酶分层消化法获取视网膜纯感光细胞

目的：探讨分离视网膜感光细胞的方法。方法：采用0．25％胰酶（视网膜感光细胞面朝下法）和2．5％胰酶＋0．2％胶原酶＋0．4％EDTA的消化液（视网膜感光细胞面朝上法）酶分层消化法分离获取纯视网膜感光细胞。结果：酶分层消化法可分离获取纯视网膜感光细胞。结论：酶分层消化法是一种可靠、费用廉价的获取纯视网膜感光细胞的新方法。     

Graves眼病患者眼外肌组织免疫组化研究

目的探讨Ｇｒａｖｅｓ眼病发生机制。方法应用单克隆抗体人类白细胞ＤＲ抗原（ＨＬＡＤＲ）、巨噬细胞（ＣＤ６８）、第八因子相关性抗原（Ｆ８／８６），ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８，Ｂ细胞（ＣＤ２０）对１４位Ｇｒａｖｅｓ眼病患者眼外肌标本进行免疫组化研究。结果患者眼外肌间质中有大量的ＤＲ＋细胞，有大量巨噬细胞浸润，血管丰富、扩张，淋巴细胞浸润，以ＣＤ３＋细胞为主。结论提示患者眼外肌间质中ＨＬＡＤＲ抗原的异常表达在该病的发生发展中起重要作用。细胞免疫是局部炎症的重要原因。     

硫化嵌合型LRP反义寡核苷酸逆转葡萄膜黑色素瘤多药耐药性

目的 :探讨体外培养的葡萄膜黑色素瘤细胞对不同化疗药物敏感性 ,并通过硫化嵌合型反义寡核苷酸 (AS -ODN)特异阻断肺耐药基因 (LRP)的表达逆转肿瘤多药耐药性。方法 :通过原代培养葡萄膜黑色素瘤细胞 ,采用噻唑蓝 (MTT)法测定肿瘤细胞对氟脲嘧啶 ,噻替哌 ,顺铂 ,阿霉素 ,长春新碱 ,氮烯咪氨 6种药物体外敏感性。检测不同浓度药物作用 96小时后对肿瘤细胞的杀伤情况。利用RT -PCR ,Westernblot法测定肿瘤细胞LRP的表达 ,并通过阳离子脂质体导入LRPAS -ODN ,阻断LRP的表达 ,测定该基因对肿瘤细胞化疗药物敏感性的影响。结果 :葡萄膜黑色素瘤对不同的化疗药物均有抗药性。LRPAS -ODN可下调该基因的表达 ,且与剂量呈正相关。LRPAS -ODN在 15 0nM以下对葡萄膜黑色素瘤的增殖活性无明显影响 ,但可逆转肿瘤的多药耐药性。结论 :临床常用化疗药物及化疗剂量对葡萄膜黑色素瘤细胞杀伤作用较小 ,LRP的高表达与肿瘤的多药耐药性密切相关。     

重组腺病毒介导的gfp-bcl-X_L对视网膜变性鼠光感受器细胞保护作用的研究

目的　观察重组腺病毒rAd gfp bcl XL治疗视网膜变性 (retinaldegeneration ,RD)鼠的疗效。方法　 40只RD鼠随机分成A、B组 ,每组 2 0只 ,右眼为治疗眼 ,左眼为对照眼。A、B组治疗眼分别于RD鼠生后 10d及 2 2d视网膜下腔注射含绿色荧光蛋白基因gfp和抗凋亡基因bcl XL 的重组腺病毒颗粒 ;术后 15、30d摘除治疗眼和对照眼行冰冻切片、透射电镜下观察、石蜡切片、HE染色并提取视网膜总RNA ;行逆转录聚合酶链反应分析bcl XL 基因的mRNA表达水平 ;免疫组化分析治疗眼和对照眼的Bcl XL 蛋白水平。结果　治疗眼视网膜有较广泛的绿色荧光蛋白表达 ,说明重组腺病毒成功的将bcl XL 转染至视网膜光感受器细胞 ,且有bcl XL 表达 ;术后 30d ,A组鼠治疗眼和对照眼bcl XL的mRNA表达水平及Bcl XL 蛋白含量有明显差异 ;透射电镜下可见治疗眼的内节段较对照眼完好 ;HE染色示治疗眼视网膜光感受器细胞层较对照眼厚。而B组鼠治疗眼和对照眼的视网膜光感受器细胞层的厚度无明显差异。结论　注射至早期RD鼠视网膜下腔中的rAd gfp bcl XL 能有效转染光感受器细胞并发挥抗凋亡作用 ,但对晚期RD鼠的疗效不明显。     

用1/2秒硝化纤维作火棉胶制片的操作和体会

1/2秒硝化纤维是上海出产的絮状火棉胶(Celloidin wool),主要成分为四硝酸纤维素C_(12)H_(16)O_6(NO_3)_4,分子量504.28,含湿润剂乙醇(36±2)%。一、操作方法(一)组织固定:用10%福尔马林固定,眼球固定2天,大块组织适当加长。(二)取材: 1.固定好的组织流水冲洗6～12小时,蒸溜水浸泡半小时以上。2.移入50%酒精1天,再移入70%酒精1天、然后削切。3.剖切:用二块双面保安刀片从病变部位按前     

交感性眼炎的临床与免疫组化分析

通过对因交感性眼炎而摘除的眼球进行病理及免疫组化分析 ,结合临床特征 ,探讨交感性眼炎的发病机理。方法 :17例诊断为交感性眼炎行交感眼眼球摘除的病人 ,眼球标本用HE染色 ,观察炎症细胞在脉络膜、巩膜血管及神经周围的分布及细胞种类。其中 10例进行免疫组化染色 ,用CD3、CD45RO标记T淋巴细胞 ,CD2 0标记B淋巴细胞 ,CD6 8标记巨噬细胞。观察这些抗体在脉络膜、巩膜血管及神经、结膜下血管的分布特点及强度。结果 :HE染色 :淋巴细胞浸润在脉络膜大中血管层及脉络膜上腔 ,间有上皮样及多核巨细胞。巩膜内血管及神经亦可见淋巴细胞浸润。免疫组化 :CD3、CD45RO阳性细胞分布在脉络膜、巩膜、结膜下组织中 ,多在上皮样细胞、巩膜静脉及神经、结膜下血管周围。CD2 0主要分布在脉络膜上腔及外层脉络膜。CD6 8阳性细胞主要分布在脉络膜上皮样细胞、多核巨细胞及巩膜及结膜下血管周围。结论 :交感性眼炎是一种非环死肉芽肿性葡萄膜炎 ,炎症不仅局限于脉络膜 ,亦可见于巩膜和结膜下。巩膜的血管及神经周围存在吞噬色素的上皮样细胞 ,提示交感性眼炎的发生与色素颗粒或其他相关抗原密切相关。     

深低温冻存角膜复温后内皮细胞活性的变化

目的 探讨深低温冻存角膜复温后内皮细胞活性变化的规律。方法 冻存牛角膜复温后,分别行器官培养（Ａ组）及ｏｐｔｉｓｏｌ保存（Ｂ组）,检测皮内细胞密度、存活率（ＥＳＲ）及形态。结果 Ａ组培养６ｈ密度下降了７１．２％,２４ｈＥＳＲ明显下降（２７．２％）;Ｂ组保存７２ｈ密度下降了７３．６％（３７．２％）。结论 深低温冻存可造成内此细胞的潜伏性损伤,判定其活性在复温后组织培养６ｈ后进行。复温后Ｏｐｔｉｓｏｌ保存能改善细胞的潜在性损伤。     

青光眼术后滤过区生长因子的表达及干扰素拮抗生长因子作用的初步研究

目的探讨青光眼术后滤过区局部生长因子的表达及干扰素α-2b(interferon alpha-2b,IFNα-2b)在体内环境下对b成纤维生长因子(beta-Fibroblastic Growth Factor,bFGF)、转化生长因子β1(Transforming Growth Factor beta1,TGFβ1)的作用.方法采用冰冻切片的免疫组化染色技术.标本取白兔眼行巩膜咬切术后的滤过区组织,实验分为正常对照组和用药组两组,各4只兔8只眼.全部兔眼局麻下行标准统一的巩膜咬切手术.用药组于术后当时、术后隔天接受滤过区旁结膜下注射干扰素α-2b 5×105 IU 0.2ml各1次,正常对照组不用药.分别检测术后第3、5、7、14d滤过区标本内bFGF、TGFβ1抗原的表达.结果正常对照组标本中,术后3d的滤过区细胞问质已能检测出bFGF或TGFβ1阳性表达产物及阳性细胞;第5至7d达到高峰;第14d的明显减少.用药组的标本中,表达两种生长因子的物质和细胞显著减少.结论抗青光眼术后手术区局部"沐浴"着生长因子,术后伤口愈合的发生有bFGF、TGFβ1生长因子的参与.而INFα-2b体内环境下具有拮抗bFGF、TGFβ1的作用.眼科学报2001;17106～110.     

白细胞介素-1α诱导玻璃体视网膜新生血管 形成及血管内皮细胞生长因子表达

目的观察白细胞介素-1α(interleukin-1α, IL-1α)诱导SD大鼠玻璃体视网膜新生血管形成以及对血管内皮细胞生长因子(vascular endothe lium growth factor,VEGF)表达的影响。方法8只SD大鼠,左眼为实验处理组,玻璃体内各注射IL-1α2．0 ng,右眼为对照组,同样方法 玻璃体内注射等量磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution, PBS )。术后每天用直接检眼镜观察眼底,第7 d摘取眼球,眼后段作常规病理切片,采用免疫组织化学方法检测VEGF的表达情况。结果实验处理组视网膜前有大量新生血管和增生膜形成, 在视网膜神经节细胞层、新生血管管壁及视网膜前增生膜中有V EGF的阳性表达,而对照组则无新生血管形成, 仅在感光细胞外节段层有VEGF的弱表达。结论IL-1α能促进SD大鼠玻璃体视网膜新生血管形成和VEGF表达升高。(中华眼底病杂志,2001,17:135-137)