错位双链聚核苷酸注射液的质控方法研究

目的:研究建立错位双链聚核苷酸(polyI:C12U)注射液的质控方法。方法:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定碱基比例;采用紫外吸收光谱法测定样品的增色效应、最大吸收波长、OD250/OD260和OD280/OD260;采用琼脂糖电泳法测定相对分子质量范围;其余项目按中国药典三部进行测定。结果:建立了该产品的质量检测方法,测得样品的碱基比例C/U为15.8,I/C为1.11;增色效应为63.5%,最大吸收波长为263 nm,OD250/OD260为0.98,OD280/OD260为0.60;相对分子质量分布在100～1000bp范围内。其余各项指标均符合规定。结论:建立的检验方法和质量标准为有效地控制错位双链聚核苷酸注射液的质量奠定良好基础。     

中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品的研制

 目的 建立中国仓鼠卵巢细胞DNA残留量定量测定用国家标准品。方法 使用QIAGEN Genomic-tip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备了中国仓鼠卵巢细胞基因组DNA作为标准品原料,通过紫外分光光度法和电泳进行纯度和含量测定后分装,采用紫外分光光度法对我国第一批中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品进行协作标定,并评价其稳定性和适用性。结果 中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品经检测,A₂₆₀/A₂₈₀均在1.7～1.9之间,电泳图谱只有单一条带,符合规定。该标准品经6家实验室协作标定共90次,几何平均含量为93.63 μg·mL^-1,平均含量的95%可信区间为92.86～94.40 μg·mL^-1,单次测定的95%参考值范围为86.51～100.89 μg·mL^-1,平均可信限率为0.81%。加速热稳定实验表明,该标准品在-20、4、25、37 ℃条件下放置4个月,DNA含量无明显改变,但37 ℃条件下A₂₆₀/A₂₈₀有下降趋势;-20、4、25 ℃条件下电泳结果为单一条带,37 ℃条件下DNA有降解条带。-20 ℃贮存1年的长期稳定性结果显示,标准品DNA浓度及A₂₆₀/A₂₈₀无显著性差异,电泳条带单一,因此-20 ℃条件下长期保存标准品稳定性较好。在标准品适用性研究中,利用该标准品进行荧光染色法测定,标准曲线r值为0.999 0以上,在0.781～100 ng·mL^-1之间线性良好,各稀释度RSD均小于10%;利用该标准品进行定量PCR法测定,标准曲线r值为0.990 0以上,在10^-2～10³ pg之间线性良好,熔解曲线可见单一峰出现。结论 该批中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于荧光染色法和定量PCR检测中国仓鼠卵巢细胞DNA残留量,含量定为93.63 μg·mL^-1,批号为270026-201101。     

用图像分析减少整体原位杂交技术中的假阳性结果

整体原位杂交技术（Whole-mount in situ hybridization）已被应用于对生物基因表达的研究上,它可以比较直观全面地看到基因的表达部位,为研究该基因的功能提供线索,而不用象切片杂交需将结果迭加分析进行三维重建。此外,该技术还可以在单个细胞水平定位表达,甚至可观察到亚细胞结构的分布。因此该技术已成为研究新基因表达的有力手段。     

热损伤对大鼠中枢D1受体及信号转导的影响

实验大鼠预先分别给予不同药物后置于相同的热环境中，实施热损伤，同时观察大鼠体温升高速率 伤后立即检测纹状体中Ｄ１Ｒ的平衡解离常数和最大结合容量，测定纹状体中ＣＡＭＰ的浓度。检测纹状体细胞中的钙调素的相对活性，从Ｄ１Ｒ及其信号转导的角度，探讨多巴胺受体影响体温调节的机制。     

人Slitrk1基因对PC12细胞增殖和分化的影响

目的研究人Slitrk1基因过表达对PC12细胞增殖和分化的影响。方法PCR扩增人Slitrk1 CDS，克隆到pcDNA4／myc-His A载体，构建重组质粒pcDNA4／St1，分别以空载体和重组质粒转染PC12细胞，RT-PCR法鉴定出阳性转染细胞，观察空载体转染的PC12细胞（pcDNA4／PC12）和过表达Slitrk1的PC12细胞（ST1／PC12）的表型并用MTT法检测细胞增殖情况。结果与空载体转染的PC12细胞相比，过表达Slitrk1基因的细胞增殖速度明显减慢。pcDNA4／PC12与野生型PC12细胞表型一致，均为悬浮成团生长，细胞少有突起，而ST1／PC12细胞大部分贴壁生长，突起多见，呈分化状态。结论过表达人Slitrk1基因能够抑制PC12细胞增殖，促进细胞的贴壁及突起长出。人Slitrk1基因可能有促进PC12细胞神经分化的作用。     

骨髓增生异常综合征和急非淋血血病中癌基因及抑癌基因扩…

应用核酸杂交技术分析了癌基因ｃ－ｍｙｃ、Ｎ－ｒａｓ和抑癌基因Ｐ５３在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）和急非淋白血病（ＡＮＬＬ）中的扩增情况。结果发现，有３例（３３％）的ＭＤＳ存在Ｐ５３抑癌基因的２倍扩增，本实验中Ｐ５３抑癌基因的扩增发生在ＭＤＳ的较晚期阶段；１例ＡＮＬＬ中存在癌基因ｃ－ｍｙｃ和抑癌基因Ｐ５３的共扩增，且发现扩增与ＭＤＳ的分型及ＡＮＬＬ的临床病情有一定的相关性。     

骨髓增生异常综合征和急非淋白血病患者Ki－ras癌基因12位密码子点突变

应用ＰＣＲ技术和寡核苷酸探针杂交检测４２例患者骨髓Ｋｉ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子点突变。结果表明，在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者中１例ＭＤＳ（ＲＡＥＢ－Ｔ）患者（１／６）发生了ＧＧＴ→ＡＧＴ的点突变，此患者诊断后３个月转为急性白血病。在急非淋白血病（ＡＮＬＬ）患者中（３／９）检测到上述同样位点点突变，其中１例发生了ＧＧＴ→ＡＧＴ和ＧＧＴ→ＴＧＴ的双突变；７例ＡＮＬＬ缓解期患者未检测到Ｋｉ－ｒａｓ的突变；２例小细胞低血色素贫血和１例巨核细胞增生性血小板降低患者亦检测到突变。对实验结果特别是Ｋｉ－ｒａｓ癌基因的点突变在ＭＤＳ转急性白血病中的意义进行了讨论。     

热损伤对大鼠纹状体多巴胺受体基因表达的影响

目的:研究热损伤对纹状体多巴胺受体D1 R,D2R基因表达水平以及D2R前体mRNA剪接的影响.方法:采用RT-PCR的方法分析43℃热损伤对大鼠纹状体多巴胺受体D1 R,D2R基因表达的影响;用RNA酶保护实验检测43℃热损伤后D2R mRNA剪接的变化.结果:43℃热损伤30min后,D1R表达量显著降低,D2R表达量升高.D2R长短片段D2RL/D2RS的比值较对照组明显升高,D2RL的转录占优势.结论:D1R,D2R及D2R长短片段比值变化结果为阐明热损伤的分子机制提供了实验依据.     

肥胖基因及其缺氧诱导性表达调控研究进展

自从1994年Zhang首次克隆出肥胖基因(obese gene，ob基因)之后，有关ob基因的研究已有很多报道。本文着重对ob基因的结构与生理功能，缺氧时06基因的诱导性表达调控，低氧与肥胖的关系作一综述。     

Semaphorins与肿瘤的发生和转移

Semaphorins是一大类具有保守Sema结构域的信号蛋白。该家族分为8个亚群，目前已发现30多个成员，有分泌型、跨膜型和GPI锚定3种类型。在病毒、非脊椎动物和脊椎动物中都已发现Semaphorins分子的存在。该家族蛋白主要有2种受体：plexins和neuropilins，它们对Semaphorins功能的发挥非常重要。Semaphorins首先是作为神经系统中一种重要的神经导向分子而被发现和认识的。起初的研究多围绕其在神经系统轴突导向中所发挥的作用而进行，发现Semaphorins分子可以抑制或促进轴突的生长。但现在越来越多的研究表明，除了在神经系统中具有重要作用外，Semaphorins分子在肿瘤生长、血管内皮细胞迁移、免疫反应等方面也有重要的生物学功能。Semaphorins分子通过促进或抑制肿瘤血管发生而对肿瘤的发生发展进行调节。