轴突导向因子semaphorin家族及其信号通路研究进展

在神经系统发育过程中，神经元的轴突只有精确的抵达其目标位置才能形成具有正常生理功能的神经网络。目前至少已经确认了4类起重要作用的轴突导向因子家族：semaphorins，slits，netrins和ehprins。其中semaphorins是一个至少包含20个成员的大家族，它的成员都是分泌型或与膜结合的蛋白。semaphorin的受体主要包括neuropilins和神经丛素（plcxins），ncuropilins可作为semaphorin的结合位点，而plexins则起信号转换器的作用。Rho GTP酶和CRMPs被认为是semaphorins信号通路中的重要物质，参与调节semaphorin引起的细胞骨架的改变。本文将对semaphofin家族成员的结构、功能及其胞内信号转导通路进行综述。     

TGFβ_1质粒DNA直接瘤内注射对小鼠肿瘤生长的影响

探讨裸ＤＮＡ质粒ＰＭＡＭｎｅｏ－ＴＧＦβ１小鼠瘤内直接注射后的表达及其对肿瘤生长的影响。方法肺腺癌细胞株ＬＭ３小鼠背部皮下接种，两周后成瘤。瘤体内多点多次直接注入质粒ＤＮＡＰＭＡＭｎｅｏＴＧＦβ１，并设空质粒和生理盐水注射组为对照，观察肿瘤生长情况。于第８周将小鼠处死，取新鲜的瘤组织提取ＲＮＡ，行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，并病理制片观察肿瘤组织结构的变化。结果ＴＧＦβ１基因治疗组肿瘤生长速度增快，但各组间肿瘤转移的差异无显著性。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实，注入到瘤体内的ＴＧＦβ１基因获得了高效表达。结论ＴＧＦβ１基因的瘤内表达可能通过某种机制刺激肿瘤的生长；裸ＤＮＡ质粒直接瘤内注射法作为ｉｎｖｉｖｏ基因转移手段有其不可低估的应用前景。     

血管内皮生长因子抑制剂结合活性试验两种结果分析方法比较

目的：对血管内皮生长因子抑制剂（VEGF Trap）结合活性试验两种结果分析方法进行比较,以考察两者的差异。方法：采用固定剂量的VEGF与系列稀释的VEGF Trap处理之后,检测未结合的VEGF的量,分别以未结合的VEGF量对VEGF Trap浓度梯度和未结合的VEGF检测板的OD值对VEGF Trap浓度梯度进行四参数方程拟合,两种方法计算该产品的结合活性。结果：两种方法均满足试验有效性条件,且血管内皮生长因子抑制剂供试品和标准品的半数抑制浓度（IC₅₀）均分别为3.68和3.6pmoL·L^-1,供试品的结合活性为102%。结论：证明了两种分析方法得到的结果完全一致。为同类产品结合活性计算方法的选择提供借鉴。     

Copines蛋白家族的研究进展

Copines蛋白家族是新近发现的一类分布广泛、进化保守的Ca2 依赖性磷脂结合蛋白,它们的结构特征为:N端有2个C2结构域,与突触结合蛋白(synaptotagmin)和蛋白激酶C的C2结构域不但高度同源,而且同样具有Ca2 依赖性的磷脂结合功能;C端有1个A结构域,与整合蛋白A结构域部分同源,是蛋白与蛋白相互作用的结构域。近年来研究表明,Copines家族成员与细胞的膜转运、胞内信号转导、肿瘤发生等重大生物过程都密切相关。     

CPNE5对NF-κB转录调控活性的影响

目的:研究CPNE5对TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性的影响,并探讨其作用机制.方法:用10 ng/mlTNF-α处理转染了pcDNA3.1或pcDNA3.1-CPNE5的HEK293细胞,用双荧光素酶报告基因实验检测不同转染组NF-κB的转录激活活性;Western印迹和细胞免疫荧光技术检测CPNE5表达上调对NF-κB入核的影响;凝胶阻滞实验研究CPNE5表达上调对NF-κB DNA结合能力的影响.结果:CPNE5可以显著抑制TNF-α对NF-κB的转录激活活性(P<0.0001);CPNE5不影响TNF-α诱导的NF-κB(P65)入核;CPEN5过表达降低了TNF-α诱导的NF-κB与DNA结合的能力.结论:CPNE5通过抑制NF-κB的DNA结合活性抑制TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性.     

人CPNE5多克隆抗体的制备

制备人CPNE5的多克隆抗体.将CPNE5基因中423bp(626-1048bp)的片段构建到原核表达载体pGEX-5X-1,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下表达蛋白,经SDS-PAGE分离纯化得到抗原肽段,质谱法鉴定后常规免疫家兔.用CL-4B柱纯化抗体.结果显示,成功表达并纯化了人CPNE5抗原肽段...     

CPNE5的A结构域对肿瘤坏死因子α诱导核因子κB活化的影响

[目的]研究CPNE5的A结构域(AD)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活核因子κB(NF-κB)转录活性的调控作用。[方法]用PCR法扩增AD序列,将其构建EGFP-N1载体上,在真核细胞中表达融合蛋白AD-GFP。以连有κB序列和表达水平受κB序列调控的荧光素酶基因的质粒为报告基因载体,将EGFP-N1、AD-GFP质粒分别与报告基因共转染到HEK293细胞中,经TNF-α处理后,用双荧光素酶报告基因系统测定荧光素酶的活性,检测它们对NF-κB转录活性的影响。[结果]构建了AD-GFP质粒;A结构域能够显著抑制NF-κB转录活性(P<0.05);AD对NF-κB转录活性的抑制具有剂量依赖性。[结论]CPNE5的A结构域能够剂量依赖性抑制NF-κB的转录激活活性。     

自体骨髓间充质干细胞促进大鼠坐骨神经缺损修复的实验研究

目的　观察自体骨髓间充质干细胞在神经再生室中的作用 ,探讨其作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性。方法　成年Wistar大鼠 2 4只 ,随机分成 3组 ,每组 8只 ,硅胶导管桥接右侧 13mm的坐骨神经缺损 ,A组在神经再生室内植入骨髓间充质干细胞 ECM (extracellularmatrix ,ECM )凝胶 ;B组植入ECM凝胶 ;C组注入生理盐水。术后 12周 ,进行大体观察及坐骨神经功能指数测定、电生理检测、神经组织学等观察。结果　A、B两组均有再生神经生成 ,但A组各项检测指标均优于B组 (P <0 0 5或 0 0 1)。结论　自体骨髓间充质干细胞能够促进周围神经再生 ,可以作为种子细胞应用于外周神经组织工程。     

整体原位杂交研究mCcd1在小鼠胚胎发育过程中的表达

目的：研究mCcdl新基因在小鼠胚胎发育过程中的基因表达，为其功能研究提供线索。方法：用地高辛标记mCcd1 RNA探针，对E9～E11．5小鼠整体胚胎进行原位杂交，检测胚胎发育过程中基因的表达。结果：在E9～E11．5都有不同程度的表达，E9和E10．5全身都表达，但表达量低。在E11．5的小鼠胚胎开始神经特异性表达，在中脑、眼原基、端脑、菱脑、问脑和脊髓观察到清晰的杂交信号。结论：mCcd1在胚胎发育过程中的表达有阶段性，在E9和E10．5广泛表达，而在E11．5该基因表现出神经系统特异性表达，这些提示它可能参与了神经系统的发育。