PCR方法检测EHEC O157∶ H7的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种基因

目的:应用当前国际上常用的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种5对引物,对45株疑似肠出血性大肠埃希菌O157∶ H7(EHEC O157∶ H7)检测鉴定,全面了解此类菌的致病力情况.方法:分纯并富集被鉴定菌株,首先以单克隆诊断血清学凝集,阳性者再经 100℃水煮制成粗模板,应用PCR检测各菌株是否具有rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA及stx2及其变种5种基因,扩增结果经EB染色后在凝胶成像仪下观察特异性条带并拍照.结果:45株被检测菌经PCR扩增检测,5种基因全部阳性的有10株,4种基因出现阳性的只有1株,3种基因阳性的有6株,2种基因阳性的有17株,1种基因阳性的有10株,1株菌的5种基因检测均为阴性.45株菌中rfbO157阳性的有44株,fliCH7基因阳性的菌株有30株,hlyA阳性的菌株只有10株,eaeA阳性基因的菌株有21株,stx2及其变种阳性的也只有11株.结论:这次45株菌中有5株具有全部的5种基因,44株为EHEC O157,其中30株为EHEC O157∶ H7,这次选择的5种基因不仅能给被检测菌株定性,而且能较全面地反应其毒力强度,适合于有条件的基层实验室开展.     

小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体筛选及其应用

目的利用杂交瘤技术筛选出能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的细胞株,用于该型菌株的鉴定。方法采用ELISA方法筛选克隆株,并用玻片凝集法进行单克隆抗体的特异性鉴定。结果筛选到3株能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体与经鉴定的18株小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型菌株呈阳性反应,而与其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌及常见肠道致病菌无交叉凝集反应;应用于小肠结肠炎耶尔森菌野生株分型鉴定时,能准确鉴定出其中的24株O∶9血清型菌株,与用日本进口分型血清鉴定、PCR毒力基因检测结果相同。结论筛选获得的细胞株产生的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型鉴定,具有很好的型特异性,避免了过去免疫血清制备中繁琐的抗原交叉吸收试验。     

江苏省淮北地区肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻并发急性肾衰的研究

目的 了解1999～2000年江苏省淮北部分地区发生肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻并发急性肾衰病例的病因与流行特点。方法 运用流行病学、微生物学、分子生物学等方法,对传染源、传播途径、流行因素进行调查和分析。结果 1999年共在9个县(区)报告肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻并发急性肾衰病例95例,死亡83例,病死率87.37％。6月中、下旬为发病高峰,男女之比为1:1.44,年龄以50岁以上为主,占88.42％。2000年发生38例,死亡34例,病死率89.47％。引起爆发的主要危险因素有不饮自来水、吃剩饭菜、厨房卫生差、生食瓜果和饭前便后不洗手。从2例重症患者及3例腹泻患者粪便标本分离到O157:H7;宿主动物O157:H7携带率为9.62％(170/1767),菌株毒力基因阳性率达99.41％(169/170)。从患者粪便标本分离的菌株与家禽家畜分离的菌株属同一克隆群。结论 这是中国首次发现由O157:H7引起的爆发疫情,其发生与宿主动物带菌率高且菌株毒力基因阳性率高有密切关系,引起疫情的具体传播途径复杂多样,主要的感染危险因素与个人卫生、家庭卫生不良有关。     

四川省绵竹市地震灾后早期防病评估

目的 评价地震后早期(震后2周)防病措施及效果,为后续防病提供决策依据.方法 使用设计统一的调查表,对18个镇及2个城区安置点震后防病状况进行现场询问、调查,统计分析调查结果 ,形成评估意见.结果 调查358户,98.32%的灾民住在帐篷中,其中88.27%为简易帐篷,10.06%为专用帐篷,58.06%符合卫生学要求.重灾区和轻灾区中,厕所消毒处理的比例分别为92.70%和87.78%;粪便及时清运的比例分别为51.69%和51.67%;仅饮瓶装水的为0.84%,饮瓶装水或集中供水的为10.61%,饮用井水的为88.27%,其中未进行消毒的占2.22%,饮用河沟水的有3.91%,其中未进行消毒的占35.71%.调查的住户中,食用凉拌菜的占5.03%;吃过剩菜剩饭的占12.85%;认为蚊虫比去年较多的有33.52%,认为苍蝇比去年较多的占36.59%,认为老鼠比去年较多的占8.41%,其中发现死鼠的10户,占调查户的2.79%.所调查的乡镇全部通过<地震灾区传染病(症状)监测按日汇总报表>汇报发热、腹泻及犬伤患者.结论 绵竹市灾后防病建立了高效运转的管理组织,各项技术措施因地制宜,针对性强,包括尸体掩埋,食品卫生,环境及饮用水消毒、传染病监测等各项措施落实有力,各项防病措施科学、合理、有序进行.     

霍乱毒素B亚单位与志贺毒素2B亚单位融合表达及抗原性检测

目的 克隆表达出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7志贺毒素2B亚单位(Stx2B)与霍乱毒素B亚单位(CTB)的融合蛋白(CTB-Stx2B),并检测其抗原性和与神经节苷脂(GM1)结合能力.方法 设计引物扩增融合蛋白CTB-Stx2B的编码基因ctb-stx2b,T-A克隆测序验证后克隆入原核表达质粒pET30a(+)C,构建表达质粒pET30a(+)-ctb-stx2b,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达、纯化,获得目的蛋白CTB-Stx2B,SDS-PAGE和Western-blot检测其抗原性和形成五聚体的能力;GM1-ELISA法检测其与GM1结合能力.结果 扩增出约750 bp的目的片段,测序鉴定与设计序列一致;原核表达质粒pET30a(+)-ctb-stx2b转化E.coliBL21(DE3)后,经酶切和PCR扩增鉴定正确;IPTG诱导后SDS-PAGE初步测定CTB-Stx2B单体的相对分子质量(MR)约为20×103;Western-blot检测CTB-Stx2B能与CTB单克隆抗体结合,纯化产物经复性后大多以五聚体形式存在;ELISA检测CTB-Stx2B具有结合GM1活性.结论 成功克隆、表达了融合蛋白CTB-Stx2B;表达的蛋白具有良好的CTB抗原性和GM1结合能力.     

湖南省1例猪链球菌2型菌株的PCR检测

目的从分子水平鉴定湖南省一例疑似猪链球菌病病原菌的种、型及毒力基因,为流行病学和临床提供诊断分析依据。方法采用猪链球菌2型多重PCR快速诊断试剂盒以及另外合成的四对引物进行聚合酶链反应。结果用三重PCR试剂盒检出该菌携带cps2以及mrp基因,用合成的16srRNA、cps2j、mrp以及sly引物进行PCR扩增电泳后均显示阳性条带。结论2006年8月湖南省一例疑似猪链球菌病例确为猪链球菌2型感染,并且该菌携带多种毒力基因。     

马鞍山市志贺菌福氏4c亚型毒力基因分布

目的了解马鞍山地区志贺菌福氏4c亚型感染株毒力分布特点,分析其流行模式。方法应用PCR技术,检测48株志贺菌福氏4c亚型菌株的ipaH,ial、set、sen等4种毒力基因。结果ipaHi、als、ets、en等4种毒力基因在48株志贺菌福氏4c亚型的分布分别为100?%,96%,88%;其毒力基因模式主要分成5型,其中Ⅰ型是本地区主要流行模式。结论马鞍山地区志贺菌福氏4c亚型普遍携带ipaHials、et、sen等4种毒力基因;毒力强、感染力强是该血清型成为本地主要流行型别的主要原因。     

出血性大肠杆菌EHEC O157∶H7感染的研究进展

新发现的病原微生物和重新抬头的病原微生物,是当前世界医学界面临的一个新的课题,肠出血性大肠杆菌EHECO157:H7(以下简称O157:H7)就是其中之一[1,2].     

肠出血性大肠埃希菌O157：H7引起的溶血性尿毒综合征患者血清抗体调查

目的 对1999年某地出现的一批先有腹泻病症状后继发急性肾功能衰竭（肾衰）的患者进行血清学调查和诊断。方法 使用基因克隆表达纯化的肠出血性大肠埃希菌（EHEC）-溶血素（Hly)和EHECO157脂多糖（LPS）为抗原，对采集自42例肾衰患者的血清标本进行蛋白印记试验。结果 EHEC-Hly的检测发现，IgG抗体阳性21份，阳性率50.0%；IgM抗体阳性16份，阳性率38.1%；在11份标本中同时检测到IgG和IgM抗体，阳性率26.2%；检测到IgG或IgM抗体阳性的标本26份，阳性率61.9%，EHECO157LPS的检测发现，24份标本分别检测到IgG和IgM抗体，阳性率各为57.1%；在29份标本中检测到IgG或IgM抗体，阳性率69.0%;在20份标本中检测到IgG和IgM抗体，阳性率47.6%，在42份血清标本中同时检测到EHEC-Hly和O157LPS的特异性抗体的标本22份，阳性率52.4%；检测到EHEC-Hly或O157LPS的特异性抗体的标本34份，阳性率81.0%。结论 结合细菌学和血清学诊断结果，临床症状和流行病学分析。可以认为这些患者感染了EHECO157：H7，在分离不到病原菌的情况下，检测患者血清标本的EHEC-Hly和/或EHECO157LPS的特异性抗体，不失为一种可以考虑的诊断方法。     

致病性耶尔森菌感染与细胞因子相关性的研究进展

目的病原体感染机体后会引起相关的细胞因子发生变化,细胞因子的变化是病原体与感染的机体相互作用的结果。本文主要综述了鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌这三种致病性耶尔森菌感染后机体细胞因子变化的研究进展,主要包括致炎性细胞因子和抑炎性细胞因子的变化。