金钗石斛总生物碱改善链脲佐菌素所致大鼠海马神经元损伤

目的观察金钗石斛总生物碱(DNLA)对侧脑室内注射链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠海马神经元损伤的作用。方法将50只雄性SD大鼠随机分为5组:空白对照组、空白给药组、模型组、低剂量组和高剂量组(每组n=10)。双侧侧脑室注射STZ建立大鼠海马神经元损伤模型,空白给药组、高剂量组每日1次灌胃DNLA 40 mg·kg~(-1),低剂量组每日1次灌胃DNLA 20 mg·kg~(-1),空白对照组及模型组灌胃等体积溶媒,连续给药28 d。Nissl染色观察海马神经元存活情况,Western blot检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、Tau蛋白、蛋白磷酸酶2A-α(PP2A-α)蛋白表达以及p-Ser9-GSK-3β、pY216-GSK-3β、pSer199-Tau、p-Ser396-Tau、p-Ser404-Tau、p-Ser422-Tau、p-Thr231-Tau水平。结果模型组较空白对照组大鼠海马CA3区存活神经元数目明显减少(P<0.01),海马p-Ser9-GSK-3β水平降低(P<0.05),pSer199-Tau、p-Ser396-Tau、p-Ser404-Tau、p-Ser422-Tau、p-Thr231-Tau水平增高(P<0.05)。高剂量组较模型组大鼠海马CA3区存活神经元数目明显增加(P<0.01),海马p-Ser9-GSK-3β水平上调及pSer199-Tau、p-Ser396-Tau、p-Ser404-Tau、p-Ser422-Tau、p-Thr231-Tau水平降低(P<0.05)。结论DNLA明显改善STZ诱导的大鼠海马神经元的损伤和丢失,并可激活GSK-3β,抑制Tau蛋白过度磷酸化。     

人参皂甙Rb1抑制Aβ25-35诱导皮层神经元tau蛋白的过度磷酸化

目的：探讨人参皂甙Rb1对凝聚态Aβ25-35诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化的影响及其可能的作用机制。方法通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠皮层神经元tau蛋白在Ser396、Ser199／202和Thr231位点的磷酸化水平、总tau蛋白水平和糖原合成酶3B(GSK-3β)的蛋白表达水平。结果20μmol／L     

p25/cdk5可能参与人参皂苷Rb1减轻Aβ_(25-35)诱导的tau蛋白过度磷酸化

目的探讨在Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对周期依赖性蛋白激酶(cyc lin-de-pendent k inase 5,CDK 5)的激动亚基p35/p25的影响。方法通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠皮层神经元CDK 5的两个亚基cdk5和p35/p25的蛋白水平,以及CDK 5的磷酸化底物tau蛋白在Ser199/202、Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平。结果凝聚态Aβ25-35(20μmol.L-1)作用于皮层神经元12 h,可使皮层神经元中p25的数量增多,以及tau蛋白在Ser199/202、Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平增高,但对cdk 5亚基表达水平影响并不明显。Rb1和calpain特异性抑制剂calpeptin可减少皮层神经元p25的生成,同时人参皂苷Rb 1和CDK 5特异性抑制剂roscovitine可减轻凝聚态Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白的过度磷酸化水平。结论p25/cdk 5可能参与人参皂苷Rb1减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。     

GJ-4对冈田酸诱发小鼠学习记忆障碍的神经保护作用和机制研究

GJ-4是从中药栀子中提取出的藏红花色素类活性成分,前期研究发现GJ-4对Aβ诱发的小鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用。本实验采用小鼠侧脑室注射冈田酸(okadaic acid, OA)建立记忆损伤模型(实验中所有操作均获得中国医学科学院北京协和医学院实验动物伦理委员会的批准,批准号:00000318),探讨GJ-4对Tau蛋白过度磷酸化引起神经元病变的改善作用及其机制。小鼠OA侧脑室注射后,连续16天灌胃给予GJ-4。结果显示, GJ-4可显著改善OA诱发的小鼠学习记忆障碍,同时减少小鼠海马区神经元尼氏小体的丢失。GJ-4可提高蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase 2A, PP2A)活性并抑制糖原合成酶激酶-3β (glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)表达,进而降低Tau蛋白Ser396、Thr231和Ser404位点的磷酸化水平。进一步研究发现, GJ-4还可降低OA小鼠脑内氧化应激水平和海马星形胶质细胞活化介导的神经炎症而抑制神经元凋亡,最终发挥改善小鼠学习记忆障碍的作用。以上研究表明, GJ-4具有开发成为治疗阿尔茨海默症...     

NGF对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化作用的影响

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法用线栓法制作局灶性脑缺血/再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Westernblot和图像分析方法检测大鼠海马CA1区tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达,以及NGF对tau蛋白过度磷酸化的影响。结果缺血/再灌注组海马CA1区tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白明显升高(P<0·05);NGF组大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平明显低于缺血/再灌注组,总tau也下降(P<0·05)。结论NGF明显减轻局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化程度,降低tau蛋白磷酸化水平可能对缺血神经元起保护作用。     

山茱萸环烯醚萜苷对APP/PS1/tau小鼠脑内阿尔茨海默病样病理变化的作用机制

目的阿尔茨海默病(AD)最典型的病理变化是β-淀粉样蛋白(Aβ)在脑部沉积形成的老年斑和过度磷酸化的tau蛋白聚集导致的神经纤维原缠结(NFT),同时伴随氧化应激、神经炎症、突触损伤、神经元变性或死亡等。本研究利用APP/PS1/tau三转基因(3x Tg)模型小鼠,观察山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对小鼠脑内多种病理变化的影响。方法 16月龄3x Tg模型小鼠每天灌胃给予CIG 100或200 mg·kg~(-1)至18月龄。采用刚果红染色法观察3x Tg小鼠海马中老年斑沉积;Western蛋白印迹法检测tau蛋白在Thr212和Thr217位点的磷酸化水平;免疫组化法观察小鼠海马中脑源性神经营养因子(BDNF)的表达和分布;实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)检测小鼠BDNF转录水平;尼氏染色法观察小鼠海马中尼氏小体的变化。结果 18月龄模型组小鼠与对照组相比,Aβ淀粉样斑块沉积明显增加,而给予CIG 100或200 mg·kg~(-1)均能不同程度降低脑内斑块负荷。模型组小鼠tau蛋白在Thr217位点的磷酸化水平明显升高,而在Thr212位点的磷酸化水平无明显升高;CIG治疗组能明显拮抗tau蛋白在Thr217位点的过度磷酸化。模型组小鼠海马BDNF蛋白和m RNA的水平均降低,CIG能够明显恢复BDNF蛋白和m RNA表达;模型组小鼠海马内尼氏小体数量减少,染色变浅,排列散乱,CIG有增高尼氏体数量的趋势。结论 CIG能够减少Aβ在脑内的沉积和tau蛋白异常过度磷酸化,恢复BDNF在脑内的表达,并且保护神经元。     

Ser~(202)/Thr~(205)位点磷酸化tau在神经元中的定位

目的观察Ser202/Thr205位点的过度磷酸化tau在神经元中的定位和聚集情况。方法取孕18 d SD胎鼠皮层神经元进行原代培养,于培养第9天加入冈田酸(okadaic acid,OA)处理12 h以诱导tau蛋白磷酸化;同时用OA诱导SH-SY5Y细胞;观察tau磷酸化后神经元形态的变化;用AT-8抗体免疫荧光染色观察Ser202/Thr205位点磷酸化tau的定位和聚集;同时应用AT-8抗体和Tau-5抗体检测tau蛋白Ser202/Thr205位点的磷酸化水平变化情况。结果经过Anti-NeuN和Anti-GFAP免疫染色鉴定,孕18 d胎鼠皮层神经元选择性原代培养成功。OA处理12 h以后,Ser202/Thr205位点磷酸化tau的水平明显增加,且出现高分子量的寡聚体;免疫荧光染色发现,Ser202/Thr205位点磷酸化的tau在原代培养神经元的胞质聚集;而OA处理的SH-SY5Y细胞,Ser202/Thr205位点磷酸化的tau却定位于细胞核。同时发现OA处理的原代神经元突起明显减少或消失。结论 OA能够诱导原代培养的胎鼠神经元tau蛋白在Ser202/Thr205位点过度磷酸化,且该磷酸化tau在不同类型或来源的神经元中的定位不同。     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及tau蛋白磷酸化的影响

目的 探究电针对阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆能力改善的情况以及对大鼠海马tau蛋白磷酸化的影响.方法 将雄性SD大鼠30只随机分成正常组、模型组和电针组,每组10只.除正常组外,其余两组侧脑室各注射β淀粉样蛋白多肽片段Aβ25-35制备动物模型.电针组治疗分为3个疗程.以Morris水迷宫来评价大鼠的学习和记忆能力,并且使用Western blot法来检测大鼠海马区Tau蛋白和其丝氨酸198位点、404位点磷酸化水平,利用软件分析测定Western blot图像条带的光密度（OD）值.结果 模型组Morris水迷宫试验逃避潜伏期比正常组长（均P 〈 0.05）,电针组与模型组差异有统计学意义.3个组之间海马区tau蛋白总量的差异无统计学意义,与模型组比较,电针组丝氨酸的198和404位点的tau蛋白磷酸化tau蛋白水平具有降低（均P 〈 0.05）的趋势.结论 电针治疗显著并且能减轻AD大鼠海马tau蛋白磷酸化水平,改善AD模型大鼠学习记忆能力.     

渥曼青霉素在体诱导tau蛋白阿尔采末样磷酸化以及褪黑激素的拮抗作用

目的:研究渥曼青霉素能否在体诱导tau蛋白阿尔采末样磷酸化以及褪黑激素的对这种效应的拮抗作用.方法:采用立体定位技术向大鼠侧脑室注射渥曼青霉素和褪黑激素,免疫组织化学和免疫印迹技术观察磷酸化tau蛋白的分布及含量,电子显微镜观察轴突结构.结果:注射渥曼青霉素(10μmol·L~(-1))6h后,海马CAI锥体神经元tau蛋白的Ser-396/404位点被磷酸化,神经元轴突膨胀,部分髓鞘脱落.免疫印迹结果表明,渥曼青霉素注射后1h到6h,tau蛋白的Ser-396/404位点磷酸化逐渐增加,6h到24h逐渐减少,6h为tau蛋白的Ser-396/404磷酸化的峰值.提前12h注射褪黑激素(10μmol·L~(-1)和100μmol·L~(-1)),可部分对抗渥曼青霉素(10μmol·L~(-1))注射6h后诱导的tau蛋白Ser-396/404磷酸化.结论:在体注射渥曼青霉素可诱导大脑tau蛋白阿采末样磷酸化,褪黑激素可部分拮抗这一损伤效应.     

人参皂苷Rg1对Aβ_(25-35)诱导大鼠海马神经元tau蛋白异常磷酸化的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对Aβ2535所致大鼠海马神经tau蛋白异常磷酸化的抑制作用及其可能机制。方法应用脑立体定向技术向成年大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ25355nmol制备AD样大鼠模型,术后分别给予腹腔内注射不同浓度的人参皂苷Rg1(625、125、25μmol·kg-1)处理,14d后处死,采用镀银染色方法观察海马组织神经元病理改变;免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹技术显示大鼠脑内[pS396]tau、[pSpS199/202]tau、[pT231]tau的表达水平情况,以及总tau蛋白的水平(tau5);免疫蛋白印迹技术检测海马组织中GSK3β和磷酸化GSK3β的水平变化。结果凝聚态Aβ2535注射组神经元纤维走行紊乱,增粗、肿胀密集成宽带状,轴突深染;而人参皂苷Rg1对神经元具有明显的保护作用,脑内总tau的水平下降,[pS396]tau、[pSpS199/202]tau、[pT231]tau的表达明显低于Aβ2535注射组(P<001),以25μmol·kg-1保护作用最明显;GSK3β和磷酸化GSK3β的水平亦明显低于Aβ2535注射组,与正常和假注射组差异无显著性(P>005),以25μmol·kg-1作用最明显。结论人参皂苷Rg1对Aβ2535诱导的AD样大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能是通过阻断GSK3β的活性而降低磷酸化tau蛋白的表达而实现的。     

胰岛素对AD样小鼠学习记忆的影响及其机制

【摘要】目的 研究胰岛素对阿尔茨海默病（AD）样小鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法 将21只小鼠随机分为对照(CON) 组、模型（链脲佐菌素,STZ）组和胰岛素治疗(INS) 组,每组7只,后2组小鼠脑室内注射STZ建立 AD模型,INS组小鼠皮下注射胰岛素持续30 d。Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,Western blotting检测Tau和神经丝（NFs）蛋白的磷酸化水平,荧光染料Fluoro-Jade B（FJB）标记退化神经元。结果 与CON组相比,STZ组小鼠平均逃避潜伏期和路径长度明显增加(P < 0.05)、穿越隐匿平台次数明显减少(P < 0.05),小鼠脑内Tau蛋白在Ser199/ 202、Ser396/404、Thr212和Thr205位点的磷酸化水平以及NFs蛋白的磷酸化增加(P < 0.05),FJB标记的小鼠海马CA1 区平均累积光密度(IOD)较CON组明显增加(P < 0.001);与STZ组相比,INS组小鼠学习记忆改善,逃避潜伏期和路径长度明显减少(P < 0.05)、穿越隐匿平台次数明显增加(P < 0.05),Tau蛋白特异性位点和NFs蛋白的磷酸化作用明显降低(P < 0.05),FJB标记的小鼠海马CA1区平均累积分光密度(IOD)明显减少(P < 0.001)。结论 胰岛素能改善STZ脑室内注射的AD样小鼠学习记忆减退,可能与降低Tau和NFs蛋白的过度磷酸化和神经细胞退行性变有关。     

氯化锂抑制β-淀粉样蛋白诱导细胞Tau蛋白磷酸化

目的探讨GSK-3β抑制剂氯化锂(LiCl)在β-淀粉样蛋白25～35片断(Aβ25-35)诱导的细胞Tau蛋白磷酸化中的作用及机制。方法MTT法观察不同浓度的LiCl(1、5、10、20mmol.L-1)单独作用24h,对SH-SY5Y细胞存活率的影响;20μmol.L-1的凝聚态Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞不同时间点,蛋白免疫印迹法研究Tau蛋白磷酸化位点(Ser199、Ser396及Tau1)水平的变化;LiCl(20mmol.L-1)预处理细胞1h后,观察Aβ的作用有无变化及可能的作用机制。结果不同浓度的LiCl作用24h后,MTT法示细胞存活率无明显变化(P>0.05);20μmol.L-1Aβ25-35作用不同时间点后,Tau蛋白在Ser396、Ser199位点的磷酸化水平在3h逐渐增加,6h达到最高峰,12h后又逐渐下降,在这3个时间点的增加量均具有统计学意义(P<0.05),而对非磷酸化Tau1没有影响(P>0.05);LiCl预处理可抑制Aβ25-35的作用(P<0.05),并可诱导失活形式的GSK-3β在Ser9位点的磷酸化(p-GSK-3βSer9)表达增高。结论GSK-3β参与了Aβ25-35诱导细胞Tau蛋白磷酸化的作用,LiCl可通过诱导失活形式的p-GSK-3βSer9表达增高而抑制GSK-3β的活性,进而抑制Aβ诱导的细胞Tau蛋白磷酸化。该实验为研究AD的发病机制及探索有效治疗药物提供了重要的理论基础。     

二精丸影响肾阴虚动物记忆障碍机制的实验研究

目的 探讨二精丸有效部位影响肾阴虚模型大鼠学习记忆障碍机制.方法 使用附子、肉桂等热性中药复制大鼠肾阴虚记忆障碍模型.二精方总黄酮和总多糖灌胃给药结束后Morris水迷宫法测定各组的学习记忆能力,采用免疫组织化学法检测大鼠海马BCL-2、Bax表达及Tau蛋白异常磷酸化水平.结果 二精丸总黄酮和总多糖能显著恢复海马区BCL-2和Bax表达,能显著抑制模型大鼠海马区Tau蛋白Ser199/202、Ser396两个磷酸化位点异常磷酸化.结论 二精丸总黄酮和总多糖可能通过恢复海马区BCL-2和Bax表达和抑制模型大鼠海马区Tau蛋白Ser199/202、Ser396两个磷酸化位点异常磷酸化来提高肾阴虚模型大鼠的学习记忆能力.     

复智散通过细胞周期依赖性蛋白激酶5通路减轻皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的探讨复方中药复智散(FZS)能否通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)通路,减轻Aβ_(25-351)诱导的新生鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。方法选用24 h内新生Wistar大鼠,分离纯化皮层神经元,进行体外培养。皮层神经元在体外培养7 d后,应用20μmol·L-1Aβ_(25-351)作用于皮层神经元24 h。药物治疗组则应用FZS(20 mg·L~(-1))、CDK5抑制剂Roscovitine(15μmol·L~(-1))、钙蛋白酶(calpain)制剂Calpeptin(20μmol·L~(-1))预处理24 h,然后用20μmol·L~(-1)Aβ_(25-351)作用24 h。用Western blot检测Tau蛋白Ser396、Ser202和Thr231位点磷酸化水平和CDK5的激活蛋白p25/p35的蛋白水平;荧光酶标仪测定荧光强度来反映calpain活性;免疫沉淀法检测CDK5激酶活性。结果 20μmol·L~(-1)Aβ_(25-351)作用于皮层神经元24 h后,Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位点磷酸化水平增加,CDK5激酶活性升高,CDK5激活蛋白p25水平升高,calpain活性升高。20 mg·L-1FZS治疗组则明显抑制了Aβ_(25-351)导致的Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位点磷酸化水平增加,抑制了CDK5激酶活性、p25蛋白水平以及calpain活性升高。CDK5抑制剂roscovitine和calpain抑制剂calpeptin作为阳性对照药物也显示了抑制Tau蛋白过度磷酸化的作用。结论复智散可能通过calpain-p25/CDK5通路抑制Aβ_(25-351)导致的皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。     

Forskolin与链脲佐菌素诱导的tau蛋白过度磷酸化介导的神经元焦亡在阿尔茨海默病中的机制

目的焦亡是一种程序性的细胞死亡方式,特征为依赖胱天蛋白酶(caspase)1的激活,并伴有促炎因子释放。阿尔茨海默病(AD)病程发展的进程中,Aβ激活细胞焦亡通路为AD的主要病理改变之一。而tau蛋白过度磷酸化作为AD的另一主要病理改变,其对焦亡有何影响目前少有报道。因此,我们提出假设"过度磷酸化tau蛋白通过激活炎症小体-胱天蛋白酶1途径,介导神经元焦亡"。方法分别向大鼠侧脑室注射弗斯可林(forskolin,FSK)和链脲佐菌素(STZ)建立2种大鼠脑内tau蛋白过度磷酸化模型;使用FSK和STZ处理PC12细胞,在体外进一步验证tau蛋白与细胞焦亡之间的关系。并且通过行为学、免疫荧光、MTT比色法、酶联免疫吸附、蛋白活性测试和基因沉默等方法,检测tau蛋白及焦亡相关蛋白的表达水平,考察过度磷酸化的tau蛋白对细胞活性,痴呆模型大鼠空间记忆能力以及焦亡相关蛋白表达水平的影响。结果抑制胱天蛋白酶1或IL-1β/IL-18的活性,不仅可以显著改善FSK和STZ诱导的PC12细胞损伤,还可以改善痴呆模型大鼠的空间认知障碍,降低tau蛋白的表达水平。FSK诱导的痴呆模型大鼠脑内以及FSK和STZ处理的PC12细胞表达焦亡通路相关蛋白NLRP1、胱天蛋白酶1、IL-1β和IL-18水平均显著提高,而GSK-3β抑制剂Li Cl可显著降低胱天蛋白酶1活性,下调焦亡相关蛋白表达水平。结论炎症小体激活介导了PC12和痴呆大鼠脑内tau蛋白过度磷酸化引起神经毒性,而焦亡通路胱天蛋白酶1下游的促炎因子IL-1β和IL-18的释放在放大炎症反应的同时也促进tau蛋白的过度磷酸化。     

人参皂苷Rb1可能通过CDK5途径减轻Aβ25-35诱导的胎鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化

观察人参皂苷Rb1对Aβ_25-35诱导的海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响，并探讨其对周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase 5，CDK5)及激动亚基p25/p35的可能作用。通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠海马神经元tau蛋白在Thr²⁰⁵、Ser³⁹⁶和Ser⁴⁰⁴位点的磷酸化水平，及CDK5的两个亚基cdk5和p25/p35的蛋白水平。20 μmol·L^-1凝聚态Aβ_25-35作用于海马神经元12 h，可使海马神经元tau蛋白在Thr²⁰⁵、Ser³⁹⁶和Ser⁴⁰⁴位点的磷酸化水平增高，p25的数量增多，但并不影响cdk5亚基的表达。人参皂苷Rb1可减轻凝聚态Aβ_25-35诱导的海马神经元tau蛋白的过度磷酸化，抑制p35的降解并减少海马神经元p25的生成。人参皂苷Rb1可能通过CDK5途径减轻Aβ_25-35诱导的胎鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化。     

淫羊藿苷对侧脑室注射链脲佐菌素所致大鼠学习记忆损伤的保护作用

目的观察淫羊藿苷(Ica)对侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)所致大鼠痴呆模型的保护作用。方法雄性SD大鼠分为假手术组、STZ模型组、Ica给药组。除假手术组外,所有大鼠双侧侧脑室注射STZ(3 mg·kg-1)模拟散发性老年性痴呆,假手术组只注射等体积的溶剂,制模前后分别给予Ica(40 mg·kg-1·d-1)灌胃3周。给药结束后采用Morris水迷宫观察大鼠行为学改变,血糖仪检测空腹血糖,收集海马组织观察乙酰胆碱酯酶(Ach E)和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达情况。结果侧脑室注射STZ后Morris水迷宫结果显示大鼠找到水下平台的逃避潜伏期显著延长(P<0.05),记忆功能受损,海马组织Ach E和TGF-β1蛋白水平增高(P<0.05),而双侧侧脑室注射STZ并不影响大鼠空腹血糖值(P>0.05);给予Ica后大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),海马组织Ach E和TGF-β1蛋白高表达状态缓解(P<0.05)。结论 Ica对侧脑室注射STZ引起认知功能损伤具有保护作用,其机制可能与改善海马组织Ach E和TGF-β1蛋白的高表达相关。     

硫酸软骨素锂的制备及对D-Gal和AlCl_3诱导的AD小鼠学习记忆障碍的改善作用

目的阿尔兹海默病(AD)是一种常见的以记忆损伤,认知功能障碍及语言障碍等为特征的中枢神经系统退行性疾病。硫酸软骨素(CS)具有抗炎、抗氧化、神经保护等多种药理活性。Li Cl是发现的第一类tau蛋白激酶GSK-3β特异性抑制剂,通过下调GSK-3β的表达,上调抗凋亡因子Bcl-2和神经营养因子,从而降低Aβ蛋白的毒性和tau蛋白的磷酸化程度。本研究拟制备低分子量硫酸软骨素锂(CS-Li),并从抑制β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集、减少细胞骨架损伤、抑制tau蛋白的过度磷酸化等方面考察CS-Li对D-Gal和Al Cl3诱导的AD小鼠学习记忆障碍的改善作用。方法采用离子树脂交换法制备CS-Li,并通过红外光谱(FTIR)和电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对其进行表征。采用透射电镜(TEM)、Th T结合实验、圆二色谱法(CD)、细胞活性实验和荧光显微镜等方法来考察CS-Li对Aβ1-42聚集的抑制作用。激光共聚焦显微镜观察CS-Li对冈田酸(OA)诱导的SH-SY5Y细胞骨架损伤的抑制作用。采用皮下注射D-Gal和Al Cl3灌胃法构建AD小鼠模型,皮下注射D-Gal和Al Cl3连续给药30 d后,通过新物体识别和Morris水迷宫等行为学方法考察CS-Li对AD小鼠的空间学习记忆能力和探索能力以及精神状况的改善作用。行为学测试结束后处死小鼠,取小鼠海马组织,HE染色观察小鼠海马神经细胞的形态学变化情况,透射电镜下观察小鼠海马体神经元形态结构、神经元之间突触的数目、髓鞘和线粒体的形态结构,Western蛋白印迹实验考察CS-Li对AD小鼠海马中p-Tau(ser396)蛋白表达的调节作用。结果采用离子树脂交换法成功的制备了CS-Li,FTIR光谱结果显示,1741 cm-1和1558 cm-1附近的羰基上羧酸盐的偶合峰明显增强,表明Li+已经成功的结合到了CS的羧基上,CS-Li中Li+含量为6.051 g·kg~(-1)。通过透射电镜观察到CS-Li有效地抑制了Aβ1-42的聚集。通过TEM、Th T结合实验、圆二色谱实验结果显示,CS-Li可以有效的抑制Aβ1-42的聚集。激光共聚焦显微镜研究表明,CS-Li保护SH-SY5Y细胞拮抗OA诱导的细胞骨架结构损伤。Morris水迷宫定位航行实验中,给药组小鼠的逃避潜伏期显著缩短;给药组与模型组穿过平台次数比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。新物体识别实验结果显示,各组小鼠的总探索时间无显著差异,给药组小鼠较模型组对新物体的辨别率显著得到提升(P<0.01)。HE染色和透射电镜结果显示,与模型组相比,经CS-Li治疗的小鼠的海马体CA1区突触明显增多,髓鞘结构和线粒体结构更为完整。Western蛋白印迹实验结果表明,CS-Li可以抑制D-Gal和Al Cl3诱导的AD小鼠海马内Tau蛋白在Ser396位点过度磷酸化。结论采用离子交换法制备的CS-Li,可以抑制Aβ1-42的聚集,减少细胞骨架损伤,调节tau蛋白的过度磷酸化,改善D-Gal和Al Cl3诱导的AD小鼠的学习记忆障碍,改善小鼠海马神经元存活及突触超微结构,CS-Li可能是一种有效的多靶点治疗AD的药物,值得进一步研究和评价。     

丙泊酚对成年大鼠的认知功能及海马CA1区糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的影响

目的:观察丙泊酚麻醉对成年大鼠空间认知功能及海马CA1区GSK-3β水平的影响。方法:成年SD大鼠经尾静脉注射丙泊酚麻醉6 h,苏醒后24 h接受莫里斯水迷宫(Morris Water Maze,MWM)训练,观察全身麻醉对大鼠认知功能的影响;采用免疫荧光和Western blot技术,检测大鼠海马CA1区GSK-3β水平的变化。结果:与对照组相比,丙泊酚麻醉组大鼠在MWM任务的隐藏平台(P<0.01)、反向平台(P<0.01)和空间探索实验(P<0.05)的空间学习和记忆能力显著下降;同时伴有CA1区磷酸化的GSK-3β(p-GSK-3β)表达水平的下降(P<0.05),GSK-3β水平不变(P>0.05)。结论:丙泊酚麻醉可引起成年大鼠空间学习和记忆功能损害,其机制可能与降低海马CA1区的GSK-3β的磷酸化水平有关。     

红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠轴突再生及Akt/GSK-3β/CRMP-2表达的影响

目的研究红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠轴突再生的影响及可能的机制。方法健康成年♂SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型对照组、红景天苷给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO),ZeaLonga标准评分法评价大鼠神经功能损伤,Western blot法检测大鼠缺血侧脑组织p-Akt(Ser473)、Akt、p-GSK-3β(Ser9)、GSK-3β、p-CRMP-2(Thr514)、CRMP-2蛋白的表达,免疫荧光染色法检测大鼠缺血侧脑组织NF200蛋白的表达。结果与MCAO组比较,红景天苷能明显改善大鼠的神经功能损伤,促进NF200、p-Akt、p-GSK-3β蛋白的表达,抑制p-CRMP-2蛋白表达。结论红景天苷能改善局灶性脑缺血/再灌注大鼠的神经功能缺损,此作用可能与促进Akt、GSK-3β的磷酸化,抑制CRMP-2的磷酸化,进而促进轴突再生有关。