核糖核苷酸还原酶小亚基M2在肿瘤中表达及意义的研究进展

核糖核苷酸还原酶（RibonucleotideReductase．RR）在DNA合成、修复及细胞增殖中起关键作用,近来被认为是癌症治疗的重要靶点。RR包含3个亚单位,分别是大亚基RRM1、小亚基RRM2和小亚基p53R2。RRM2亚基不仅和DNA的合成密切相关,对恶性肿瘤生物学行为、转移潜能和肿瘤耐药的产生都具有影响．在绒癌、胰腺癌、膀胱癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌等多种人体癌组织中发现RRM2的表达水平有异常升高的情况,抑制RRM2的高表达,可以降低RR酶的活性,抑制癌细胞的生长,增加肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤转移和逆转耐药。     

脑脊液α-突触核蛋白水平与颅脑损伤患者预后的关系

目的：探讨重型颅脑损伤患者脑脊液中α-突触核蛋白（α-Synuclein）的变化及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测60名健康人和92例颅脑损伤患者损伤后1 d、3 d、5 d、7 d的脑脊液α-Synuclein和血清S-100B水平,分析其与格拉斯哥昏迷评分（GCS）及格拉斯哥预后评分（GOS）的关系。结果观察组各时间点脑脊液α-Synuclein和血清S-100B水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义（t分别=2.18、2.50、2.84、3.97、2.33、2.94、3.41、4.52, P均＜0.05）;观察组内中、重型亚组各时间点脑脊液α-Synuclein水平均明显高于轻型亚组,差异均有统计学意义（t分别=1.97、2.04、3.32、3.71、2.16、2.47、2.87、3.67, P均＜0.05）;重型亚组各时间点脑脊液α-Synuclein水平均明显高于中型亚组,差异均有统计学意义（t分别=2.37、2.62、3.79、4.14,P均＜0.05）;颅脑损伤后1 d的脑脊液α-Synuclein水平与1d的GCS及6个月后GOS呈负相关（r分别=-0.82、-0.61, P均＜0.05）。结论脑脊液α-Synuclein检测可作为判断颅脑损伤早期病情的指标之一。     

蛋白酶体抑制剂诱导大鼠黑质变性伴包涵体形成

目的 观察蛋白酶体抑制剂Lactacystin诱导大鼠黑质变性伴包涵体形成及运动行为学的改变,探讨蛋白酶体功能下降在帕金森病(PDl发病机制中的作用. 方法 24只SD大鼠采用随机数字表法分为kactacystin实验组和生理盐水组.每组12只,Lactacystin实验组将蛋白酶体抑制剂Lactacystin立体定向注射人大鼠左侧黑质致密部(SNc).生理盐水组注射等体积生理盐水;观察大鼠自主行为和阿朴吗啡(APO)诱导的旋转行为的改变;Nissl染色法观察SNc病理改变;免疫组化法观察SNc及纹状体酪氨酸羟化酶(TH)和SNc中α-共核蛋白的表达;透射电镜观察SNc超微结构的改变. 结果 Lactacystin实验组大鼠给药7 d后出现自发性活动减少、动作缓慢、震颤、且症状逐步加重.APO可诱导出向健侧的旋转运动;Nissl染色发现Lactacystin实验组左侧SNc神经元数量减少,尼氏体结构松散;免疫组化结果表明21 d后Lactacystin实验组左侧SNc出现变性,TH免疫阳性神经元数量减少,α-共核蛋白表达增强,纹状体内TH免疫阳性纤维数量减少;电镜观察到蛋白质聚集形成的包涵体. 结论 Lactacystin单侧SNc注射可以诱导大鼠黑质变性伴包涵体形成及大鼠行为改变.蛋白酶体功能下降可能在PD发病机制中起重要作用.     

骨不连接区成骨活性的实验研究

目的 检测骨不连骨断端骨形态发生蛋白(BMP)、核心蛋白多糖成分的表达,观察单独应用和联合应用两种因子治疗骨不连的效果.方法 制作兔桡骨肥大型骨不连动物模型,通过大体观察、影像学和组织学检测,比较骨断端组织成分的变化.采用免疫组织化学染色、Real-time PCR、Western-Blot检测骨不连接区组织中BMP、核心蛋白多糖的表达.分别用单纯BMP(A组)、纤维蛋白胶复合BMP和核心蛋白多糖(B组)、单纯核心蛋白多糖(C组)和空白组溶解液(D组)局部注射骨不连接区,通过三维CT观察骨不连接区的成骨情况.结果 组织学检测示骨折愈合侧组织内大量新生骨组织和新生血管形成,骨不连侧组织内主要为纤维瘢痕组织.免疫组织化学检测显示骨折愈合侧可见核心蛋白多糖染色和BMP染色阳性;骨不连接侧无明显核心蛋白多糖表达,BMP-2表达阴性.骨愈合侧和骨不连侧核心蛋白多糖的相对表达量分别为2.402±0.260、1.313±0.187,差异有统计学意义(t=10.193.P=0.000).Westem-Blot检测示骨不连接侧组织BMP-2的表达较骨折愈合侧明显下降(t=69.007,P=0.000).A、B、C、D组局部注射治疗骨不连的成骨量CT值分别为551.40±41.85、674.40±36.55、471.40±27.91、309.20±147.86,差异有统计学意义(F=18.209,P=0.000).结论 骨不连形成后,由于BMP和核心蛋白多糖成分的减少,局部组织的抗纤维化能力和成骨能力下降,联合应用外源性BMP和核心蛋白多糖能促进骨不连接区陈旧性组织成骨.     

北海道型汉坦病毒核蛋白基因的克隆表达及其免疫原性

目的 构建北海道型汉坦病毒(HOKV)核蛋白(NP)基因的重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中表达出具有免疫原性的抗原,用于HOKV的检测及诊断.方法 应用RT-PCR方法扩增HOKVFusong-Cr-247株的NP基因,并将该基因片段克隆到PCR[R]2.1TA载体,转化到One ShortTM TOP10感受态细胞构建TA克隆载体,并与pFastBacTM1转座质粒载体分别用Kpn I和Not I双酶切,用T4连接酶连接,构建pFast PUUV-S重组转座质粒,经双酶切、PCR扩增及插入序列方向鉴定后.转化到DH10BacTM E.coli 感受态细胞,经三抗培养基筛选和PCR扩增鉴定后获得重组Bacmid质粒,将重组Baemid质粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒毒液,并继续扩增重组杆状病毒,以第三代毒液感染Sf9昆虫细胞,96h后收获细胞.用间接免疫荧光(IFA)、SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定和分析.结果 实验应用Bac-to-BacTM杆状病毒表达系统,成功构建了含普马拉类汉坦病毒核蛋白基因的重组杆状病毒表达载体.并在昆虫细胞中获得表达.IFA结果显示,感染细胞的胞浆中有亮绿色荧光颗粒,SDS-PAGE和Western blot检测细胞表达产物的50×103(M)的蛋白条带,证实重组病毒感染昆虫细胞后表达了相应的重组核蛋白,与预计的结果相符.并能与抗汉坦病毒抗体结合.结论 成功表达具有HOKV免疫原性及反应性的重组核蛋白,为研制HOKV的诊断试剂奠定了基础.     

α突触核蛋白磷酸激酶的研究进展

α突触核蛋白(α-Syn)的异常聚集常被看成是帕金森病(PD)的重要致病因素之一。近年来研究发现,沉积于PD患者脑组织路易小体的α-Syn磷酸化的程度达到90%以上,表明磷酸化的α-Syn参与了PD的发生。虽然已发现多种磷酸激酶可以磷酸化α-Syn,但这些激酶在PD发生中的作用至今仍未阐明。     

奥拉帕尼通过PARP-1通路调控脂多糖诱导的A549细胞炎症反应

目的探讨奥拉帕尼对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤的保护作用。方法体外培养的肺泡上皮细胞(A549)同时加入LPS 10mg·L~(-1)+奥拉帕尼10和25μmol·L~(-1)孵育24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定白细胞介素6(IL-6),IL-8和IL~(-1)0释放;实时PCR技术检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL~(-1)β、IL-6、IL-8和细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA的表达水平;流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平;Western印迹法检测细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)蛋白表达水平和NF-κB通路相关蛋白磷酸化水平。结果与LPS 10 mg·L~(-1)损伤组相比,奥拉帕尼10和25μmol·L~(-1)显著降低LPS诱导的A549细胞IL-6,IL-8的释放(P<0.01)和ROS水平(P<0.01),升高IL~(-1)0水平(P<0.01),抑制了LPS诱导的TNF-α,IL~(-1)β,IL-6,IL-8和ICAM-1 mRNA表达水平(P<0.01),抑制LPS诱导的PARP-1蛋白表达和NF-κB通路磷酸化激活(P<0.01)。结论奥拉帕尼可有效缓解LPS诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤和氧化应激,其作用机制可能为奥拉帕尼通过下调PARP-1的表达,继而影响NF-κB通路的活化,最终抑制了相关炎症因子的表达和释放。     

visfatin与肥胖及2型糖尿病相关性研究进展

近年来的研究表明，脂肪组织是重要的内分泌器官，能够分泌多种因子如脂联素（adiponectin）、瘦素（1eptin）、抵抗素（resistin）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-8（IL-8）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）。这些因子在调节机体糖代谢、脂代谢中发挥重要作用，与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病、心血管疾病等密切相关。内脏脂肪组织在诱导糖尿病、肥胖症相关心血管疾病和其他各种代谢症发生发展过程中发挥重要作用^[1]。     

帕金森病的发病机制:alpha-突触核蛋白与节律基因的作用研究

<正>首都医科大学宣武医院神经生物学研究室以神经退行性疾病,尤其是帕金森病为主要研究方向,借助分子遗传学、分子生物学、神经免疫学、基因组学、蛋白质组学以及功能影像学等研究手段,从病因、发病机制、早期诊断和神经保护治疗等几