室性早搏二联律伴干扰性房室传导障碍

患者女性，25岁。因受凉感冒半月，胸闷、心悸3d而入院。心电图示：基本心律为窦性，节律规整，PnP间距0．64～0．68s，频率88～94次／min。下传的窦性激动形态正常，P-R间期0．16s，每次窦性激动后跟随1次室性早搏(PVS)，形成二联律。配对时间0．44s，回转周期0．88s，回转周期加配对周期1．32s。每次PVS后又可见1次窦性P波重叠在T波之前的ST段上，后无QRS波跟随。心电图诊断：PVS二联律伴干扰性房室传导障碍类似二度房室传导阻滞。     

丝氨酸/苏氨酸激酶15基因的过表达与胃癌细胞增殖有关

目的探讨胃癌细胞及组织中丝氨酸／苏氨酸激酶15(STK15)mRNA和蛋白质表达与临床病理指标、胃癌细胞增殖的关系。方法采用实时定量PCR及Western blot分别检测正常胃黏膜上皮细胞株GES-1、胃癌细胞株SUN-16、KATOIII、MKN45、AGS、N87及60份新鲜切除的胃癌组织中 STK15基因mRNA及蛋白质表达。RNA干扰技术(RNAi)抑制MKN45、AGS、N87细胞株STK15表达,流式细胞仪检测细胞周期变化,MTT法检测细胞增殖速率变化,数据行秩和检验及t检验。结果 SUN-16、KATOⅢ、MKN45、AGS、N87中STK15基因mRNA及蛋白质表达均明显高于GES-1;60份胃癌组织中STK15 mRNA及蛋白质表达水平中位值分别为3．175×10-3与1．261,明显高于正常组织的0．532×10-3与0．224(P<0．05);胃癌组织中STK15 mRNA水平与胃癌分化及浸润深度有关(P< 0．05);而蛋白质表达水平与胃癌分化有关(P<0．05)。抑制STK15表达后,MKN45、AGS、N87细胞株 G2期DNA含量细胞分别为(26．1±6．1)％、(25．6±7．9)％及(20．6±6．1)％,明显高于对照组的(12．5 ±4．9)％、(10．9±4．4)％及(8．7±3．5)％(P<0．05);细胞增殖速率减慢(P<0．05)。结论 STK15 的过表达可能在胃癌发生发展中起促进作用,可作为胃癌某些生物学行为新的判定指标;STK15的过表达与胃癌细胞增殖有关。     

临时心脏起搏干扰致除颤阈值测试发生未感知一例

患者女性,29岁,诊断为扩张型心肌病,Ⅲ度房室传导阻滞,加速性室性自主心律,非持续性室性心动过速,NYHAⅢ～Ⅳ级。入院后植入临时心脏起搏器,住院期间曾发生心室颤动(简称室颤)并体外电击除颤成功。植入埋藏式心脏转复除颤器(ICD)术中误在临时心脏起搏状态下测试获得起搏电极所在位置的"R波"(实际为心室刺激脉冲信号)振幅为8mV。T-Shock成功诱发室颤,但ICD不能识别被迫手动ICD除颤成功。在减慢临时心脏起搏频率待自身心室节律出现后重新复测R波振幅为2mV。重新更换新的起搏位置,在确保无临时起搏脉冲下测试感知等参数,满意后再次进行DFT测试,ICD能成功识别室颤并一次除颤成功。     

RNA干扰沉默生存素基因表达对移植静脉内膜增生的影响

目的研究RNA干扰沉默生存素基因表达对移植静脉内膜增生的抑制作用。方法Wistar大鼠48只,建立自体静脉移植模型,术后随机分为对照组、空载体组s、hRNA对照组s、hRNA组,施加不同的处理因素,在移植12、周取材。比较内膜增生程度,半定量逆转录聚合酶链反应检测生存素基因的mRNA表达,Western blot检测生存素基因的蛋白产物表达,免疫组织化学法检测生存素及增殖细胞核抗原的表达,TUNEL法检测血管平滑肌细胞凋亡的变化。结果移植12、周内膜增生明显,局部转染靶向生存素基因的shRNA表达载体能够明显抑制内膜增生(P<0.05)。血管移植后,对照组及空载体组生存素的mRNA及蛋白产物表达显著增加,而shRNA组却显著减少(P<0.05),血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原表达减少,而TUNEL法阳性细胞明显增加。结论采用RNA干扰沉默生存素基因表达可显著抑制移植静脉的内膜增生,其作用机制可能是通过抑制生存素的基因及蛋白产物表达,从而抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡而实现的。     

一度房室传导阻滞伴干扰性P（P’）-R间期极度延长1例

患者男，83岁。因反复心悸、胸闷2年余，再发加重1d于2003年3月31日入院。既往有冠心病、慢性支气管炎、肺气肿病史。心脏B超显示：右室、右房扩大、三尖瓣返流。     

载体法筛选乙型肝炎病毒S基因小干扰RNA靶位体系的建立

目的 构建4个针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因序列的小发央RNA(shRNA)表达载体，作用于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBV S基因融合表达载体，观察shRNA对融合蛋白的抑制作用，筛选出有效靶位。方法 利用pAVU6 27质粒，设计并掏建4个shRNA表达载体，与融合表达载体共转染AD293细胞，荧光显做镜下观察融合蛋白的荧光表达情况并通过流式细胞仪分析shRNA对融合蛋白的抑制作用。同时，逆转录聚合酶链反应法验证其筛选的有效性。结果 成功掏建shRNA表达载体和HBs-EGFP融合表达载体；4组shRNA表达载体均可不同程度抑制融合基因的表达，其中以579位点最有效，荧光表达抑制率为69．8％，RNA水平抑制率为74．6％。结论 筛选出有效抑制HBV S基因的siRNA靶位。     

α烯醇化酶靶向RNA干扰对原代培养乳鼠心肌细胞能量代谢及收缩功能的影响

目的采用RNA干扰技术抑制培养大鼠心肌细胞α烯醇化酶的表达，探讨α烯醇化酶对心肌细胞能量产生和收缩功能的影响。方法针对α烯醇化酶基因，化学合成3对小片段干扰RNA（siRNA）（分别为针对α烯醇化酶mRNA406-425位点的序列1，针对α烯醇化酶mRNA656～675位点的序列2及针对α烯醇化酶mRNA754～773位点的序列3）并转染原代培养的WKY大鼠心肌细胞。采用Real—time RT-PCR和Western blot技术分别在mRNA和蛋白水平检测α烯醇化酶的表达情况，筛选其中沉默效应最好的序列（序列1）转染心肌细胞，即RNA干扰实验组，以未转染siRNA的心肌细胞为对照组，荧光素荧光素酶法检测细胞ATP水平，视频跟踪计算机测定系统测定细胞收缩反应，参数包括最大收缩幅度（dL），最大收缩速度（dL／dtmax）。结果针对α烯醇化酶mRNA 406-425位点的siRNA显著下调α烯醇化酶mRNA和蛋白的表达，并且呈剂量和时间依赖关系，200nmol／L可达到最大沉默效应，其下调α烯醇化酶mRNA和蛋白表达的最大效应分别出现在转染后24h和48h。α烯醇化酶沉默后细胞ATP产生减少（3．55&#215;10^-7nmol／mg蛋白），dL[（0．82&#177;0．02）μm]和dL／dtmax[（2．7&#177;0．3）μm／s]下降。结论应用siRNA技术靶向α烯醇化酶mRNA406～425位点可有效下调心肌细胞a烯醇化酶的表达，使细胞产能减少，收缩功能下降。     

玻璃离子水门汀垫高术在正畸治疗中的应用

对45例安氏错患者在正畸治疗前期(2～5月)应用玻璃离子垫高术,短期内不引起垂直向高度指标的变化、没有明显垂直向改变。这种方法在正畸治疗中短期应用具有可行性。     

沉默FABP-5基因对人肝癌HepG2细胞的影响

目的:研究RNA干扰技术的重组慢病毒载体沉默人肝癌Hep G2细胞中表皮脂肪酸结合蛋白-5(fatty acid binding protein-5,FABP-5)基因对其增殖、凋亡和侵袭力的影响及作用机制.方法:构建3个靶向FABP-5基因sh RNA载体,并筛选出最有效的靶点.将Hep G2细胞分为3组:实验组用FABP-5基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-sh RNA-FABP-5)感染HepG2细胞;阴性对照组用空载慢病毒颗粒(LV-sh RNANC组)感染Hep G2;空白对照组正常培养.应用RT-PCR、实时荧光定量PCR检测FABP-5基因m RNA的表达;Western blot技术检测各组细胞FABP-5蛋白的相对表达;MTT法测定细胞体外增殖能力;Giemsa染色法检测细胞的克隆形成;细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力;流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞增殖和凋亡的变化情况.结果:通过测序验证构建的FABP-5-shRNA表达载体,感染人肝癌HepG2细胞,荧光显微镜观察到细胞感染率90%.Real-time PCR和Western blot结果得出:相比空白对照组和阴性对照组,实验组的3种靶点FABP-5-sh RNA干扰序列中,LV-sh RNA-FABP-5(1)靶点中FABP-5表达的敲减率最高(P0.05),筛选出此组为最佳靶点;MTT法结果提示:实验组细胞490 n m处的吸光度(A)值在转染后第1-5天时均低于阴性对照组、空白对照组,差别有统计学意义(P0.05).Giemsa染色法结果显示:稳定转染Hep G2细胞后细胞的增殖能力明显下降(P0.05);细胞侵袭小室实验显示:与空白对照和阴性对照组相比,实验组细胞的侵袭力明显受到抑制(P0.05);流式细胞技术检测发现实验组的细胞相对于阴性对照组出现了明显的凋亡(P0.05).实验组较阴性对照组、空白对照组G2/M期延长,G1期缩短,差别具有统计学意义(P0.05).结论:人肝癌Hep G2细胞中沉默FABP-5基因可以有效抑制其表达,能够降低肝癌细胞的侵袭力,抑制肝癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞于G2/M期,使其凋亡显著增加.     

特异性小干扰RNA对晚期糖基化终产物受体介导肝星状细胞激活和胶原生成的抑制作用

目的 探讨特异性小分子干扰RNA对晚期糖基化终产物受体（RAGE）介导肝星状细胞（HSC）激活和胶原生成的影响。方法 构建RAGE特异性siRNA表达载体，经脂质体转染入HSC—T6细胞，以空白和转染非特异性siRNA表达载体pGCsi-C为对照，分别用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测各组HSC—T6细胞RAGE、α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和Ⅰ型胶原基因及蛋白的表达。结果 与空白对照组和pGCsi—C组相比，转染特异性siRNA表达载体pGCsi—R1的HSC—T6细胞RAGE mRNA和相对分子质量50×10^3、46×10^3的RAGE蛋白表达分别下调79．65％、78．04％（F=26．005，P〈0．01），56．09％、54．93％（F=365．185，P〈0．01）和63．67％、59．67％（F=386．07，P〈0．01），同时α—SMAmRNA和蛋白、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达也受到明显抑制，分别为空白对照组和pGCsi—C组的57．53％、65．50％（F=20．913，P〈0．05）、58．48％、62．80％（F=56．592，P〈0．05）、71．16％、74．23％（F=18．091，P〈0．05）和71．91％、76．09％（F=17．299，P〈0．05）。结论 RAGE特异性siRNA可在细胞内稳定表达，并能有效抑制HSC的激活和Ⅰ型胶原生成。