自体神经干细胞在兔损伤脊髓内存活并分化的实验效果

目的:将新西兰大白兔骨髓基质细胞体外培养、诱导、分化为神经干细胞,并且移植到兔脊髓横断性损伤模型中,观察移植的细胞是否能够存活及分化。方法:兔骨髓基质细胞取自成年兔的股骨或髂骨,体外培养、诱导、分化为神经干细胞,将兔制成脊髓全横断模型。伤后2周将神经干细胞手术方法直视下移植到受损脊髓缺损处,伤后12周将兔行甲醛灌注留取神经干细胞移植处作为标本,行病理及免疫组化染色。并设立脊髓损伤空白对照组(移植后不行神经干细胞移植)。结果:移植组与对照组相比,移植组移植部位存在大量5-溴-2-脱氧尿苷(bromodeoxyuridine/5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)染色阳性的细胞,表明移植的细胞在体内可以存活;同时,移植组脊髓损伤部位存在神经元特异性烯醇化酶抗体(neuron-specificendase,NSE)、胶质原性纤维酸性蛋白抗体(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)染色阳性的细胞,表明移植的细胞可以分化为具有神经元或胶质细胞特征的细胞。结论:自体神经干细胞在损伤脊髓内可以存活并能分化为类神经组织细胞     

外源性绿色荧光蛋白和蛋白酪氨酸激酶受体B基因在大鼠骨髓源性神经干细胞内稳定表达的检测特征

目的:利用本实验室构建的携带蛋白酪氨酸激酶受体B基因的荧光真核表达质粒-pEGFP-C2-蛋白酪氨酸激酶受体B,转染大鼠骨髓基质细胞源性的神经干细胞,观察其在神经干细胞中的表达情况。方法:实验于2005-06/2006-06在南方医科大学珠江医院神经医学研究所完成。实验选用SD大鼠进行骨髓的采集及骨髓基质细胞的获取,培养1周后得到较纯化的骨髓基质细胞,进行细胞传代培养,传代培养的细胞加入10%胎牛血清及维甲酸以诱导骨髓基质细胞向神经干细胞分化。细胞培养2周后,pEGFP-C2-蛋白酪氨酸激酶受体B经LIPOEECTAMINE.2000脂质体转染培养的大鼠骨髓基质细胞源性的神经干细胞,24h后观察绿色荧光蛋白的瞬时表达情况,以酶切和测序鉴定质粒的正确性,凝胶电泳鉴定PCR产物大小,应用免疫组化定量分析法检测转染该质粒的细胞中蛋白酪氨酸激酶受体B的含量,并与正常细胞作比较。结果:①细胞转染24h后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白的表达,表达率约18.1%,随着培养时间的延长,表达绿色荧光蛋白的细胞数量逐渐增多,于1周左右达到高峰,表达率约42.8%,继续观察1个月未发现荧光表达减弱。②酶切、PCR和DNA序列鉴定均证实插入片段的正确性,扩增的PCR产物凝胶电泳结果与设计引物间的片段大小1461bp完全一致,转染细胞电泳未见目的条带。③免疫组化结果表明,所有细胞均含有蛋白酪氨酸激酶受体B抗原成分,转染pEGFP-C2-蛋白酪氨酸激酶受体B的细胞该抗原成分较未转染细胞明显增加(19.76±3.98,32.17±6.29,P<0.05)。结论:LIPOEECTAMINE.2000是一种简单而高效的转染大鼠骨髓基质细胞源性神经干细胞的方法,转染的pEGFP-C2-蛋白酪氨酸激酶受体B基因在细胞内可以稳定表达,增强型绿色荧光蛋白可以作为该基因表达的标记。     

颅内血肿穿刺引流术后并发症的防治

使用一次性穿刺引流针行颅内血肿穿刺引流手术简单、安全、有效,已被神经外科医生广泛采用,尤其适用于高血压脑出血、慢性硬膜下血肿患者.但由于操作者水平及临床经验的差别,由之而来的并发症屡有发生,部分患者因严重的感染导致死亡.     

颅脑损伤后低钠血症的病因诊断与治疗

颅脑损伤并发低钠血症的患者的临床上较多见,以往多归因于抗利尿激素分泌不当综合征（syndrome of inappropriatr antiduretic hormone secretion, SIADH）或尿崩症（diabetes insipidus, DI）.     

磁共振成像在显示脑立体定向干细胞移植靶点时的临床应用价值

目的应用磁共振成像(MRI)普通扫描及磁敏感加权成像序列(SWI)扫描了解脑立体定向干细胞移植治疗脑瘫后实际细胞移植靶点,了解两种扫描序列显示靶点的差异,为更好地显示移植靶点及为评估临床疗效提供影像学依据。方法 40例痉挛型脑瘫患儿,均行立体定向干细胞脑内基底节区移植,术后第1天行颅脑MRI普通扫描及SWI扫描,观察两种扫描序列显示实际细胞移植靶点的情况,比较两者显示靶点方面的差异。结果在所有患者中,应用常规扫描,在基底节区细胞移植靶点显影36例,4例未显影,显影率90%;在36例显影的患者中,其中28例与术前靶点吻合,8例部分吻合。应用SWI序列扫描基底节区细胞移植靶点显影38例,2例未显影,显影率95%。在38例显影的患者中,其中34例与术前靶点吻合,4例部分吻合。结论 SWI在显示实际移植靶点方面优于普通扫描序列。SWI可以作为术后显示移植靶点的首选方案,对显示实际移植靶点、评估靶点与疗效间的关系及积累相关临床经验具有积极的意义。     

尿动力学检查对干细胞移植治疗脊髓损伤后排尿障碍的临床疗效评估

目的 探讨通过尿动力学检查判断间充质干细胞移植治疗脊髓损伤后排尿障碍的临床疗效.方法 对20例胸10-腰1段脊髓损伤后遗症患者行脐带间充质干细胞移植,并进行术前和术后半年尿动力检查,ASIA损伤分级评分.结果 60％患者尿道括约肌功能、膀胱顺应性明显改善.结论 间充质干细胞移植可以显著改善胸腰段脊髓损伤后遗症患者排尿障碍,恢复尿道括约肌和膀胱功能,提高患者生活质量.     

可注射聚丙交酯多孔微载体制备及与骨髓基质干细胞共培养研究

目的 采用双乳化溶剂挥发技术制备聚丙交酯(PDLLA)多孔微载体.方法 通过改变内水相中碳酸氢铵溶液浓度,调节微载体的孔径和孔隙率,并研究了微载体的制备条件对其粒径和形貌的影响.结果 SEM观察及粒度分析显示:微载体具有表面开孔、内部相互连通的孔结构,粒径在335 μm±65 μm范围内,内部孔径20μm左右,孔隙率达80%以上.体外细胞培养显示骨髓基质干细胞在微载体表面及内部能有效黏附并均匀生长.结论 相对于实心微球,这种表面和内部具有多孔结构的微载体更有利于细胞的黏附和生长,并可通过注射方式将细胞运载到组织缺损部位以促进组织修复和再生.     

磁敏感加权成像和常规MR扫描对显示干细胞移植术后针道的对比观察

目的 比较磁敏感加权成像(SWI)与常规MRI对干细胞移植术后针道显示的差异.方法 52例脑瘫患者干细胞移植术后两天内均行颅脑SWI及常规MRI.根据针道显示的清晰程度将图像分为1～3分3个等级,比较SWI和常规MRI扫描对针道显示的差异.结果 SWI显示针道的平均分为2.73,常规MRI对针道显示的平均分为1.65,二者差异有统计学意义(P<0.001).结论 SWI对干细胞移植术后针道的显示优于常规扫描序列,可以作为术后针道显示的首选成像方法.     

脐带间充质干细胞移植治疗脑创伤后遗症35例临床疗效分析

目的 探讨应用脐带间充质干细胞移植治疗脑创伤后遗症的临床疗效.方法 35例脑刨伤后遗症患者被随机分入干细胞治疗组和对照组,其中干细胞治疗组每位患者接受4次腰椎穿刺干细胞移植术,并分别于移植前及移植后6个月进行功能独立性评定(Functional Independence Measure,FIM).对照组不给予任何手术及药物干预治疗,并分别于就诊时及自然观察6个月后进行功能独立性评定(FIM).结果 干细胞治疗组患者移植后6个月的自我料理、括约肌、转移、运动、交流和社会认知功能均有明显改善(P＜0.05),而对照组6个月后的各项评定均无明显改善(P＞0.05).结论 脐带间充质干细胞移植可以显著改善脑创伤后遗症患者的多项神经功能,从而提高患者生活质量.     

大脑半球解剖改良切除术治疗顽固性癫疗效分析

目的 分析大脑半球解剖改良切除术治疗顽固性癫的临床疗效。方法 对2008-03至2013-12在武警北京总队医院的12例顽固性癫患者行大脑半球解剖改良切除术,并对其结果进行追踪随访。结果 12例术后癫发作均得到有效控制,术后无发作达到EngelⅠ级11例（92%）,Ⅱ级1例（8%）。所有患者术后随访神经功能缺失症状无明显加重,行为异常均得到不同程度的改善,未出现明显并发症。结论 对大脑半球一侧广泛病变伴有顽固性癫的患者,行大脑半球解剖改良的切除术,可以有效控制癫发作并明显改善预后。