双色荧光原位杂交用于慢性粒细胞白血病干扰素治疗效果的监测

为了探讨双色荧光原位杂交（D-FISH）方法对CML病人干扰素治疗后疗效监测的意义，本研究采用D-FISH方法对慢性粒细胞白血病（CML）病人应用干扰素治疗前后骨髓间期核细胞进行bcr/abl融合基因的检测，并与RT-PCR方法检测bcr/abl mRNA及传统细胞遗传学方法检测Ph染色体的结果进行比较。结果显示，22例CML病人D-FISH bcr/abl融合基因在干扰素治疗前均为阳性，其平均检出率在干扰素治疗前后分别为96.4％和58.6％，其中2例治疗前P染色体阴性病人，D-FISHbcr/abl融合基因在干扰素治疗前后平均检出率分别为94.0％和70.1％。D-FISH方法检测的22例病人中，4例为部分反应，4例为微小反应，其余14例为无反应。与传统的细胞遗传学方法相比较具有良好的相关性。结果：D-FISH方法直接检测CML病人间期核细胞的bcr/abl融合基因，克服了传统的细胞遗传学只能进行分裂中期核细胞分析及RT-PCR方法不能定量检测的不足，为CML干扰素治疗后克隆缓解程度的评定提供了更方便、可靠的方法。     

乙酰化肌细胞增强因子2D调节Nur77基因对T细胞凋亡的影响

目的:Nur77是介导T细胞凋亡的重要基因,它的激活需要第二信使钙离子,而Nur77基因启动子的钙反应元件是转录因子肌细胞增强因子2D的结合位点.探讨在Nur77诱导T细胞凋亡过程中肌细胞增强因子2D是否可以被乙酰化,以及通过调节Nur77基因乙酰化对T细胞凋亡的影响.方法:实验于2006-11/2007-09在吉林大学第一医院血液肿瘤科完成.①材料:大肠杆菌DH5α、pcDNA3质粒由吉林大学第一医院中心研究室保存.pET32M质粒、Flag-p300质粒、pSilencerTM-p300 RNAi质粒由香港科技大学Zhengguo Wu博士馈赠.NFATp质粒由哈佛大学Yun Chen博士馈赠.Jurkat细胞由吉林大学第一医院血液肿瘤科提供.②实验方法:PCR法产生全长的Nur77和依赖Nur77的荧光报告基因被亚克隆到pcDNA质粒中,产生的肌细胞增强因子2D(1-514)、(1-121)、(1-300)、(301-514)各片段以及含4个赖氨酸(K245/K250/K267/K279)位点突变为精氨酸位点的肌细胞增强因子2D (4KR)突变体亚克隆到pcDNA后在氨基端含有Flag抗原簇,于细菌表达载体上进行质粒构建,验证正确的质粒使用脂质体DMRIE-C进行转染.③实验评估:将Nur77荧光报告基因与肌细胞增强因子2D、p300、NFATp共转染到Jurkat细胞中,检测p300对肌细胞增强因子2D促进Nur77转录的影响.免疫沉淀法检测内源性肌细胞增强因子2D是否能够被乙酰化,以及阻滞p300表达后是否影响其乙酰化.体外乙酰化法检测肌细胞增强因子2D的乙酰化位点.荧光素报告分析法检测肌细胞增强因子2D的乙酰化功能缺失对Nur77转录活性的影响.采用流式细胞仪检测其功能缺陷对Nur77诱导T细胞凋亡的影响.结果:①肌细胞增强因子2D与NFATp的二聚体虽然不能促进Nur77的转录,但p300、NFAT、肌细胞增强因子2D的三聚体却能明显促进Nur77的转录,且p300与肌细胞增强因子2D的二聚体也明显促进Nur77的转录.②PMA/Iono活化钙信号传导通路后,肌细胞增强因子2D被乙酰化.当内源性p300RNAi后,p300的表达被阻滞时,肌细胞增强因子2D的乙酰化水平显著下降.③K245,K250,K267,K279氨基酸同时突变可以使肌细胞增强因子2D乙酰化程度大部分丧失,说明在体外这4个赖氨酸位点是肌细胞增强因子2D的主要乙酰化位点.④与空载体比较,转染乙酰化缺陷的肌细胞增强因子2D可使Nur77转录功能提高2.48倍;与转染野生型的肌细胞增强因子2D比较,转染乙酰化缺陷的肌细胞增强因子2D能降低Nur77基因70.4%的转录功能.⑤与空载体比较,Nur77表达能够促进T细胞凋亡,早晚期凋亡之和从4.3%提高至16.3%;共表达野生型肌细胞增强因子2D与Nur77能够进一步促进T细胞的凋亡,早晚期凋亡之和从16.3%提高到31.0%;但肌细胞增强因子2D乙酰化功能缺失的突变体肌细胞增强因子2D明显降低Nur77介导的T细胞凋亡,早晚期凋亡之和从16.3%降低到9.2%.结论:p300对肌细胞增强因子2D促进Nur77的转录起主要作用.肌细胞增强因子2D在Nur77诱导的T细胞凋亡过程中可以被乙酰化,乙酰化的肌细胞增强因子2D通过上调Nur77基因的转录来促进T细胞凋亡.     

中学生心理健康状况的调查分析

目的探讨青岛市中学生的心理健康状况。方法被试从青岛市两所高中、三所初中以班为单位整群抽取，采用自编一般资料问卷、症状自评量表（SCL-90）进行测查。结果有15．30%的学生存在明显的心理问题，最常见的是强迫、敌对、人际关系敏感；初中生在总均分及躯体化、焦虑、敌对、恐怖、精神病性等五因子上的均分显著高于高中生，其差异有统计学意义；女生在躯体化、抑郁、焦虑、恐怖等四个因子的均分显著高于男生，其差异有统计学意义。结论对中学生的心理健康教育不容忽视，尤其是初中生及女生。     

多层螺旋CT扫描用于Ⅲ期非小细胞肺癌患者三维适形放射治疗计划中的价值分析

目的探讨多层螺旋CT扫描在Ⅲ期非小细胞肺癌(NSCLC)患者三维适形放射(3DCRT)治疗计划中的应用价值。方法收集接受3DCRT的150例Ⅲ期NSCLC患者,分为对照组和观察组,各75例。对照组按照常规CT方法制定放疗计划,观察组采用多层螺旋CT扫描技术制定放疗计划。比较两组客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)、毒副反应及血清中癌胚抗原(CEA)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平。结果对照组DCR 84.00%,观察组DCR 93.33%,两组DCR差异无统计学意义(P>0.05);观察组ORR 80.00%,高于对照组的57.33%(P<0.05)。观察组治疗后血清CEA、VEGF和MMP-9水平均低于对照组(均P<0.05)。观察组放射性肺炎、放射性食管炎发生率均低于对照组(均P<0.05)。结论多层螺旋CT扫描能够提高Ⅲ期NSCLC患者3DCRT定位准确性及放疗有效率,减少放射毒副反应。     

多学科协作式肿瘤学教学团队的形成及其运行机制

基于医学发展背景,尤其是肿瘤学的学科特色及医学教育改革的趋势,组成多学科性、专家型教学团队,进一步确立课程目标及教学模式,重视教材建设,强化实践教学,注重以知识综合运用为前提、临床思维能力训练为目的的跨学科教学。     

调制中频电中药离子导入治疗糖尿病周围神经病变的临床研究

目的：探讨调制中频电中药离子导入在对糖尿病周围神经病变进行治疗时的效果以及其作用的机理。方法：将糖尿病并发周围神经病变患者57例分为观察组32例和对照组25例。对照组在进行糖尿病基础治疗的同时联合使用维生素以及能量合剂;观察组除了进行常规的糖尿病基础治疗以外,通过自制的经络疏通仪给予中药离子导入。两组均进行临床疗效评价和肌电图检查分析。结果：观察组临床疗效明显优于对照组,差异统计学意义（u=3.731,P=0.0002）。观察组治疗后神经感觉和运动传导速度较治疗前有明显提高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：经络疏通仪的半波型调制中频电可以有效地改善病变部位的血液循环情况,这对中药离子导入起到了一定的促进作用,从而对糖尿病周围神经病变有较好的治疗作用。     

术中椎旁肌封闭对控制腰椎手术后疼痛的疗效观察

【目的】探讨术中在椎旁肌肉中注射药物对控制腰椎手术后疼痛的治疗作用。【方法】153例腰椎后路手术患者,分为肌肉封闭组78例,注射利多卡因+罗哌卡因;对照组75例,不作封闭治疗。分别观察术后不同时间两组VAS疼痛评分、住院期间肢体感觉、肌力、腱反射、平卧翻身及下地行走时间等。【结果】术后1d、1周、2周VAS评分,椎旁肌封闭组为(5.75±0.76)、(4.22±0.80)、(3.37±0.79),对照组则为(7.82±0.69)、(6.32±0.79)、(5.53±0.79),各时间点相比差异有统计学意义(P<0.01)。椎旁肌封闭组对止痛药物的依赖性低,患者术后平卧翻身时间(1.85±0.31)d和下地行走时间(3.09±0.39)d均较对照组(2.09±0.36)d和(3.47±0.43)d缩短,差异有统计学意义(P<0.01)。观察期间封闭组没有发现明显的胃肠道反应、心血管系统异常反应、尿潴留等不良反应。【结论】术中椎旁肌封闭能有效控制腰椎手术后的早期疼痛反应疼痛,对术后功能恢复有利。     

人FL基因高效真核表达载体的构建及其在COS—7细胞中的表达

目的：构建人FL真核表达载体－pIRS1neo/hFL,观察其在COS－7细胞 中的表达。方法：采用RT－PCR方法自人白血病细胞系TF－1中克隆可溶型FL（Flt3-ligand)cDNA片段,测序鉴定正确后,插入真核表达载体-pIRES1 neo中的EcoR Ⅰ和BamHI位点,构建hFL真核表达载体－pIRES1neo/hFL。脂质体介质法将其转染COS－7细胞,72h以RT－PCR检测转染细胞中外源hFL基因的转录、ELISA法及脐血CD34^ 细胞增殖实验测定转染细胞上清上hFL的含量和活性。结果：酶切鉴定表明成功构建了重组真核表达载体－pIRES1neo/hFL;外源hFL基因能在转染细胞中有效转录;ELISA法测得72h后培养上清中的hFL含量为每24小时251ng/10^6 cells,并且分泌的hFL具有良好的生物学活性。结论：构建hFL真核表达载体在COS－7细胞中具有良好的表达活性。     

人脐血CD_(34)~ 细胞体外诱导树突状细胞及其功能的检测

目的　探讨人脐血CD 34 细胞体外诱导树突状细胞 (dendriticcells ,DCs)的可能性 ,并检测DCs的功能。方法　利用吸附单克隆抗体 磁珠分离系统 (MACS)获得脐血CD 34 细胞 ,体外以重组的人干细胞集落刺激因子 (hSCF)、人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (hGM CSF)、人肿瘤坏死因子α(hTNF α)、人酪氨酸激酶受体家族III的配体 (hFL)诱生DCs。流式细胞仪检测DCs的表型 ,3H TdR掺入法检测DCs体外刺激同种异体T细胞增殖的功能 ,最后通过乳酸脱氢酶法检测DCs活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤性。结果　从人脐血分离到的CD 34 细胞 ,经hSCF、hGM CSF、hTNF α、hFL共同培养后 ,第 7天镜下即可见典型形态的DCs ,第 10天时明显增多 ,细胞表型检测见CD 1a 细胞的比例增加到 (2 8± 4) %(P <0 0 1) ,人类白细胞抗原DR(HLA DR)表达占 (94± 11) %。在三种不同的混和比例下 ,DCs均可刺激异源T细胞增殖 ,其中以DCs∶T细胞为 1∶5时增殖最明显。而且被激活的T细胞对三种不同组织来源的肿瘤细胞均产生了明显的杀伤性 (P <0 0 1)。结论　人脐血CD 34 细胞体外经细胞因子诱导培养 ,可生成大量具有典型功能的成熟DCs。     

人脐带血CD34^＋细胞体外诱导树突状细胞及其激活T细胞抗肿瘤免疫反应的实验研究

树突状细胞 (dendriticcells ,DCs)是目前已知的体内功能最强 ,并唯一能激活初始型T细胞的抗原呈递细胞[1 ] 。临床上将负载了肿瘤抗原的DCs回输机体用于某些恶性肿瘤的治疗 ,已收到了令人鼓舞的抗肿瘤效应[2 ,3] 。但是 ,目前无论用骨髓CD34 细胞或外周血单个核细胞 (MNC)作体外诱导 ,要获得足够数量的DCs进行生物治疗 ,在技术上尚存在相当大的困难。为探讨脐带血作为DCs来源组织的可能性 ,我们利用脐带血CD34 细胞在体外进行DCs的定向诱导分化 ,并对诱导的DCs进行了功能检测。材料与方法材料来源CD34 细胞MACS免疫磁性分离…