钥孔戚血蓝蛋白诱导BALB/c小鼠变态反应性肺炎及机制初探

目的 探讨钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)诱导BALB/c小鼠变态反应性肺炎的特点及机制,为深入研究慢性肺部炎症性疾病奠定基础.方法 以KLH免疫BALB/c小鼠,HE染色观察小鼠肺组织病理变化;[3H]TdR法检测脾细胞增殖;流式细胞法检测外周血及脾细胞中CD4+、CD8+T细胞阳性百分率;RT-PCR法检测脾细胞中Th1型细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和Th2型细胞因子白介素4(IL-4)mRNA表达;ELISA法检测脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-4含量及血清中Th1型抗体IgG2a和Th2型抗体IgG1水平.结果 ①KLH免疫致小鼠变态反应性肺炎;②KLH免疫促进小鼠脾细胞增殖;③KLH免疫致小鼠CD4+T细胞过度活化;④KLH免疫致小鼠Th2优势反应.结论 KLH免疫使小鼠免疫细胞活化并发生变态反应性肺炎,CD4+T细胞过度活化和Th2优势应答可能参与了其发病过程.     

CCK-8抗TNF-α抑制离体兔肺动脉舒张反应性的机制

肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ，ＴＮＦ）是内毒素诱导肺动脉高压（ｐｕｌｍｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ＰＡＨ）的重要前炎症介质，给动物单独注入ＴＮＦ－α也可引起于内毒素血症中所见到的ＰＡＨ，但其机制尚未完全明了...     

外周血单个核细胞hMLH1启动子甲基化与类风湿关节炎发生发展的关系

目的 探讨错配修复基因-hMLH1启动子甲基化及基因失活在类风湿关节炎(RA)发生发展中的作用。方法 选取2006年4月-2007年4月河北医科大学附属第二医院及第三医院新诊断的RA患者33例为病例组,另选择同期河北省血液中心提供的健康人群38例为对照组。取受试者外周血,以密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。分别以RT-PCR法、蛋白印迹法检测外周血单个核细胞hMLH1 mRNA、蛋白相对表达量。经亚硫酸氢钠修饰后,分别设计hMLH1启动子甲基化和非甲基化的DNA引物,检测病例组和对照组患者hMLH1启动子甲基化结果。结果 病例组hMLH1 mRNA相对表达量为0.56（0.24,0.69）,低于对照组的0.80（0.68,0.93）,差异有统计学意义（Z=-3.98,P＜0.05）。病例组hMLH1蛋白相对表达量为0.70（0.62,0.76）,低于对照组的0.80（0.68,0.94）,差异有统计学意义（Z=-2.23,P＜0.05）。病例组hMLH1启动子甲基化阳性率为90.9%（30/33）,高于对照组的13.2%（5/38）,差异有统计学意义（χ2=42.72,P＜0.05）。hMLH1启动子甲基化程度与mRNA、蛋白相对表达量呈负相关(rs=-0.866、-0.541,P＜0.01)。类风湿因子阳性患者hMLH1 mRNA、蛋白相对表达量低于阴性患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;两者hMLH1启动子甲基化阳性率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 hMLH1启动子甲基化可能是hMLH1基因失活的重要机制,hMLH1异常高甲基化可能参与了RA的发生发展。     

外源性LTB4对CIA小鼠Treg/Th17脾细胞分化的作用

目的探讨外源性白三烯B4(LTB4)对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠脾细胞调节性T细胞(Treg)和Th17细胞分化的调节,进一步阐明LTB4在类风湿关节炎(RA)发病中的作用机制。方法建立CIA小鼠模型,取造模d28的脾细胞,体外实验分析外源性LTB4对Treg和Th17细胞分化的影响。应用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+细胞的数量,荧光定量PCR技术检测调控Treg和Th17细胞分化的特异性转录因子Foxp3和RORγt的mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测培养细胞上清IL-17的含量。结果成功建立CIA小鼠模型;造模d28分离小鼠脾细胞,体外培养加入鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)共同孵育,随着LTB4浓度增加(0.01、0.1、1μmol·L-1),CD4+CD25+Foxp3+细胞数量相应减少,Foxp3 mRNA的表达相应降低;相反,IL-17的含量相应增加,RORγt mRNA的表达相应升高。结论LTB4抑制CIA模型脾细胞Treg细胞的分化,促进Th17细胞的分化,提示LTB4在CIA发病过程中具有一定的促炎活性。     

CCK-8与内源性阿片系统在吗啡依赖中的相互作用

目的通过观察不同剂量的CCK-8对吗啡依赖SH-SY5Y细胞模型内源性阿片系统的影响,初步探讨CCK-8与内源性阿片系统在吗啡依赖过程的相互作用及其机制。方法建立吗啡慢性依赖SH-SY5Y细胞模型,应用放射配基结合技术观察μ阿片受体(MOR)结合特征,应用Real-Time PCR技术检测前脑啡肽原(PENK)、前阿黑皮质素原(POMC)基因的表达,并观察CCK-8对上述指标的影响。结果①10μmol·L-1吗啡作用于全反式维甲酸(RA)分化6d的SH-SY5Y细胞48h,成功建立了慢性吗啡依赖模型;②CCK-8可剂量依赖性地抑制MOR的结合,并且此抑制作用可被CCK1及CCK2受体拮抗剂(L-364,718,LY-288,513)翻转;③10-7、10-6mol·L-1CCK-8使PENK、POMC的表达较正常组分别增加(5.81±0.84)、(7.26±1.55)倍和(4.55±0.73)、(5.16±0.82)倍。吗啡依赖后,PENK、POMC表达较正常组下降(0.43±0.10)倍和(0.37±0.07)倍,10-8、10-7、10-6mol·L-1CCK-8使下调的PENK、POMC表达增加,PENK与正常组的相对表达值为(0.63±0.10)、(0.86±0.21)、(1.17±0.19),POMC与正常组的相对表达值为(0.46±0.10)、(0.60±0.11)、(0.96±0.11)。10-10、10-9mol·L-1CCK-8对PENK、POMC表达无影响。结论低剂量(10-10、10-9mol·L-1)CCK-8可通过激活CCK受体抑制MOR的结合力,对PENK、POMC的表达无影响;高剂量(10-8～10-6mol·L-1)的CCK-8可使PENK、POMC基因表达增加,促进内源性阿片肽的生成,并可改善吗啡依赖后内源性阿片系统的失衡。     

河北汉族人群5个X-STR基因座遗传多态性研究

短串联重复序列(short tandem repeat,STR),由于其具有高度的稳定性、丰富的多态性及分型技术简单、快速等优点,已成为目前法医学中最主要的遗传标记.     

CCK-8对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞增殖的影响及相关机制。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测CCK-8对IL-1β诱导RSC-364细胞增殖的影响;应用Westernblot检测CCK-8对IL-1β诱导RSC-364细胞p38MAPK磷酸化的影响。结果CCK-8剂量依赖性(10-12、10-10、10-8、10-6mol.L-1)抑制IL-1β诱导的RSC-364细胞增殖;CCK-8剂量依赖性(10-10、10-8、10-6mol.L-1)抑制了IL-1β诱导的RSC-364细胞p38MAPK的磷酸化;且CCK-8A、B受体拮抗剂CR1409或CR2945均减弱了CCK-8的抑制效应。结论CCK-8剂量依赖性抑制了IL-1β诱导的RSC-364细胞增殖,该作用由CCK-AR和CCK-BR介导,并可能通过抑制p38MAPK磷酸化而实现的。     

中药治疗多发性骨髓瘤一例

骨髓瘤是浆细胞的一种恶性肿瘤。笔者以祖国医学辨证论治为依据治疗一例多发性骨髓瘤,效果较为满意,现报告如下:患者,女,52岁,干部。1985年经专家会诊确诊为多发性骨髓瘤(胸、腰、骨盆)。确诊后曾予以输血、抗生素、化疗及对症治疗,症状稍有缓解但局部仍疼痛难忍,两下肢不能屈伸瘫痪于床上。     

CCK-8抑制LPS诱导大鼠肺间质巨噬细胞TNF-α转录及NF-κB活性

目的:观察硫酸化八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠肺间质巨噬细胞(PIMs)TNF-α基因表达的影响,探讨核因子κB(NF-κB)是否参与这一过程,以揭示CCK-8抗炎作用的信号转导机制。方法:分离大鼠肺PIMs,经LPS、CCK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育3h,用RT-PCR技术检测细胞TNF-αmRNA的表达,孵育1h,用电泳迁移率改变分析方法检测NF-κB活性,孵育30min,用Westernblot技术检测胞浆IκBα蛋白表达情况。结果:CCK-8(10^-8-10^-6mol·L^-1)明显降低了LPS诱导的TNF-αmRNA表达及NF-κB活性,增加了胞浆中IκBα蛋白水平,呈剂量依赖性,并可被丙谷胺所拮抗。结论:对LPS激活的肺PIMs,CCK-8通过抑制NF-κB活性而抑制其TNF-αmRNA表达,该作用由CCK受体介导,并与CCK-8减少IκBα蛋白降解有关,此为CCK-8抗炎作用的机制之一。