

1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶对去甲肾上腺素诱导心脏成纤维细胞表达基质金属蛋白酶的影响

目的:探讨1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶(PARP-1)对去甲肾上腺素(NE)诱导培养的大鼠心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1,MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1表达的调节作用及其机制。方法:①培养乳鼠心脏成纤维细胞,10μmol/LNE刺激细胞24h,使用实时定量PCR法检测MMP-1、MMP-9及TIMP-1的基因表达水平;使用PARP抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-aminobenzamide,3AB)后,观察PARP-1对上述基因表达的影响。②检测心脏成纤维细胞内活性氧(ROS)水平、PARP酶活性的变化。③采用凝胶阻滞实验检测心脏成纤维细胞内转录因子AP-1的DNA结合能力,研究PARP-1对AP-1DNA结合能力的影响。结果:NE诱导心脏成纤维细胞内MMP-1,MMP-9及TIMP-1的基因表达水平明显增加。细胞内ROS产生增加,PARP酶被激活。核内转录因子AP-1的DNA结合能力明显增强。PARP抑制剂3AB可明显减少NE诱导的MMP-1、MMP-9及TIMP-1的基因表达水平,同时显著抑制AP-1的DNA结合能力。使用抗氧化剂vitC减少ROS产生,抑制了NE诱导的PARP-1活性增加及AP-1的DNA结合,进而显著降低了NE诱导的MMP-1、MMP-9及TIMP-1的基因表达水平。结论:NE刺激心脏成纤维细胞内ROS产生明显增多,大量的ROS激活了PARP使其酶活性显著增高,PARP通过调节转录因子AP-1的DNA结合调控了MMP-1,MMP-9及TIMP-1的基因表达。PARP可能是心脏纤维化过程中的重要调节机制之一。     

突触核蛋白病

突触核蛋白（synuclein）最初从太平洋电鲟鱼（Torpedo california）的带电器官中分离发现，因其主要位于神经突触和细胞核膜上，故而得名。自从阿尔茨海默病（Alzheimer’Sdisease，AD）患者的老年斑中分离出-α突触核蛋白片段成分后，人们第1次开始怀疑α-突触核蛋白是否参与了神经变性疾病的发病过程。研究显示，少数常染色体显性遗传的家族性帕金森病（Parkinson’s disease）与α-突触核蛋白的3种基因错义突变型（A53T、A30P、G46L）相关。随后又发现α-突触核蛋白是散发性帕金森病路易小体（Lewy body）的主要成分，而路易小体是帕金森病的神经病理学标志。     

缬沙坦对压力超负荷下心脏多聚二磷酸腺苷核糖合成酶活性的影响

目的:观察缬沙坦对慢性压力超负荷下左心室心肌多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖合成酶(PARP)活性、心脏形态及心功能的影响.方法:Wistar雄性大鼠34只随机分为假手术组(sham组)10只、腹主动脉缩窄组(AC组)12只、腹主动脉缩窄加缬沙坦干预结扎组(Val组)12只.术后24周行心脏超声和血流动力学检查,并取左心室心肌检测PARP活性.结果:与sham组比较,AC组PARP活性显著增强(P＜0.01),左心室质量/体重(LVW/BW)显著升高(P＜o.05),左心室射血分数显著降低(P＜o.05);与AC组比较,Val组PARP活性显著减弱(P＜0.01),LVW/BW显著降低(P＜0.05),左心室射血分数明显升高(P＜0.05).结论:缬沙坦可抑制压力负荷下心室肌PARP过度激活,并减轻心室重构及心功能的损害.