人源pEGFP-C1-p38γ真核表达质粒的构建及其功能研究

目的 构建人源pEGFP-C1-p38γ表达质粒,并观察其对乙醇刺激的L0-2肝细胞的增殖和凋亡及炎症因子分泌的影响.方法 在人源L0-2肝细胞中提取RNA并且逆转录为cDNA,同时将引物稀释到10μmol/L,其余作为储液备用.采用PCR技术扩增p38γ并鉴定,使用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒进行PCR产物的纯化回收,再对PCR产物及载体进行酶切回收,酶切片段连接后,进行连接产物的转化、挑菌、摇菌、质粒小抽.酶切鉴定后,进行测序鉴定.将构建好的质粒转染至乙醇刺激的人源L0-2细胞中,通过MTT实验和流式细胞术检测对其增殖和凋亡的影响,并用Western blot技术检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在L0-2肝细胞中的表达.结果 测序显示pEGFP-C1-p38γ真核表达质粒构建成功.同时,MTT实验显示,乙醇刺激L0-2细胞24 h后p38γ过表达组细胞的增殖率为(0.42±0.08)％,低于转染空载体的对照组(0.60±0.03)％;流式细胞术检测结果 显示,p38γ过表达组细胞的凋亡率为(17.46±1.52)％,高于转染空载体质粒的对照组(13.18±1.34)％;Western blot检测显示p38γ过表达组中的IL-6和TNF-α表达较对照组升高.结论 p38γ能够抑制乙醇刺激的L0-2肝细胞的增殖,并促进其凋亡.同时,p38γ能够促进乙醇刺激后的L0-2肝细胞中IL-6和TNF-α的表达.     

三种桩核系统修复后牙体组织抗疲劳强度体外研究

目的:比较两种纤维根管桩核系统和金属铸造桩核修复后牙体组织的抗疲劳强度和破坏模式。方法:2 4个离体上颌中切牙常规根管治疗术后截除牙冠,随机等分成A、B、C三组,A组用AESTHETI -PLUS石英纤维桩、复合树脂核系统及烤瓷冠修复,B组用C- POST碳纤维桩、复合树脂核系统及烤瓷冠修复,C组用Cr -Co铸造金属桩核进行桩核及烤瓷冠修复,包埋于底座后进行抗疲劳强度的测试,最多测试次数约10 0万次或试件破坏,记录试件破坏时的加载次数以及试件破坏的模式。结果:三种桩核系统修复后的离体牙中均有发生根折,但根折的部位不同,A组另有2个离体牙出现树脂核与牙本质分离,B组另有1例出现树脂核与牙本质分离,而C组除2例根折外,其余6个离体牙未出现明显的牙体组织或修复体的破坏。结论:Cr Co铸造金属桩核系统是一种较为成熟的桩核系统,AESTHETI- PLUS石英纤维桩和C POST碳纤维桩核系统具有一定的临床应用前景,但临床使用纤维桩时仍应考虑其他因素对修复效果的影响。     

可流动复合树脂充填楔状缺损的体外微渗漏研究

目的　研究可流动复合树脂充填楔状缺损离体牙模型的边缘微渗漏情况。方法　选择因正畸拔除的上颌前磨牙2 4个,于颊侧颈部釉牙骨质界处备V型洞后,随机分为3组,分别采用Aelieteflo可流动复合树脂,DyractAP复合体,GICTYPEII化学固化玻璃离子进行充填。经力循环、热循环后,2 %亚甲基蓝染色2 4h ,将每个牙齿自颊舌向沿长轴连续切3片。体视显微镜放大4 0倍观察充填体边缘染液渗漏情况。结果　3组间充填体微渗率差异有显著性(P <0 .0 0 1) ,以Aelieteflo材料的边缘微渗率最低(P <0 .0 5 )。3组牙合侧壁与龈侧壁微渗率间差异无显著性(P =0 .2 6 3)。结论　可流动复合树脂用于楔状缺损充填可以获得较好的边缘封闭性。     

免充气腔镜器械在经全乳晕入路腔镜甲状腺手术中的应用

目的探讨内撑式免充气建腔器械设计和在经全乳晕入路腔镜甲状腺手术临床应用的可行性、安全性。方法回顾性分析20例甲状腺肿瘤病人的临床资料,使用研究团队研发的建腔器械实施免充气经全乳晕入路腔镜甲状腺手术,并分析相关临床指标。结果20例病人均顺利完成手术,无中转。术后病理证实甲状腺微小乳头状癌18例,良性甲状腺结节及病变2例;行单侧腺叶切除2例,单侧腺叶+峡部+中央区清16例,双侧侧腺叶+峡部+中央区清2例。手术时间（120.50±40.62）min;中央区淋巴结清扫数目（6.32±3.00）个;术后拔管时间（3.68±2.34）d;术后喉返神经麻痹1例;术后穿刺隧道出血1例,局部加压包扎后停止;术后低钙抽搐1例,3 d后缓解;手术满意度（8.28±1.42）分。结论内撑式免充气腔镜辅助甲状腺手术临床可行,安全性类似于CO₂充气手术,操作简化,同时有降低医疗成本和麻醉风险优势,值得进一步开发和应用。     

胆固醇的细菌内毒素检查方法研究

目的 为难溶性辅料胆固醇(供注射用)建立细菌内毒素检测方法。方法 通过筛选出适合溶解胆固醇的有机溶剂,并经过9种排除干扰的方法筛选,采用凝胶法和动态浊度法进行干扰试验,排除了有机溶剂和胆固醇对内毒素检查法的干扰,最终建立了胆固醇的细菌内毒素质量控制方法。检测条件：取胆固醇用无水乙醇配制成20 mg·mL-1溶液,用0.5 mg·mL-1聚氧乙烯(35)蓖麻油水溶液代替细菌内毒素检查用水稀释100倍,按内毒素检查法动态浊度法检测。结果 3批样品使用2个厂家的动态浊度法鲎试剂的回收率均在50%～200%,并且内毒素检测值均<0.1 EU·mg-1。如使用凝胶法,该品种只能使用1个厂家最高灵敏度的试剂进行检测。因此,胆固醇不建议使用凝胶法进行检测。结论 建立了胆固醇(供注射用)细菌内毒素动态浊度法检测方法,用于质量控制。     

cTEE、cTCD及TEE对卵圆孔未闭的临床诊断价值

目的：探讨经胸右心声学造影（cTTE）、经颅多普勒发泡试验（cTCD）及食道心超（TEE）等检查对卵圆孔未闭（PFO）的诊断价值。方法：回顾性分析比较140例温州医科大学附属第一医院成功行PFO封堵术患者（A组）与右心导管检查未见PFO患者（B组）的临床资料,包括临床基线资料、cTTE、cTCD及TEE。比较两组间在cTTE、cTCD分流量大小、TEE卵圆孔大小差异及cTTE气泡出现的时间差异,并绘制这些指标诊断PFO的ROC曲线。结果：cTTE下A组与B组比中-大量分流占比更大。在静息状态、瓦氏动作后和总评分情况下A组中-大量分流占比均显著大于B组（67.35% vs. 42.86%,P =0.04;100.00% vs. 71.42%,P ＜0.001;81.63% vs. 51.43%,P =0.004）。cTCD下A组与B组相比中-大量分流占比更大（75.90% vs. 19.35%,P ＜0.001）。TEE下A组与B组相比PFO裂隙更大（2.18±0.78 vs. 1.19±0.78,P ＜0.001）。用cTTE、cTCD、TEE等指标做PFO诊断的ROC曲线,结果提示cTCD、TEE两个指标ROC曲线下面积较大,具有较好的敏感度和特异度（P ＜0.05）。在cTTE气泡出现的时间方面,A组气泡出现时间小于等于5个心动周期的患者比例显著大于B组（73.47% vs.42.86%,P =0.007）。结论：cTCD、TEE检查对于PFO有较好的预测价值,综合价值优于cTTE检查。     

清肠温中方对溃疡性结肠炎大鼠干扰素γ诱导蛋白10 的影响

目的：研究清肠温中方对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织干扰素γ诱导蛋白10（IP10）的影响。方法：自由饮用4.5% DSS溶液7天制备UC模型,同时给予清肠温中方低剂量、中剂量、高剂量及美沙拉嗪（莎尔福）进行灌胃干预,处死大鼠,取结肠组织,应用酶联免疫吸附法检测结肠白介素-1α（IL-1α）、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ-干扰素（INF-γ）的表达水平,免疫组织化学法检测IP10的蛋白表达及分布。结果：与正常组相比,DSS诱导的UC大鼠结肠炎症因子（IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α、INF-γ）和IP10的表达水平均显著升高,而经过7天的干预后,结肠炎症因子（IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α、INF-γ）和IP10的表达水平明显降低（p<0.01,p<0.05）。结论：清肠温中方能够通过抑制IP10的表达,下调结肠炎症因子（IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α、INF-γ）的水平,从而抑制肠道抑制炎症、修复肠粘膜损伤,达到治疗溃疡性结肠炎的目的。     

马甲子的三萜类成分研究

目的研究鼠李科马甲子属植物马甲子Paliurus ramosissimus中三萜类化学成分。方法通过开放硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱等多种方法进行分离、纯化、制备,并通过化合物的理化性质、红外光谱、质谱、核磁共振波谱等方法对化合物进行结构鉴定和解析。结果从马甲子地上部分的95%乙醇水提取物的醋酸乙酯萃取部分中分离得到6个三萜类化合物,分别鉴定为22β,24-二羟基-A(1)-去甲-2,20(29)-羽扇豆二烯-27,28-二羧酸(1)、大枣烯酸(2)、3-O-原儿茶酰美洲茶酸(3)、美洲茶三酸(4)、2-O-咖啡酰麦珠子酸(5)、3-O-咖啡酰麦珠子酸(6)。结论化合物1为新化合物,命名为马甲子酸A,化合物2~6为首次从该植物中分离得到,且首次报道化合物3的完整核磁数据。     

基于全基因组序列的耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药与毒力研究

目的明确耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）临床主要流行株CC92克隆复合群（CC92）基因组中耐药基因和毒力基因的分布,并探讨CRAB耐药和毒力的分子特征。 方法本研究共纳入2019年1～7月自首都医科大学附属北京地坛医院检验科分离的33株CRAB分离株,行细菌全基因组测序研究。利用CLC Genomics Workbench v10.0软件对全基因组测序数据进行序列的质量修整后,开展序列拼接、组装与注释,并进行耐药基因与毒力基因研究,分析CC92克隆复合群CRAB基因组中携带的耐药基因和毒力基因的分布。 结果基因组测序数据分析表明,33株CRAB菌株中30株为CC92型克隆复合群（包括ST195、ST208、ST369和ST540）,2株为ST229型,1株为国际上未报道新序列型别。以上CRAB中包括大量的耐药基因,包括大环内酯类、四环素和链霉素耐药基因在内的8～18个耐药基因,以及包括编码与侵袭和黏附等毒力功能相关的12种毒力基因。同时,本研究发现CC92克隆复合群,除携带碳青霉烯类耐药基因以外,还携带了其他非CC92克隆群不具备的耐药基因（如bla_OXA-66和bla_TEM-1D）和毒力基因（如bauA和bap基因）。此外,在CC92克隆复合群中可能存在大环内脂类耐药基因[msr（E）和mph（E）]、氨基糖苷类的耐药基因（armA）、链霉素耐药基因（strA、strB）与四环素耐药基因[tet（B）]的重组。 结论CC92克隆复合群的CRAB基因组存在大量耐药基因和毒力基因,且存在耐药基因重组现象,迫切需要对CRAB进一步开展全基因组水平监测,为临床病原诊断和治疗提供必要的依据。