RNA干扰对白血病细胞系HL-60增生的影响

 目的 研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA片断（small interfering RNA, siRNA）对白血病细胞系HL-60细胞增生的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法 制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增生状态,流式细胞仪进行细胞周期分析。结果 siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增生能力减弱,其增生抑制作用于转染后48 h、72 h最明显,增生抑制率分别为53.2 %和51.5 %;S期细胞比值由（56.1±4.7）%降至（17.8±3.2）%,细胞阻滞在G0／G1期。结论 针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增生有明显抑制作用,有望为白血病提供新的治疗途径。     

PFKFB3基因在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解及生长的影响

目的探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）基因在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解及生长的影响。 方法收集我院病理科前列腺增生和前列腺癌蜡块组织,应用免疫组化技术检测PFKFB3的表达水平。通过荧光定量PCR和Western blot实验检测正常前列腺上皮细胞（RWPE-1）和四种前列腺癌细胞系（PC3、LNCaP、DU145、C4-2）中PFKFB3的表达。应用RNA干扰技术敲低PFKFB3表达,采用细胞糖酵解试剂盒、CCK-8和克隆形成实验检测PFKFB3对前列腺癌细胞的糖酵解和增殖活性的影响。 结果与前列腺增生组织相比,前列腺癌组织中的PFKFB3表达量明显增高[（59.7±0.25） vs （3.08±0.16）,P<0.05],且病理Gleason评分越高,PFKFB3表达量也越高。同样PFKFB3在不同前列腺癌细胞系中均明显高表达。抑制PFKFB3基因表达后,前列腺癌细胞的糖酵解和增殖能力显著降低。 结论PFKFB3基因在前列腺癌恶性进展中表达上调,促进肿瘤细胞的糖酵解和增殖,靶向PFKFB3可能为前列腺癌分子诊断和治疗提供潜在的应用价值。     

慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响

目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca~(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体。用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-q PCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca~(2+)浓度变化,RT-q PCR和Western blot法检测VSMCs Ca M的mRNA和蛋白表达。结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011TU/L。转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调。慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85%;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca~(2+)荧光强度显著升高,而且Ca M的mRNA和蛋白表达量也显著增加。结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca~(2+)浓度和Ca M表达。     

基于样本熵和个体化阈值的表面膈肌肌电信号起点检测

膈肌是人体最主要的呼吸肌,表面膈肌肌电(sEMGdi)信号的动作区间起点检测可用于呼吸康复训练,但心电(ECG)信号的存在增加了其检测难度,故本文对此提出了基于样本熵(SampEn)和个体化阈值的起点检测方法,简称样本熵法。该方法涉及样本熵特征的提取,样本熵特征参数w和r0的优化,个体化阈值的选取以及判断条件的设立。同时还选用其他三种常用方法与本文所提的样本熵法进行起点检测方面的比较,即利用小波变换(WT)去噪后再分别使用均方根(RMS)和能量算子(TKE)的起点检测方法,以及不做小波变换而直接使用TKE的起点检测方法。本文共采集12名健康受试者在2种呼吸状态下的sEMGdi信号,用于信号合成和算法检测。最后以误差的绝对值累加和作为评价起点检测精度的指标。最终结果表明,样本熵法在稳定性和精度两方面皆优于其他三种方法,是一种能适应个体间差异,无需提前对sEMGdi信号进行ECG信号去噪便可获得较高精度的起点检测方法,为基于sEMGdi信号的呼吸康复训练和实时交互提供了依据。     

下调MARCH8基因的表达对宫颈癌Siha细胞侵袭、迁移与增殖的影响

目的：研究下调MARCH8基因表达对人宫颈癌Siha细胞侵袭、迁移、增殖以及克隆的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：构建特异性针对MARCH8基因的siRNA片段,并将其通过脂质体介导转染至宫颈癌Siha细胞,同时设立转染无义序列的阴性对照组。分别采用Real-time PCR法与蛋白质印迹法检测转染后,细胞中MARCH8在mRNA和蛋白水平上的表达改变。通过Transwell小室实验、划痕实验检测MARCH8表达下调对细胞侵袭、迁移能力的影响,通过CCK-8法、细胞平板克隆实验检测MARCH8表达下调对细胞增殖、克隆形成能力的影响,并采用蛋白质印迹法检测MARCH8基因表达下调对基质金属蛋白酶9（MMP9）,波形蛋白（Vimentin）以及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的影响。最后采用蛋白质印迹法检测MARCH8基因表达下调,对Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin以及E钙黏蛋白（E-cadherin）表达的影响。结果：与转入siRNA-NC组相比,转入siRNA-MARCH8组细胞MARCH8在 mRNA和蛋白表达水平上均明显降低,细胞的侵袭、迁移以及增殖和克隆形成能力明显被抑制（P<0.05）,且侵袭标记蛋白MMP9,Vimentin以及增殖标记蛋白PCNA的表达也明显下降。MARCH8基因表达成功下调后,转入siRNA-MARCH8组细胞中β-catenin蛋白的表达水平较阴性对照组明显下降（P<0.05）,而E-cadherin蛋白的表达水平明显升高（P<0.05）。结论：下调MARCH8基因的表达可以抑制宫颈癌Siha细胞的侵袭、迁移、增殖和克隆能力,其机制可能与Wnt/β-catenin通路的抑制有关。     

转铁蛋白受体1对淀粉样蛋白前体/早老素1转基因小鼠神经元的保护作用

目的 探讨转铁蛋白受体1(TfR1)在淀粉样蛋白前体（APP）/早老素1（PS1）转基因小鼠脑内异常表达情况及其对阿尔茨海默病（AD）神经元的保护作用。 方法 首先,利用免疫荧光及Western blotting技术检测出生后1月（P1M）至P12M各发育时间点,APP/PS1转基因小鼠与野生型小鼠大脑TfR1的表达情况;其次,取APP/PS1转基因与野生型新生小鼠原代海马神经元培养,培养12 d后利用TfR1 shRNA质粒干扰TfR1基因的表达,利用Western blotting技术检测干扰后细胞TfR1的表达变化;ELISA技术检测TfR1干扰前后细胞β-淀粉样蛋白(Aβ)_1-42的分泌量;利用微管相关蛋白2(MAP2)标记神经元突起,观察TfR1干扰前、后神经元突起的生长变化;最后,利用FM1-43染色观察由TfR1介导的轴质运输中囊泡的运输情况。 结果 在APP/PS1转基因小鼠生长发育过程中,随着年龄的增长TfR1的表达呈现先增加后减少的趋势,在P6M之后明显降低,且与对照组相比差异有显著性;TfR1 shRNA 干扰后可以使原代神经元细胞内TfR1基因沉默,使其突起明显变细、变长并影响囊泡的运输。与对照组相比,TfR1基因在APP/PS1转基因小鼠原代神经元中表达量减少,荧光减弱。 结论 APP、PS1基因突变可导致TfR1的表达下降;APP/PS1转基因小鼠原代神经元经TfR1 shRNA干扰Aβ_1-42分泌量增多,影响神经元突起的生长,使轴质运输速率减慢,囊泡的活动减缓,加重AD病情。故TfR1的表达可以对神经元起到保护作用。     

大剂量β—内酰胺类抗生素对凝血试验的干扰

研究大剂量 β 内酰胺类抗生素对凝血实验的影响。分别测定正常混合血浆以及含不同抗生素浓度的混合血浆凝血酶原时间 (PT)、活化部分凝血活酶时间 (APTT)和纤维蛋白原 (Fbg)浓度 ,并将二者测定结果进行比较。青霉素钠、氨苄青霉素钠在 5 0 0 0U/ml时PT与对照相比有显著差异 (P <0 0 5 ) ,青霉素钠、氨苄青霉素钠为 80 0 0U/ml时APTT变化明显(P <0 0 5 ) ;血浆头孢哌酮钠在 34 0 μg/ml时PT、APTT与对照相比有显著差异 ,(P <0 0 5 ) ;β 内酰胺类抗生素血浆中Fbg与对照相比呈下降趋势 ,但无统计学意义。β 内酰胺类抗生素对凝血试验有不同程度的干扰。建议实验室在进行凝血实验时 ,应注意分析前的质量控制 ;临床在对重症感染患者进行大剂量抗生素治疗时 ,须注意凝血功能的监测。     

Negri小体内的狂犬病毒抗原

以含Ｎｅｇｒｉ小体（ＮＢ）的７例海鸟及４例小脑切片，分别作Ｍａｃｃｈｉａｖｅｌｌｏ（马氏）和磷钨酸伊红（ＥＰＴ）染ＮＢ，以单克隆－狂犬病毒核衣壳蛋白抗体为一抗作ＳＰ染色，并作免疫加乌氏和／或ＥＰＴ的双重染色。见ＮＢ内部含狂犬病毒核衣壳蛋白抗原（ＲＶＡｇ）较少，免疫反应较弱，只外围仍见免疫反应较强之外环。少数ＮＢ内有内小体，也由免疫反应强阳性之小环及阴性之内容物构成。在小脑可见免疫反应极弱甚至阴性之ＮＢ。这些现象提示ＮＢ的形成可能是狂犬病毒体（ＲＶ）的退变现象。     

止血敏对酶法测定甘油三酯的干扰

止血敏对酶法测定甘油三酯的干扰杨世华（腾冲县人民医院检验科，云南腾冲６７９１００）关键词止血敏甘油三酯药物干扰用酶法测定甘油三酯时见到几份样品测不出或低于参考值下限，查阅病历，这些患者均使用止血敏，因此，我们做了止血敏干扰酶法甘油三酯的体内与体外试验...