仿生矿化后的丝素电纺复合支架体内成骨性能的实验研究

目的探讨仿生矿化后的丝素电纺复合支架体内修复颅骨缺损的能力。方法利用静电纺丝技术制备丝素电纺支架(非矿化组),通过模拟体液(SBF)浸泡法对支架仿生矿化(矿化组),扫描电镜观察其微观形貌。18只8周龄的雄性SD大鼠购自南京医科大学动物实验中心,采用随机数字表示法分为3组,分别为矿化组、非矿化组和对照组,每组6只。构建SD大鼠颅骨缺损模型,在直径为5 mm的骨缺损区分别植入矿化组及非矿化组支架,对照组不作处理,分别于术后4、8周取材,通过微计算机断层扫描技术(micro-CT)、苏木精-伊红(HE)及马松染色(Masson染色)比较评估不同支架的体内骨再生情况。应用GraphPad Prism 8统计软件分析,采用单因素方差分析。结果扫描电镜结果显示仿生矿化后的丝素电纺支架表面形成明显的羟基磷灰石矿化层。动物实验结果显示,术后4周和8周,通过对CT三维重建、HE及Masson染色的观察以及对骨体积分数(BV/TV),骨小梁数(Tb.N),骨小梁厚度(TB.Th)和骨小梁间隙(TB.Sp)定量指标的分析结果显示,在矿化组和非矿化组均能观察到新骨的形成,且矿化组的修复效果均优于非矿化组,差异有统计学意义[矿化组、非矿化组及对照组BV/TV在4周时分别为(22.880±2.324)、(12.600±1.965)、(4.967±1.580)%,F=61.838,P<0.05,8周时分别为(45.770±4.433)、(29.400±4.086)、(19.310±2.272)%,F=38.686,P<0.05;Tb.N在4周时分别为(0.029±0.001)、(0.019±0.003)、(0.008±0.003)mm-1,F=52.890,P<0.05,8周时分别为(0.053±0.002)、(0.037±0.003)、(0.023±0.001)mm-1,F=171.433,P<0.05;TB.Sp在4周时分别为(10.810±0.179)、(11.350±0.098)、(11.730±0.163)μm,F=27.655,P<0.05,8周时分别为(8.792±0.175)、(10.060±0.339)、(11.150±0.275)μm,F=56.807,P<0.05]。结论仿生矿化后的丝素电纺复合支架能有效促进骨再生,有望用于骨组织工程。     

艾烟的作用与安全性评价＊

艾灸作为中医学最古老的疗法之一，作用多样，应用广泛，疗效显著。随着科技的发展，人们对灸法的认识逐渐深入，其中艾烟的相关研究也硕果累累，其安全性广受关注。通过对艾烟作用和安全性评价研究中取得的成果进行归纳分析，以期为艾灸临床安全应用提供指导。     

当归补血汤对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤效果及对免疫调节作用的研究

目的:探讨当归补血汤对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤效果及免疫调节作用。方法:以宫颈癌荷瘤小鼠为实验模型(小鼠宫颈癌U14细胞接种于Balb/c小鼠双侧大腿内侧皮下),共40只,将其分成两组,每组20只,A组喂药当归补血汤,B组给与等量的蒸馏水灌胃,持续16周,测量治疗前后肿瘤大小,计算肿瘤生长率。在免疫抑制模型基础建立宫颈癌荷瘤小鼠40只,分成两组,每组20只,C组喂药当归补血汤,D组予以等量蒸馏水灌胃,2周后断颈,取胸腺、脾脏称量,计算胸腺指数和脾脏指数。结果:灌胃16周后,A组存活10只,B组存活3只,A组与B组相比,体重较B组明显增加,生存时间明显延长,根据生存状态评分两组综合评分具有统计学差异(P<0.05)。A组用药4周、8周、12周后肿瘤体积均明显小于B组(P<0.01),A组用药4周、8周后肿瘤生长率明显低于B组(P<0.01),用药12周后肿瘤生长率比较差异无统计学意义(P>0.05)。C组的胸腺指数和脾脏指数显著高于D组,差异比较有统计学意义(P<0.01)。结论:当归补血汤对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤效果明显,对免疫状态有调节作用。     

α_(2B)-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2共表达稳转细胞株的构建

目的建立能够稳定表达α_(2B)-肾上腺素能受体(α_(2B)-AR)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)(EGFP-NFAT2)的稳转细胞株。方法构建具有潮霉素(Hydro)抗性的pcDNA3.1α_(2B)-AR重组质粒(pcDNA3.1-Hygro-α_(2B)-AR),转染至表达EGFP-NFAT2的U2OS细胞(U2OS-EGFP-NFAT2细胞),使用Hygro 200 mg·L~(-1)压力筛选10 d后,进行NFAT2核转位实验筛选细胞株并用Z’因子法评价细胞模型的可靠性,采用实时定量PCR和Western蛋白印迹法,检测α_(2B)-AR的mRNA和蛋白表达水平,选择α_2-AR的激动剂盐酸右美托咪啶(DMED)和拮抗剂盐酸阿替美唑(ATI)通过NFAT2核转位实验评价α_(2B)-AR的功能活性。结果成功构建重组质粒pc DNA3.1-Hygro-α_(2B)-AR后,稳定转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞,采用NFAT2核转位实验筛选发现,编号12的细胞株相对核转位指数为0.445,活性最高;3次独立实验中,Z’因子分别为0.664,0.533和0.634。实时定量PCR结果显示,编号12的细胞株α_(2B)-AR mRNA表达水平是U2OS-EGFP-NFAT2细胞株的140倍,表达显著增加(P<0.01),且在20代次内表达稳定。Western蛋白印迹结果显示,编号12的细胞株出现明显的α_(2B)-AR蛋白条带,而U2OS-EGFP-NFAT2细胞中未检测到α_(2B)-AR蛋白表达。DMED可以浓度依赖性地提高该细胞株的核转位水平[EC_(50)=(2.616±0.121)nmol·L~(-1)],ATI可以浓度依赖性地对抗DMED的作用[IC_(50)=(89.05±0.22)nmol·L~(-1)]。结论成功构建了共表达α_(2B)-AR与EGFP-NFAT2的稳转细胞株,可用于靶向α_(2B)-AR化合物的筛选和受体分子机制的研究。     

动物药材生产及产地加工技术标准体系建设

药用动物资源是中药资源的重要组成部分,是中医药发展的重要战略储备资源,在野生药用动物资源日渐匮乏的今天,大力开展药用动物人工养殖才能确保我国中医药产业的可持续发展。然而《中国药典》2015年版一部收载的106种药用动物中仅有22种(除家畜家禽外)有现行选育、养殖相关标准,共211项,其中除国家标准7项、行业标准(农业、水产)11项外均为地方标准,远远落后于同类型农业标准化程度,无法实现动物药材规范化生产。亟需对常见动物药材蟾酥、水蛭、全蝎等建立包括基础标准、产品标准、工艺过程标准、安全标准、环境保护标准、管理标准、工作标准在内的动物药材生产及产地加工技术标准体系,补充产业空白,从源头把控动物药材、动物类中药饮片及含有动物性成分中药产品质量。     

蛇床子素对过氧化氢诱导下人表皮黑素细胞氧化损伤的影响

目的探讨中药单体蛇床子素对过氧化氢诱导下人表皮黑素细胞氧化损伤的影响。方法体外培养人表皮黑素细胞,并用L-DOPA鉴定。用一定浓度蛇床子素预处理黑素细胞,并用过氧化氢构建黑素细胞氧化损伤模型,采用MTS法检测黑素细胞活力,倒置显微镜下观察黑素细胞树突变化,并记录树突变化率。分别用WST-1法和TBA法,测定细胞内SOD及MDA含量。结果与对照组相比,过氧化氢组黑素细胞活力及细胞内SOD活性显著下降(P 0. 05),经蛇床子素预处理的黑素细胞活力及SOD活性虽低于对照组,但显著高于过氧化氢组(P 0. 05)。与对照组相比,过氧化氢组黑素细胞树突变化率及细胞内MDA含量明显升高(P 0. 05),经蛇床子素预处理的黑素细胞树突变化率及细胞内MDA含量虽比对照组升高,但显著低于过氧化氢组(P 0. 05)。结论蛇床子素可抑制过氧化氢对黑素细胞的氧化损伤作用,对黑素细胞活力及树突的变化具有保护作用,并可升高细胞内SOD水平,降低MDA水平。     

全身振动训练联合正弦交变电磁场对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、骨代谢指标的影响研究

目的探讨全身振动训练联合正弦交变电磁场对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、骨代谢、骨生物力学性能的影响。方法将100只大鼠随机分为切除卵巢组和对照组,分别进行卵巢切除术和假手术,大鼠进行6周恢复,恢复后将造模成功的切除卵巢大鼠随机分为模型组(MO组)、全身振动训练组(W组)、正弦交变电磁场组(S组)、全身振动训练+正弦交变电磁场组(WS组),对照组列为假手术组(SO组),进行为期16周干预,干预结束后对大鼠进行骨密度、骨代谢、骨生物力学性质的检测。结果16周干预完成后,MO组、S组大鼠体质量显著高于SO组、W组、WS组大鼠(P0. 05); W组、WS组、SO组大鼠骨密度指标、血清雌二醇浓度指标明显高于大鼠MO组(P0. 05); SO组大鼠血清雌二醇浓度指标明显高于S组、W组、WS组(P0. 05); M组大鼠血清OC、ALP浓度明显高于SO组、W组、S组、WS组大鼠(P0. 05);尿液DPD/Cre、Ca/Cre、P/Cre浓度方面,M组大鼠明显高于SO组、W组、S组、WS组大鼠(P0. 05)。SO组、W组、S组、WS组大鼠股骨最大载荷和弹性模型明显高于MO组大鼠(P0. 05)。SO组、W组、S组、WS组大鼠股骨断裂载荷组间无明显差异(P0. 05); SO组、W组、S组、WS组大鼠股骨弹性模量明显高于MO组大鼠(P0. 05)。SO组大鼠股骨弹性模量明显高于S组大鼠(P0. 05),但与W组、WS组大鼠没有明显差异(P0. 05)。L4椎体压缩试验,SO组、W组、S组、WS组大鼠股骨最大载荷和弹性模型明显高于MO组大鼠(P0. 05)。SO组大鼠高于S组、W组,差异有统计学意义(P0. 05),但与WS组大鼠没有明显差异(P0. 05)。结论全身振动训练、正弦交变电磁场、全身振动训练联合正弦交变电磁场3种干预方式施用于去卵巢骨质疏松大鼠均能提升骨密度、抑制骨吸收、平衡骨代谢、改善骨骼结构力学和材料力学性能。而全身振动训练联合正弦交变电磁场能的治疗效果优于单纯使用全身振动训练或正弦交变电磁场,在临床应用中有一定推广价值。     

健脾益肾方对非小细胞肺癌细胞体外增殖凋亡作用的实验研究

目的:探讨健脾益肾方对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞体外增殖凋亡的作用。方法:人NSCLC细胞系A549分为四组:空白对照组(仅加入细胞培养液)、阴性对照组(加入细胞,不进行中药处理)、实验组(加细胞加中药处理)。荧光定量PCR和Western blot分别检测Survivin、Bcl-2和Caspase-3的mRNA和蛋白表达。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,阴性对照组细胞在24、48、72 h的吸光度值明显升高,细胞凋亡率下降,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量上调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量下调,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);而健脾益肾方处理的实验组24、48、72 h的吸光度值均显著降低,细胞凋亡率显著上升,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量下调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量上调,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:健脾益肾方可通过下调Survivin和Bcl-2、上调Caspase-3表达诱导NSCLC细胞凋亡,并抑制肿瘤细胞的增殖,进而抑制NSCLC的发展。     

清热解毒、散风除翳法对细菌性角膜炎的作用机制研究

目的:观察清热解毒、散风除翳法对细菌性角膜炎模型鼠的疗效及其作用机制。方法:将60只Wistar大鼠随机分为5组,即模型组、小剂量组、大剂量组、对照组以及空白组，每组12只大鼠。采用细菌性角膜炎动物模型症状评定观察清热解毒、散风除翳法的疗效,通过细菌清除率、角膜细菌菌落计数,光学显微镜观察大鼠角膜的病理组织学改变,并采用流式细胞仪检测CD4+,CD8+及CD4+/CD8+的水平讨论清热解毒、散风除翳法的作用机制。结果:1)清热解毒、散风除翳法可降低细菌性角膜炎性反应状评分,提高细菌清除率,改善角膜基质层的病理结构;2)清热解毒、散风除翳法可提高细菌性角膜炎模型鼠外周血血CD4+、CD8+的表达水平,具有剂量依赖性(P<0.05),CD4+/CD8+比值相对稳定,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:清热解毒,散风除翳法能有效改善细菌性角膜炎,其作用机制可能与上调大鼠外周血中CD4+,CD8+含量有关。     

肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠实验模型研究进展

溃疡性结肠炎(UC)目前病因尚不十分清楚,病程漫长,反复发作。情志因素在溃疡性结肠炎的发生、发展过程中起着重要作用,建立正确合理的肝郁脾虚型溃疡性结肠炎动物模型对研究溃疡性结肠炎具有非常重要的意义。文章总结了近年来中医传统病因法、西医病因病理法、中西医病证结合法等建立肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠模型的原理、方法(包括具体剂量范围、时间)及其优缺点,探讨了当前存在的问题,以期为建造最正确合理的肝郁脾虚型溃疡性结肠炎提供可能。