止血敏对酶法测定甘油三酯的干扰

止血敏对酶法测定甘油三酯的干扰杨世华（腾冲县人民医院检验科，云南腾冲６７９１００）关键词止血敏甘油三酯药物干扰用酶法测定甘油三酯时见到几份样品测不出或低于参考值下限，查阅病历，这些患者均使用止血敏，因此，我们做了止血敏干扰酶法甘油三酯的体内与体外试验...     

以X区为靶位的siRNAs抑制HBsAg、HBeAg及HBVDNA分泌的体外实验

目的研究以X区为靶位的si RNA对HBV感染细胞模型HBs Ag、HBe Ag及HBV DNA分泌的抑制作用。方法针对HBV X区设计并化学合成4条si RNAs,观察在不同浓度及不同时间点对Hep G2.2.15细胞分泌HBs Ag、HBe Ag及HBV DNA的抑制作用。结果si RNA-1 si RNA-2和si RNA-4在20、40、80 nmo L/L浓度时,对Hep G2.2.15细胞HBs Ag、HBe Ag的分泌有明显的抑制作用(P<0.01),并随着浓度的增大,抑制作用有增强趋势;40 nmo L/L浓度的三种si RNA在24、48、72 h时间点,发现随着培养时间的延长,对HBs Ag和HBe Ag分泌的抑制作用逐渐增强(P<0.01),72 h抑制作用达到高峰;72 h时三种浓度的si RNA1、si RNA2、si RNA4对HBV DNA分泌有明显的抑制作用(P<0.05)。结论在体外实验中,化学合成以X区为靶位的si RNAs能有效地抑制HBs Ag、HBe Ag及HBV DNA的分泌。     

三种常见感冒药对丙氨酸氨基转氨酶测定干扰的比较

目的探讨常见的3种感冒药对丙氨酸氨基转氨酶检测的干扰作用的差异,为临床用药提供参考。方法取3种常用的感冒药,用生理盐水溶解,配成一定浓度的溶液,分别按不同浓度比例加入不同丙氨酸氨基转氨酶检测值的血清样本中,重新测定丙氨酸氨基转氨酶浓度。结果血清中加入维C银翘片溶液后丙氨酸氨基转氨酶浓度检测明显升高(P<0.01);加入氨酚伪麻美酚片(日夜百服咛/日片)溶液后高浓度丙氨酸氨基转氨酶浓度检测显著升高(P<0.01);加入复方盐酸伪麻黄碱缓解胶囊(新康泰克)溶液后丙氨酸氨基转氨酶浓度检测无差异(P>0.05)。结论维C银翘片对丙氨酸氨基转氨酶浓度检测有明显干扰,氨酚伪麻美酚片(日夜百服咛/日片)对丙氨酸氨基转氨酶浓度检测有干扰作用,复方盐酸伪麻黄碱缓解胶囊(新康泰克)对丙氨酸氨基转氨酶浓度检测无干扰作用。     

艾灸调控实验性RA基因干扰家兔滑膜细胞分泌功能的研究

目的通过慢病毒载体介导的RNAi在体阻断SOCS1、PIAS1、PTPN22在RA动物模型的表达,研究艾灸对实验性RA滑膜细胞分泌功能的影响及其SOCS1、PIAS1、PTPN22的调控机制。方法日本大耳白兔36只,随机分为空白对照组、RA模型组、艾灸治疗组、艾灸+SOCS1基因干扰组、艾灸+PTPN22基因干扰组、艾灸+PIAS1基因干扰组。按0.5ml/kg体重剂量,将福氏完全佐剂平均注入模型组、艾灸各组动物的双后膝关节腔内(对照组动物同法注入无菌生理盐水作为对照),运用慢病毒介导的SOCS1、PTPN22、PIAS1 RNAi作为干预手段,麦粒灸"肾俞"、"足三里"穴治疗实验性RA(5壮/穴/天,6天1疗程,共治疗3个疗程,疗程之间休息1天)。ELISA法测定艾灸对关节滑膜液IL-1β、TNF-α含量的影响。结果与对照组比较,模型组IL-1β、TNF-α含量显著升高(P0.01);与模型组比较,艾灸组IL-1β、TNF-α含量显著降低(P0.01);SOCS1干扰组、PTPN22干扰组、PIAS1干扰组与艾灸组比较,下调IL-1β、TNF-α含量效果不及艾灸组(P0.05)。结论艾灸"肾俞""足三里"穴可显著降低实验性RA家兔滑膜液炎症相关细胞因子IL-1β、TNF-α的含量,但在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干扰的情况下其作用显著降低,提示SOCS1、PTPN22、PIAS1对JAK-STAT信号通路的负反馈调控可能与艾灸抑制实验性RA滑膜细胞的异常分泌功能密切关联。     

RNAi在原发性肝癌治疗中的研究进展

RNA干扰(RNA interfcrence),即RNAi,是一种在真核生物体中广泛存在的通过双链RNA分子在mRNA水平上诱导特异性序列基因表达部分或完全抑制的过程.本文主要对RNAi的机制及其在肝癌研究治疗中的应用作一综述.     

抑制cyclin D1基因小发夹RNA(shRNA)表达质粒的构建

目的:通过构建抑制cyclin D1基因小发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统,为肿瘤基因治疗提供实验依据。方法:利用基因重组技术构建靶向cyclin D1RNA干扰(RNAi)表达质粒,双酶切鉴定电泳及测序分析构建的质粒是否成功;Western Blot分析转染前后K562细胞cyclin D1蛋白表达的变化。结果:体外合成的64个碱基成功插入到预计位点,并且与设计序列完全一致;Western Blot分析结果显示转染所构建的质粒能明显下调K562细胞cyclin D1基因表达。结论:质粒的成功构建为研究其抑制cyclin D1基因表达,发挥抗肿瘤效应以及与放、化疗联合的协同效应打下基础。     

1504-siRNA对EphA3表达肿瘤细胞HCT116的抑制作用研究

目的研究原癌基因EphA3的小干扰RNA(small interfering RNA)1504-siRNA对高表达结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用。方法将1504-siRNA质粒用Vigofect转染试剂瞬时转染HCT116细胞,36～48 h后,收集蛋白,用Western印迹检测EphA3及AKT信号通路中的蛋白分子表达,收集细胞,进行噻唑蓝(MTT)实验、平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。结果 1504-siRNA能抑制HCT116细胞的EphA3蛋白水平,抑制其增殖、平板克隆和软琼脂克隆的形成,抑制pmTOR、p-c-Raf、pAKT、p-4ebp1等信号分子的表达。结论 1504-siRNA抑制HCT116细胞的增殖、存活能力和恶性程度,这可能是通过抑制AKT信号通路来实现,它有望作为肿瘤治疗的候选药物。     

单核细胞趋化因子1发卡环RNA真核表达载体的构建

目的：构建单核细胞趋化因子1发卡环RNA真核表达载体。 方法：实验于2002—10／2003-05在解放军第二军医大学中心实验室完成。①单核细胞趋化因子1发卡小分子干扰RNA片段合成。（2）将发卡小分子干扰RNA克隆人质粒pSilencer产生重组质粒SiRNA—pSilencer-单核细胞趋化因子1。③分别用BamHⅠ和HindⅢ酶切鉴定，随机分为1，2样本，每份样本进行10次电泳，并且采用460bpi标准参照样。④将经酶切鉴定后的重组质粒作测序分析。 结果：①单核细胞趋化因子1发卡小分子干扰RNA片段被成功克隆进pSilencer-U6质粒中。②BamHⅠ和HindⅢ酶切鉴定可切出450bpi大小的片段，结果表明样本1，2均与参照以及marker相一致，从片段大小的角度初步确定酶切的准确。③DNA测序分析显示，重组质粒小分子干扰RNA编码序列与设计片段的序列完全一致。 结论：针对单核细胞趋化因子1发卡小分子干扰RNA片段的真核表达载体SiRNA—pSilencer-单核细胞趋化因子1的成功构建，为进一步研究其基因功能打下了基础。     

自动生化分析仪比色杯中反应残留物对酶法测定肌酐的干扰

目的对引起肌酐（Cr）酶法测定结果假性增高的原因进行分析。方法在日立7060C生化仪上,分别使用新、旧的2套比色杯,并使用2种Cr酶法试剂测定Cr。结果日立7060C比色杯使用较长时间后,发现测定过总蛋白（TP,双缩脲法）的比色杯,经过仪器清洗后,若该比色杯紧接着用A品牌的Cr试剂进行测定,可引起测定结果的假性增高;改用B品牌的Cr试剂,则未见测定结果的假性增高。更换新的比色杯后,测定过TP的比色杯对这2种品牌的Cr试剂都不产生比色杯携带污染,测定结果都不假性增高。结论日立7060C比色杯使用较长时间后,有些项目的反应产物可一定程度的吸附在比色杯上,引起比色杯携带污染,从而对一些抗干扰能力较差的试剂和项目产生干扰。