沉默hnRNP A2/B1基因后通过Bcl-2/Bax影响宫颈癌CaSki细胞的凋亡

目的 探索沉默核内不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNP A2/B1）基因后对宫颈癌CaSki细胞的增殖、凋亡的 影响及其相关作用机制。方法 建立稳定沉默 hnRNP A2/B1 的 CaSki 细胞株,分为未沉默 hnRNP A2/B1 的空白组 （CaSki 组）、转染阴性序列的阴性对照组（CaSki-NC 组）、转染阳性 hnRNP A2/B1 干扰序列的实验组（CaSki-shRNA 组）。运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白印迹法（Western blot）对各组细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达 水平进行验证,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖能力,细胞克隆实验检测各组细胞克隆形成能力,流式细 胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达变化。结果 与CaSki组、 CaSki-NC相比较,CaSki-shRNA组细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达水平均明显减低,细胞的增殖能力在48 h 降低,克隆形成能力下降,凋亡率增加,Bcl-2蛋白的表达减低,Bax表达升高（P＜0.01）,而CaSki组与CaSki-NC组之 间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 沉默hnRNP A2/B1基因后能抑制宫颈癌CaSki细胞的增殖能力,且可能通过 Bcl-2/Bax影响宫颈癌CaSki细胞的凋亡。     

二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌细胞生长停滞和细胞凋亡作用及对PARP-1/p53信号通路的影响

目的探究二甲双胍(DMBG)联合紫杉醇(PTX)对乳腺癌细胞MCF-7生长停滞和细胞凋亡的作用及对聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)/p53信号通路的影响,以期为疾病的临床治疗提供新思路。方法在细胞培养基(不添加药物处理,空白组)、含有DMBG的细胞培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG,DMBG组)、含有PTX细胞培养基(培养基中添加10μg/ml PTX,PTX组)、含有PTX、DMBG的培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG和10μg/ml PTX,联合组)中分别培养乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测菌落形成情况; Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测PARP-1、p53、Cyclin D1、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,MCF-7细胞PARP-1PARP-1、p53蛋白表达明显增加(P 0. 05)。空白组细胞形态、大小均正常,DMBG组、PTX组细胞体积明显变小,细胞核荧光强度增高,部分出现碎片化,联合组细胞核固缩现象更加明显。与空白组相比,DMBG组、PTX组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。与DMBG组、PTX组相比,联合组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。结论 DMBG联合PTX可能通过抑制PARP-1和p53的表达,引起细胞周期G1期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,促进其凋亡,发挥抗肿瘤作用。     

低浓度利福平对鱼藤酮介导的帕金森病细胞模型SH-SY5Y细胞的保护作用

目的 探讨低浓度利福平对鱼藤酮诱导的人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)细胞的影响.方法 鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型,光学显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率,RT-PCR法检测α-突触核蛋白mRNA.结果 经利福平1、10、100 nmol/L预处理后,三个利福平组细胞ROS含量、α-突触核蛋白mRNA以及细胞凋亡率均低于鱼藤酮损伤组(P＜0.01).结论 利福平具有抗氧化作用,能降低细胞α-突触核蛋白mRNA水平,并对细胞有保护作用.     

PARP抑制剂在BRCA胚系突变乳腺癌治疗中的研究进展

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂是一种新型的小分子靶向药物,目前已经有4个聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂批准上市,在治疗乳腺癌以及卵巢癌患者过程中取得较大效果。本文将综述聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂的主要功能和作用机制等,了解聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂在BRCA胚系突变乳腺癌治疗中的具体作用。     

天麻素对帕金森病小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的观察天麻素对帕金森病小鼠纹状体多巴胺(DA)、α-突触核蛋白(α-Syn)和酪氨酸羟化酶(TH)的影响及神经保护作用。方法 50只C57BL/6雄性小鼠通过ip 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立帕金森病模型,分为模型组,天麻素低、中、高剂量组和多巴丝肼组,每组10只,另设对照组10只。天麻素低、中、高剂量组im 0.2、0.4、0.6 g/(kg·d)天麻素注射液,多巴丝肼组im 0.05 g/(kg·d)多巴丝肼溶液,模型组、对照组im等量无菌生理盐水,连续注射14 d。末次给药后1、7、14 d对各组小鼠进行爬杆、悬挂、旷场实验等行为学测试,14 d时处死,采用分光光度法检测各组小鼠纹状体内丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,Western blotting法检测各组小鼠纹状体内α-Syn和TH表达,高效液相色谱–电化学检测法检测各组小鼠DA水平。结果相同时间下,与对照组相比,模型组小鼠爬杆时间、纹状体内MDA、α-Syn水平显著升高(P0.05),悬挂评分、旷场活动总距离、旷场活动平均速度、纹状体内GSH、DA、TH水平显著减少(P0.05);与模型组相比,天麻素0.2、0.4、0.6g/(kg·d)组和多巴丝肼组小鼠爬杆时间、纹状体内MDA、α-Syn水平显著减少(P0.05),悬挂分值、旷场活动总距离、旷场活动平均速度、纹状体内GSH、DA、TH水平显著增多(P0.05),天麻素0.6g/(kg·d)组与多巴丝肼组各指标比较差异均无统计学意义。结论天麻素可能通过提高机体抗氧化能力,保护脑内DA能神经元,从而改善帕金森病小鼠运动障碍症状。     

三阴性乳腺癌的分子靶向治疗

三阴性乳腺癌(TNBC)是一种侵袭性极强的乳腺癌亚型,临床预后很差。近几年,随着对乳腺癌生物学研究的深入,出现了一些新的治疗方法。多项临床试验已经证实,聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)抑制药应用是一种治疗BRCA基因突变或散发的、具有同源重组调节修复缺陷乳腺癌的有效方法。亚组分析提示血管内皮生长因子单克隆抗体贝伐珠单抗联合化疗能有效治疗TNBC。包括舒尼替尼和索拉非尼在内的许多药物也能抑制肿瘤血管生成。基因芯片分析显示,与其他乳腺癌亚型相比,TNBC表皮生长因子受体(EGFR)的表达水平更高,而EGFR抑制药治疗乳腺癌的疗效却令人失望。临床前研究还发现,热休克蛋白90(Hsp90)和Src抑制药有抑制TNBC生长的活性,相关临床试验正在进行中。     

PARG基因沉默抑制小鼠结肠癌CT26细胞系体外淋巴管形成

目的初步探讨聚腺苷二磷酸核糖水解酶(PARG)基因沉默对肿瘤淋巴管形成的影响。方法 CT26细胞分为未转染组,空载组和PARG-shRNA慢病毒载体转染组,经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染细胞克隆。用Westernblot法检测PARG、PARP-1、NF-κB和VEGF-C蛋白表达。给BALB/c小鼠腹腔注射不完全弗氏佐剂,诱导良性淋巴管瘤形成,分离并培养小鼠淋巴管内皮细胞(LEC)。免疫荧光细胞化学检测VEGFR-3和Podoplanin的表达,共培养实验检测LEC体外淋巴管样结构的形成。结果与对照组相比,PARG-shRNA慢病毒载体转染CT26细胞系后PARP-1、NF-κB及VEGF-C蛋白表达显著减弱,相对灰度值分别为1.0±0.05,0.9±0.02和0.2±0.02(P<0.05)。LEC表达VEGF-C和Podoplanin;PARG沉默组的LEC体外形成淋巴管样结构明显较未转染组和空载组少(P<0.05)。结论 PARG抑制肿瘤淋巴管形成可能与降低VEGF-C的表达有关。     

人α-突触核蛋白基因慢病毒稳定转染PC12细胞系的建立及其凋亡检测

目的 构建及鉴定人野生型和突变型α-突触核蛋白(SNCA和SNCAmu)基因慢病毒表达载体,并观察在体外大鼠嗜铬细胞瘤细胞中的表达。方法 在引物合成后采用PCR技术扩增目的基因,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒[pGC-FU,含绿色荧光蛋白(GFP)基因]中,构建SNCA基因慢病毒载体表达质粒(pGC-FU-SNCA-GFP)和SNCAmu基因慢病毒载体表达质粒(pGC-FU-SNCAmu-GFP),通过酶切、测序验证后,将pGC-FU-SNCA-GFP、pGC-FU-SNCAmu-GFP质粒和包装质粒pHelperi.0、pHelper2.0共同转染大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞),获得稳定转染。结果 通过检测标签蛋白GFP和目的蛋白,进一步验证pGC-FU-SNCA-GFP和pGC-FU-SNCAmu-GFP在靶细胞中的表达。通过噻唑蓝比色法检测稳定转染后细胞凋亡水平,稳定表达SNCA组(OE组)、SNCAmu组(OEm组)、不加慢病毒质粒的空白对照组(CON组)和加pGC-FU-GFP空载体对照组(NC组)共4组细胞,病毒转染后不同时间(1、2、3、4、5d)细胞增殖变缓(F =4.534、196.285、411.829、1282.049、3135.559,均P＜0.05)。碘化丙锭单染法检测细胞周期,CON组、NC组、OE组和OEm组G1期、G2期和M期细胞百分比差异有统计学意义(F= 885.79、45.03、207.11,均P＜0.05),其中G1期细胞百分比(％)较高(CON组：59.10±0.35、NC组：68.24±0.60、OE组：71.73 ±0.11、OEm组：74.66±0.35)。结论 人SNCA和SNCAmu基因转染到PC12细胞中,成功建立稳定表达的细胞系,并且对细胞凋亡水平和细胞周期有一定程度的改变。     

α-突触核蛋白在帕金森病发病机制和 治疗中的研究进展

路易小体(LB)是帕金森病(PD)的典型病理改变,而α-突触核蛋白(α-Syn)是LB的主要成分。α-Syn在各种因素影响下的异常折叠、聚集、扩散等在PD发病过程中起重要作用。本文概述了α-Syn在PD发病过程中的作用机制,并阐述针对α-Syn的靶向治疗策略。     

槲皮素通过抑制核因子-κB表达诱导A549细胞凋亡

目的观察槲皮素对人肺腺癌A549细胞核因子(NF)-κB信号通路的影响,探讨其诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用机制。方法体外培养A549细胞,实验分为槲皮素组(给予终浓度为30μg/ml槲皮素)、顺铂组(给予终浓度为3μg/ml顺铂)及对照组〔给予等体积二甲基亚砜(DMSO)〕。采用ELISA法检测Caspase-3浓度;采用免疫组化荧光染色检测PARP裂解片段阳性细胞荧光强度;采用Western印迹分析检测NF-κB蛋白的相对表达强度。结果槲皮素可明显升高Caspase-3浓度、增强多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)裂解片段阳性细胞荧光强度、抑制NF-κB的表达,与对照组差异显著(P0.05,P0.01)。结论槲皮素可通过抑制NF-κB表达而诱导A549细胞凋亡,可能是其抗NSCLC的机制之一。