基于网络药理学和体内实验验证霍山石斛治疗胃溃疡的作用机制

目的 通过网络药理学方法及体内实验研究探讨霍山石斛治疗胃溃疡（GU）的作用机制。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）数据库及文献中收集建立霍山石斛的成分库，寻找其主要活性化合物，并通过TCMSP等数据库预测作用靶点。从GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、DisGeNET等数据库中筛选GU相关基因，将成分靶点与疾病基因交集后构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，并进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。根据预测结果采用苏木素-伊红（HE）染色法、免疫组化、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）等实验验证霍山石斛对乙酸诱导GU大鼠模型的影响。结果 筛选出霍山石斛63种有效成分，得到霍山石斛治疗GU的靶基因37个，PPI分析得到多个霍山石斛治疗GU的可能核心靶点，并通过作用于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、缺氧诱导因子-1（HIF-1）、肿瘤坏死因子（TNF）、核转录因子-κB（NF-κB）等信号通路和各种生物过程影响GU的发展。体内实验结果显示，霍山石斛可显著降低模型大鼠血清中白细胞介素-1β（IL-1β），白细胞介素-6（IL-6）及TNF-α等炎性因子的水平（P<0.05，P<0.01），增加溃疡边缘的胃血流量（GBF），增加溃疡边缘表皮生长因子（EGF），表皮生长因子受体（EGFR）的表达（P<0.01），显著下调GU大鼠胃组织中PI3K，Akt蛋白和mRNA的表达，上调人第10号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）蛋白和mRNA的表达（P<0.01）。结论 网络药理学分析及动物实验结果提示，霍山石斛可以通过调节EGFR/PI3K/Akt信号通路抑制组织炎症，增加溃疡边缘的胃微循环血流，促进细胞增殖和受损胃黏膜的修复。     

加减玉女煎治疗复发性口腔溃疡56例疗效体会

复发性口腔溃疡是以口腔黏膜出现孤立的、圆形或椭圆形浅表溃疡、烧灼样疼痛、反复发作为特征的一类疾病。目前复发性口腔溃疡的病因及发病机制仍不明确,治疗上虽然方法较多,但无特效药物。本次研究在临床中运用中药加减玉女煎治疗本病,取得了较好疗效。现报道如下。1资料与方法1.1一般资料选择2006年1月至2011年12月期间就诊于杭州市滨江浦沿街道社区卫生服务中心全科门诊患者56例复发性口腔溃疡,其中男性27例、女性29例;年龄16～70岁,平均(35.32±10.36)岁;反复口     

石斛合剂对老年糖尿病大鼠神经系统的保护作用

目的探讨石斛合剂对老年糖尿病大鼠神经系统的保护作用。方法对Wistar大鼠进行高糖高脂喂养16个月,建立老年糖尿病模型,进行石斛合剂序贯方临床等效药量灌胃治疗。取大鼠肝脏组织进行全基因组表达谱芯片及探索者蛋白芯片测试并进行数据分析。结果模型组大鼠与正常组存在差异的神经系统相关功能基因63个,分布于14个通路,其中经药物治疗"纠偏"基因49个。13种蛋白表达在治疗后有所改善,分别属于细胞因子、神经疾病特异基因、细胞骨架蛋白、铁转运相关蛋白等。结论石斛合剂序贯治疗后的糖尿病大鼠与正常大鼠在转录、蛋白组学的层面上更加接近,对神经系统直接相关的多条通路具有保护作用。     

流式细胞仪检测铁皮石斛核DNA初探

目的利用流式细胞仪建立一套快速检测铁皮石斛核DNA的方法,为铁皮石斛倍性育种提供技术支持。方法以二倍体铁皮石斛为试材,通过优化实验材料用量、提取液用量、离心时间、染色剂用量、染色时间对离体培养的铁皮石斛新鲜幼嫩叶片进行核DNA检测。结果表明铁皮石斛最佳流式细胞术条件为叶片150 mg、Otto提取缓冲液2 ml、2 000 r/min离心8 min、PI含量50μg/ml、孵化50min。碎片峰较少,变异系数(CV)低。结论筛选出了较为快速、准确的利用流式细胞仪检测铁皮石斛倍性的方法。     

金钗石斛总生物碱抗慢性应激诱导的大鼠焦虑作用及机制

目的通过慢性应激诱导大鼠焦虑模型,观察金钗石斛总生物碱(DNLA)的抗焦虑作用并探索其可能的作用机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为3组:空白对照组(C)、焦虑模型组(M)和模型给药组(M+DNLA),每组8只。采用慢性应激的方法诱导大鼠焦虑模型。M+DNLA组每天灌胃给予DNLA 20 mg·kg~(-1),C组和M组灌胃等体积的1%吐温80溶剂,连续给药28 d。高架十字迷宫实验(EPM)和旷场实验(OFT)检测大鼠焦虑行为。行为学实验结束后,麻醉,微透析,取材。尼氏染色法观察皮质、海马CA2区神经元和尼氏小体情况;高效液相色谱电化学技术检测前额叶皮层透析液、皮质组织、血清中5-羟色胺(5-HT)及其代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量;ELISA法检测皮层色氨酸羟化酶(TPH)、单胺氧化酶(MAO)活性及皮质酮(CORT)和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量;免疫组化法检测5-HT系统相关蛋白:突触囊泡单胺转运体(SLC18A1)、突触相关蛋白-25(SNAP25)、5-HT 1A受体(5-HT1AR)和5-HT转运体(SERT)的表达;HPA轴相关蛋白:促肾上腺皮质激素释放因子1受体(CRF1)、肾上腺皮质激素受体(ACTHR)和糖皮质激素受体(GR)的表达;γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)和N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR1)蛋白的表达。结果与C组比较,M组大鼠在EPM开放臂活动距离、进入次数明显下降,OFT中央区域活动距离、运动总路程显著下降;皮质和海马CA2区神经元及尼氏小体数量明显减少;前额叶透析液、皮质和外周血清中5-HT和5-HIAA含量明显增加;TPH和MAO活性显著升高,CORT和ACTH含量显著升高;SLC18A1,SNAP25,5-HT1AR,GR和GABAAR蛋白表达明显降低;SERT,CRF1,ACTHR和NMDAR1蛋白表达明显增加。与M组比较,DNLA给药组EPM开放臂活动距离、进入次数明显增加,OFT中央区域距离、活动总路程显著上升;皮质和海马CA2区神经元及尼氏小体数量显著增加;前额叶透析液、皮质组织和血清中5-HT和5-HIAA含量明显降低;TPH和MAO活性,CORT和ACTH含量显著降低;SLC18A1,SNAP25,5-HT1AR,GR和GABAAR蛋白表达明显增加;SERT,CRF1,ACTHR和NMDAR1蛋白表达明显降低。结论 DNLA对慢性应激诱导的大鼠焦虑行为具有改善作用,其作用机制与调节5-HT系统,抑制HPA轴亢进以及调节GABAAR和NMDAR1蛋白表达有关。     

金钗石斛总生物碱抑制海马tau蛋白的过度磷酸化

目的研究金钗石斛总生物碱(DNLA)对衰老小鼠及痴呆模型大鼠脑内tau蛋白过度磷酸化的影响。方法以SAMP8小鼠作为衰老小鼠模型,SAMR1小鼠作为正常对照,自4月龄始给予DNLA(20和40 mg·kg~(-1)),每天灌胃1次,连续6个月;SD大鼠双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)作为痴呆模型,侧脑室注射溶媒大鼠作为正常对照,术后给予DNLA,每天1次,连续28 d。Morris水迷宫及Y迷宫检测各组动物学习记忆功能;HE和Nissl染色观察海马神经元形态及数量;Western印迹法检测海马组织tau蛋白表达及Ser199,Ser396,Ser404,Ser422和Thr231位点的磷酸化水平;GSK-3β蛋白表达及Ser9和Y216位点的磷酸化水平;以及PP2A的蛋白表达水平。结果 DNLA可改善SAMP8小鼠和STZ大鼠的学习记忆功能(P<0.05);减少模型小鼠和大鼠海马组织神经元形态的损伤和数量的丢失(P<0.01);并降低tau蛋白Ser199,Ser396,Ser404,Ser422和Thr231位点的磷酸化水平(P<0.05),提高GSK-3β在Ser9位点的磷酸化水平(P<0.05),对GSK-3β的Y216位点磷酸化、PP2A、总tau蛋白及总GSK-3β的蛋白表达无明显的影响。结论 DNLA对脑内tau蛋白的过度磷酸化的具有抑制作用。     

石斛枸杞颗粒对小鼠免疫功能的影响

目的 研究石斛枸杞颗粒对小鼠免疫功能的影响。 方法 160只小鼠采用随机数字表法分为阴性对照组、石斛枸杞颗粒高、中、低剂量组(7.5 g/kg BW、5.0 g/kg BW、2.5 g/kg BW),每组40只,连续灌胃30 d,每日1次。采用耳肿胀法观察其对小鼠细胞免疫功能的影响;检测血清溶血素水平、抗体生成细胞数观察其对小鼠体液免疫功能的影响;采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验观察其对小鼠吞噬功能的影响;采用乳酸脱氢酶(LDH)测定法观察其对小鼠NK细胞活性的影响。 结果与阴性对照组比较,石斛枸杞颗粒中、低剂量组能明显促进小鼠迟发型变态反应(P<0.05)、高剂量组可提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数(P<0.05),高、中剂量组可显著增强NK细胞活性(P<0.05);但各剂量组对小鼠体质量、胸腺/体质量比值、脾脏/体质量比值、抗体生成细胞数、血清溶血素水平无明显影响(P＞0.05)。     

金钗石斛多糖通过下调CYP2E1表达改善非酒精性脂肪肝病大鼠症状

目的 建立非酒精性脂肪肝病（NAFLD）大鼠模型,观察金钗石斛多糖对肝细胞色素P4502E1蛋白及mRNA表达的影响。方法 选用SPF级,雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、多烯磷脂酰胆碱组、金钗石斛多糖低、中和高剂量组6组,每组10只。高脂高糖饮食构建非酒精性脂肪肝病大鼠模型,给予相应治疗6周后,观察大鼠一般情况,提取肝脏检测肝脏病理学、肝组织CYP2E1蛋白和mRNA表达,收集血液检测天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）活力。 结果 模型组出现一定的脂肪样变性,部分肝细胞有炎性因子浸润;与模型组相比,各治疗组均有改善。与正常组相比,模型组肝指数、AST、ALT、TG、TC、CYP2E1蛋白及mRNA明显升高,CAT和SOD明显降低（各P＜0.05）;与模型组相比,金钗石斛多糖三个剂量组和多烯磷脂酰胆碱组AST、ALT、TG、TC、CYP2E1蛋白及mRNA均明显降低（P＜0.05）,CAT和SOD明显升高（P＜0.05）,且金钗石斛多糖高剂量组TG和TC明显低于多烯磷脂酰胆碱组（P＜0.05）,金钗石斛多糖三个剂量组CYP2E1蛋白及mRNA明显低于多烯磷脂酰胆碱组（P＜0.05）。结论 金钗石斛多糖可明显降低NAFLD大鼠肝脏中CYP2E1蛋白及mRNA表达,进而改善肝功能和血脂水平,提高CAT和SOD活力,最终有效缓解NAFLD大鼠症状。     

贵阳中药材种植面积达6.5万亩

<正>笔者日前从贵阳市农委获悉,截至目前,该市完成中药材种植面积6.5万亩。主要分布在开阳、修文、息烽3县和清镇市,其中重点品种有修文益母草、丹参、乌当铁皮石斛、清镇天麻、息烽瓜蒌等。据介绍,为加快中药材产业发展,该市加大财政投入力度,市财政每年安排专项资金500万元,作为中药材产业发展的引导资金,通过以奖代补、先建后补方式,重点支持中药材规范化种植、良种选育与繁育及种子种苗基地建设、新技术推广、病虫害