两种石斛的水溶性多糖和碱溶性多糖体外抗氧化活性的研究

目的 比较金钗石斛、铁皮石斛的水溶性多糖和碱溶性多糖的抗氧化活性.方法 紫外分光光度法测定两种石斛多糖抗氧化自由基的清除率.结果 金钗石斛水溶性多糖和碱溶性多糖、铁皮石斛水溶性多糖和碱溶性多糖对羟自由基的清除率分别是112.69％、52.24％、69.40％、113.43％,对H2O2的清除率分别是38.87％、17.51％、18.69％、37.09％,对DPPH·的清除率分别是54.74％、48.59％、84.04％、78.02％.结论 金钗石斛和铁皮石斛具有一定的体外抗氧化能力.其中,金钗石斛的水溶性多糖的抗氧化能力强于碱溶性多糖.而铁皮石斛的碱溶性多糖的抗氧化能力较强于水溶性多糖.     

铁皮石斛药材含量和检查项方法优化及不同产地品质的比较

目的 优化药典中甘露糖含量测定及甘露糖与葡萄糖面积比的色谱条件,同时比较浙江省不同产地铁皮石斛药材质量,为铁皮石斛适宜产地的选择提供依据。方法 以中国药典2010年版中铁皮石斛甘露糖含量测定方法为基础,对色谱条件进行优化,并用优化后的方法对不同产地铁皮石斛药材质量进行分析比较。结果 优化后的色谱条件：Diamonsil C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.02 mol·L^-1的乙酸铵溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~60 min,14%A;60~61 min,14%→25%A;61~69 min,25%;69~70 min,25%→14%A;70→80 min,14%A),流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为250?nm,柱温为30 ℃,进样量为10 μL。优化后的方法实现了PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)与甘露糖,PMP与样品杂质,盐酸氨基葡萄糖与样品杂质的基线分离。浙江省不同产地铁皮石斛药材在甘露糖含量及检查项比值上有一定的差异,其中富阳铁皮石斛的甘露糖含量最高,为40.8%,萧山铁皮石斛甘露糖与葡萄糖比值最高,为3.9。结论 该方法重复性好,结果准确可靠,可以用于铁皮石斛药材的质量控制。浙江省内不同产地的铁皮石斛质量存在一定的差异,其中建德最适宜人工栽培。     

流苏石斛和其它黄草类石斛HPLC特征图谱的比较研究

摘要：目的 建立流苏石斛HPLC特征图谱,并初步比较黄草类石斛（金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛）HPLC特征图谱的差异。方法 采用HPLC特征图谱技术,建立流苏石斛特征图谱分析方法,并建立黄草类石斛特征图谱分析方法,采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A版）进行相似度分析。结果 建立了流苏石斛的HPLC特征图谱,标记出9个共有峰,相似度为0.837~0.992。金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛这三种石斛所含化学成分存在很大差异, 不过金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛都检测出含有石斛酚。结论 建立流苏石斛HPLC特征图谱的方法稳定可靠、重复性好。金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛三种石斛的HPLC特征图谱分析方法在一定程度上能够反映三种石斛主要化学成分的种类和相对含量差异,为流苏石斛和另外两种黄草石斛的鉴别提供依据。     

鼓槌石斛对小鼠非增殖性糖尿病视网膜病变的改善作用及其机制研究

目的观察鼓槌石斛乙醇提取物(ethanol extract of Dendrobium chrysotoxum,EEDC)对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病小鼠非增殖性糖尿病视网膜病变(NPDR)的改善作用及其机制。方法采用STZ诱导小鼠发生糖尿病,进而建立糖尿病并发症NPDR实验动物模型,再给予EEDC进行干预。采用视网膜组织伊文思蓝渗漏实验观察NPDR小鼠中血-视网膜屏障(BRB)的破坏情况;采用real-time PCR(RT-PCR)检测视网膜组织中白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)及早期生长反应因子(Egr-1)、组织因子(TF)、纤溶酶原激活物抑制剂1(Serpine 1)的基因表达;进一步采用酶联免疫实验(ELISA)检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine 1的量。结果与对照组相比,模型组小鼠视网膜组织伊文思蓝渗漏量明显增加,EEDC能够减少视网膜组织伊文思蓝渗透量;EEDC能够显著降低模型小鼠视网膜组织中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α及Egr-1、TF、Serpine 1的基因表达;EEDC能够明显下调模型小鼠血清中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine 1的量。结论 EEDC具有改善STZ诱导小鼠NPDR的作用,其机制为通过抑制NPDR小鼠视网膜和血清中增加的炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及与凝血/纤溶相关基因TF、Serpine 1的基因表达,缓解BRB的破坏,从而发挥改善NPDR的作用。     

铁皮石斛优良亲本杂交F1代苗期选择

目的:揭示铁皮石斛优良种源杂交F_1代苗期多糖与生物碱含量变异规律,早期选择F_1代优良家系。方法:利用4个种源26个优良亲本设计得到26个交配组合,用苯酚-硫酸法与酸性染料比色法分别测定F_1代苗期总多糖与总生物碱含量,结合前期农艺性状研究结果,运用相关性分析和聚类分析方法筛选优良家系。结果:不同交配组合间多糖与生物碱含量差异极显著(P0.01),半同胞家系间多糖含量差异显著(P0.05),生物碱含量差异不显著,全同胞家系内多糖与生物碱变异显著小于半同胞家系;铁皮石斛苗期叶片数量与多糖含量,叶长宽比、根冠比与生物碱含量呈显著正相关关系;26个交配组合划分为5个类群,其中类群Ⅱ植株综合性状表现较好。结论:铁皮石斛F_1代优良家系选择时,应同时重视父母本的选择,在全同胞家系间选择比半同胞家系能获得更好的遗传增益与家系内稳定性;结合前期农艺性状成果,筛选出6个苗期优良家系(66×9,68×2,91×69,66×65,69×91,66×17),表现出苗高,茎粗且分枝少,叶片大而狭长,根系较发达,多糖含量高等特点,为后期选择奠定了基础。     

响应面法优选铁皮石斛总多糖脱蛋白工艺

目的:优选铁皮石斛总多糖的胰蛋白酶联合Sevage法脱蛋白工艺,为该有效部位的深度开发和综合利用提供参考。方法:以总多糖保存率和蛋白脱除率为评价指标,通过单因素试验比较Sevage法、木瓜蛋白酶法、胰蛋白酶法和胰蛋白酶联合Sevage法;以蛋白脱除率为指标,酶解时间、酶用量、酶解温度和粗多糖溶液与Sevage试剂体积比为考察因素,利用BoxBehnken响应面法优化条件。结果:胰蛋白酶联合Sevage法具有较高的总多糖保存率及蛋白脱除率;最佳工艺条件为酶解时间1.5 h,酶用量0.21 g·m L-1,酶解温度63.25℃,总多糖溶液-Sevage试剂(4.27∶1);蛋白脱除率(87.15±7.93)%,总多糖保存率(81.32±8.54)%。结论:不同方法对铁皮石斛总多糖的脱蛋白效果有明显差异,胰蛋白酶联用Sevage法的效果最佳。     

铁皮石斛现代研究进展

铁皮石斛为中药优良品,应用历史悠久,化学成分多样,药理功效显著。通过检索近些年关于铁皮石斛化学成分、组织栽培、质量评价、药理学研究与临床应用等方面研究文献,发现铁皮石斛主要有生物碱、多糖、氨基酸、菲类化合物等成分,药理作用主要有增强免疫、抗肿瘤作用、抗疲劳、抗氧化、益肝胃、降血糖、养阴生津等功效。目前以铁皮石斛为基础的药品、保健品等产品开发成为研究热点,本文概述近些年铁皮石斛相关研究状况,为铁皮石斛的合理开发利用与保护提供方向和与依据。     

铁皮石斛枸杞黄精片补肾壮阳作用的研究

目的:研究铁皮石斛枸杞黄精片的补肾壮阳作用。方法:采用去势幼年大鼠模型,观察给予铁皮石斛枸杞黄精片对大鼠体质量、附性器官系数以及血浆促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、睾酮(T)水平的影响;采用氢化可的松造小鼠肾阳虚模型,观察给予铁皮石斛枸杞黄精片对小鼠体质量、低温游泳时间以及相关脏器系数的影响。结果:铁皮石斛枸杞黄精片0.6、0.3、0.15 g/kg剂量给药3周,能提高去势幼年大鼠前列腺+精囊以及提肛肌系数,降低血浆中FSH、T激素水平,但对体质量以及血浆LH水平无明显影响;0.8、0.4、0.2g/kg 3个剂量给药15 d,能明显延长氢化可的松诱发肾阳虚模型小鼠低温游泳时间,并使脾脏、肾上腺系数略有降低,高剂量组睾丸+附睾系数略有增加,但高剂量抑制该模型小鼠的体质量增长。结论:铁皮石斛枸杞黄精片对去势幼年大鼠模型有部分保护作用,并能部分改善氢化可的松诱发肾阳虚模型小鼠的肾阳虚指标。     

铁皮石斛内生真菌对宿主组培苗生长与代谢成分的影响

为揭示初筛所得7株活树附生铁皮石斛内生真菌对宿主生长及代谢成分的影响,该研究观察测量了接菌与未接菌铁皮石斛组培苗形态特征与农艺性状,采用苯酚-硫酸法与热浸法测定组培苗茎总多糖含量与浸出物含量,柱前衍生HPLC分析茎多糖中单糖组成,HPLC分析茎醇溶性成分。研究表明,供试7个菌株可改变铁皮石斛组培苗茎节变紫进程,并影响茎糖类及醇溶性成分组成及含量积累,除DO34外均能促进组培苗生长与提高多糖含量,除DO12外均能促进甘露糖含量积累,DO18,DO19,DO120可促进醇溶性浸出物含量积累,综合生长及代谢成分多项指标筛选出DO14,DO18,DO19与DO120 4个优良菌株,为铁皮石斛内生真菌和宿主相互作用机制研究与微生物工程研究提供了菌种材料与研究基础。     

基于多糖和黄酮类成分的铁皮石斛优良内生真菌筛选

为了揭示铁皮石斛内生真菌与功效成分的关系,该研究利用HPLC和紫外分光光度法测定21种铁皮石斛内生真菌菌丝及发酵液提取物中糖类和黄酮类成分。结果表明:21个供试菌株发酵产物乙酸乙酯提取物中均可检测到黄酮类成分,对比色谱保留时间和紫外光谱特征,发现DO49可产柚皮素,DO23,DO81,DO83可产芦丁;21个供试菌株发酵产物水提取物中均检测到多糖,但不同菌株单糖的组成存在差异,参照单糖种类以及甘露糖/葡萄糖的峰面积比,筛选与铁皮石斛多糖相关的优良菌株DO23,DO26,DO81,DO54,DO55,DO83。综合糖类和黄酮类两类成分,筛选出优良菌株DO23,DO81,DO83,既能产生与铁皮石斛相同的黄酮成分,又能产生单糖组分与铁皮石斛相近的多糖。