沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探究沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:选用37例ccRCC组织及癌旁组织样本，通过提取样本总RNA并行逆转录及转染，利用qRT-PCR检测lncRNA TUG1在ccRCC组织、细胞系及癌旁组织中的表达，并通过CCK-8法、流式细胞检测法及划痕实验检测沉默lncRNA TUG1对ccRCC细胞A704、A498增殖、凋亡及迁移的影响，采用统计软件进行数据处理，探究lncRNA TUG1在ccRCC中的表达及临床意义。结果:qRT-PCR检测lncRNA TUG1表达情况，结果显示:lncRNA TUG1在ccRCC组织中的表达显著高于癌旁组织，在肾细胞癌细胞系A704和A498中的表达明显高于正常细胞系HK2，差异有统计学意义（P＜0.05）；CCK-8检测细胞增殖情况，结果显示:A704和A498细胞经转染干扰后细胞增殖活性较对照组显著降低（P＜0.05），沉默lncRNA TUG1可抑制细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡情况，结果显示:A704和A498细胞凋亡比例较空白对照组明显增多（P＜0.05），沉默lncRNA TUG1可促进细胞凋亡；划痕实验检测细胞迁移能力，结果显示:A704和A498细胞迁移能力较空白对照组降低（P＜0.05），沉默lncRNA TUG1可抑制细胞迁移。结论:沉默lncRNA TUG1可诱导ccRCC细胞凋亡，抑制其增殖、迁移，可作为临床研究的新靶点。     

番茄红素通过SIRT1/NF-κB轴抑制肾癌786-O细胞增殖且促进其凋亡

目的：探讨番茄红素通过沉默信息调节因子1（SIRT1）/核因子-κB（NF-κB）轴对肾癌786-O 细胞增殖、凋亡的影响。方法：常规培养人正常肾细胞HK-2和人肾癌细胞786-O ，实验分为对照组（0.1% DMSO）、顺铂组（40 μg/mL）、番茄红素低质量浓度（2.5 μg/mL）组、番茄红素高质量浓度（5 μg/mL）组、番茄红素（5 μg/mL）+EX527（SIRT1抑制剂）（3 μmol/L）组。CCK-8法、克隆形成实验检测各组HK-2、786-O 细胞的增殖能力，流式细胞术检测各组786-O 细胞的凋亡，RH123、DCFH-DA 染色分别检测各组786-O 细胞的线粒体膜电位（MMP）、活性氧（ROS）水平，WB法检测各组786-O细胞中凋亡相关蛋白 BAX、Bcl-2、C-casp3和SIRT1/NF-κB轴相关蛋白 SIRT1、p-NF- κB 蛋白的表达。786-O 细胞移植瘤实验检测番茄红素低（5 mg/kg）、高质量浓度（20 mg/Kg）、顺铂（2 mg/kg）、番茄红素（20 mg/kg）+EX527（10 mg/kg）对移植瘤生长的影响，TUNEL法检测各组移植瘤组织中的细胞凋亡。结果：番茄红素呈剂量依赖性地抑制786-O细胞的增殖活性，番茄红素、顺铂均明显抑制786-O细胞的克隆形成能力且促进其凋亡，细胞中MMP损伤率升高而ROS 水平降低，凋亡相关蛋白BAX、C-casp3 表达均显著升高（均P<0.05）而Bcl-2表达下调（P<0.05），SIRT1表达显著升高（P<0.05）而p-NF-κB的表达显著降低（P<0.05），上述作用均可被EX527 逆转；番茄红素、顺铂抑制786-O细胞移植瘤的生长且促进其细胞凋亡，其作用也能被EX527 逆转。结论：番茄红素通过上调SIRT1、抑制NF-κB通路的激活进而抑制786-O细胞增殖且诱导其凋亡。     

姜黄素诱导激活FOXO3a促进肾透明细胞癌细胞的增殖抑制和细胞凋亡

目的:研究姜黄素(curcumin)对人肾透明细胞癌（clear-cell renal cell carcinoma,ccRCC）细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,及叉头框蛋白O3a（Forkhead box protein O3a,FOXO3a）在姜黄素抗肿瘤效应中发挥的关键作用。方法:MTT法用于检测姜黄素对ccRCC细胞活力的抑制作用;Annexin V/PI双染实验检测姜黄素对ccRCC细胞的诱导凋亡作用;免疫印迹法（Western blot,WB）检测姜黄素对FOXO3a、p-FOXO3a及下游BIM表达的影响,和凋亡蛋白caspase 3的激活情况。实时荧光定量PCR技术（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测FOXO3a转录水平。小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）技术用于沉默ccRCC细胞系中FOXO3a的表达。结果:通过对6种ccRCC细胞系（ACHN、786-O、769-P、A-498、Caki-1及Caki-2）FOXO3a蛋白基础表达水平进行检测,选取FOXO3a表达较高的786-O细胞系为研究对象。0~160 μmol/L姜黄素处理786-O细胞24 h和48 h后,呈时间和浓度依赖性对细胞活力具有显著抑制作用;786-O细胞在0~80 μmol/L姜黄素处理24 h后,明显促进细胞凋亡水平,且伴随着凋亡相关蛋白caspase 3的激活。786-O细胞中,姜黄素抑制p-FOXO3a,促进FOXO3a活化,并上调下游BCL-2家族促凋亡蛋白BIM表达水平。在siRNA沉默FOXO3a蛋白表达后,姜黄素对786-O细胞的生长抑制和诱导凋亡作用被抑制。结论:姜黄素通过诱导激活FOXO3a,在ccRCC细胞上发挥生长抑制和诱导凋亡的抗肿瘤作用。     

RG108 调控 TFPI-2 甲基化/TMPRSS4 表达对 NSCLC 细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨RG108对人非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）A549和H1299细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养A549和H1299细胞，经不同浓度RG108处理后，采用MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖率、细胞周期和凋亡水平；qPCR和Western blotting（WB）法检测细胞内TFPI-2 mRNA和蛋白的表达及TMPRSS4的表达量，以甲基化特异性PCR和比色法检测细胞中TFPI-2启动子区域甲基化的状态和程度；分别采用siRNA-TFPI-2和pcDNA3.0-TMPRSS4质粒敲减TFPI-2或过表达TMPRSS4，然后检测细胞增殖率及凋亡率的变化。结果：RG108处理后，A549和H1299细胞的增殖率显著降低（均P<0.05）、细胞周期阻滞于G1/S期（均P<0.05）而凋亡率显著增加（均P<0.01），细胞中TFPI-2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P<0.01和P<0.05），同时细胞中TFPI-2启动子区域甲基化程度显著降低（均P<0.05）、TMPRSS4的表达也明显减少（P<0.05）。沉默TFPI-2表达后，A549和H1299细胞的增殖水平显著增加（均P<0.05），而转染pcDNA3.0-TMPRSS4质粒则显著降低细胞的凋亡率（均P<0.05）。结论：RG108能够通过抑制TFPI-2甲基化负向调控TMPRSS4表达进而抑制A549和H1299细胞的增殖，并促进其凋亡。     

HSPA5通过抑制铁死亡调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨热休克蛋白70蛋白5（heat shock 70 kDa protein 5，HSPA5）通过铁死亡对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot，WB）检测HSPA5和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)在宫颈癌和癌旁组织中的表达情况，通过TCGA数据库分析所有宫颈鳞状细胞癌和宫颈内膜腺癌（CESC）中HSPA5与患者总生存率间的相关性。体外培养人宫颈癌HeLa和SiHa细胞系，分别感染shHSPA5和shCtrl慢病毒，构建稳定的宫颈癌HSPA5敲低株，用qRT-PCR和WB检测HSPA5敲低之后铁死亡相关蛋白GPX4的表达情况。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（Fer-1）或激活剂Erastin处理细胞后，采用CCK-8和EdU检测细胞增殖情况；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量；还原型谷胱甘肽（GSH）试剂盒和丙二醛（MDA）试剂盒分别测定GSH和MDA含量；流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（ROS）的情况。结果:与癌旁组织相比，宫颈癌组织中HSPA5与GPX4的表达显著升高，HSPA5高表达与患者预后不良有关；在HeLa和SiHa细胞中敲低HSPA5能够抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡；同时细胞内ROS、MDA和LDH的水平上调；HSPA5敲低后GPX4的mRNA和蛋白表达水平同时降低，此外细胞内GSH的含量降低；铁死亡抑制剂Fer-1逆转了HSPA5敲低导致的ROS和LDH的含量升高并抑制细胞凋亡；铁死亡激活剂Erastin和HSPA5敲低联合增加了细胞凋亡并抑制细胞增殖。结论:HSPA5在宫颈癌组织中表达上调，通过敲低HSPA5可激活铁死亡从而抑制宫颈癌细胞的增殖和促进细胞凋亡。     

TMEM45A在肾透明细胞癌中的表达及作用机制研究

目的 探讨TMEM45A(Transmembrane protein 45A,TMEM45A)在肾透明细胞癌(Clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达及作用。方法 利用R语言提取Oncomine数据库中TMEM45A相关研究的数据;利用GEPIA数据库在线分析TMEM45A表达水平与肾透明细胞癌分期及生存时间的关系;实时定量PCR和Western blot检测TMEM45A在肾透明细胞癌组织及肾癌细胞系中的表达;应用针对TMEM45A的siRNA转染Caki-1细胞后,实时定量PCR和Western blot验证TMEM45A表达降低,CCK8分析抑制TMEM45A表达后对细胞增殖的影响,实时定量PCR和Western blot分析低表达TMEM45A抑制细胞增殖的作用机制。结果 Oncomine数据库中共收集了384项TMEM45A相关的研究,35项有统计学差异,其中25项表达升高、10项表达降低。有4项研究与ccRCC相关,共有115例样本。分析发现,ccRCC中TMEM45A表达显著升高(P＜0.05);同时发现高表达的TMEM45A与ccRCC高分期及预后不良密切相关(P＜0.05)。与正常的肾脏组织相比,TMEM45A mRNA在肾透明细胞癌组织中表达明显升高(P＜0.05)。人肾癌Caki-1和786-0细胞中TMEM45A mRNA和蛋白表达高于正常肾小管上皮HK-2细胞。TMEM45A siRNA转染Caki-1细胞48 h、72 h后,细胞的增殖能力显著下降(P＜0.001)。同时发现抑制TMEM45A后,PCNA和Cyclin D1蛋白和mRNA表达明显下降(P＜0.05)。结论 TMEM45A在ccRCC中表达升高且与ccRCC分期、预后相关,可能通过调控PCNA和Cyclin D1参与肾癌细胞的增殖。     

基于TCGA数据库分析DTX2在肾透明细胞癌组织中表达的临床意义及其对肾癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的：基于TCGA数据库分析Deltex E3泛素连接酶2(DTX2)在肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的表达水平及临床意义,探讨DTX2对ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：利用TIMER数据库分析DTX2在泛癌组织中的表达水平,通过UALCAN数据库进一步验证ccRCC组织和癌旁组织中DTX2 mRNA和蛋白表达差异。使用UALCAN数据库中的TCGAccRCC队列数据集,分析ccRCC中DTX2表达与患者临床病理特征的相关性。通过K-M plot数据库分析DTX2表达与cc RCC患者预后的相关性。利用DAVID数据库对DTX2相关基因进行GO和KEGG通路富集分析。通过qPCR法检测DTX2基因在人胚肾293(HEK293)细胞和ccRCC细胞A498、Caki-1中的表达水平。利用siRNA技术分别将DTX2 siRNA及其阴性对照质粒转入A498、Caki-1细胞,采用CCK-8法、平板克隆实验、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测敲低DTX2对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：TCGA数据库分析结果表明,与癌旁组织相比,ccRCC组织中DTX2 mRNA和...     

NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及作用机制

目的 探讨NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及可能的作用机制。方法 人食管癌EC9706细胞分别转染NKX6.3（NKX6.3组）和空白质粒（miR-NC组），设空白对照组（Control组）。CCK-8法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞内活性氧、线粒体膜电位及细胞凋亡情况，Transwell 法检测细胞侵袭能力，Western blot检测增殖相关蛋白Ki67、侵袭相关蛋白（Vimentin、E-cadherin及N-cadherin），凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax及Caspase-3）的表达。结果 Control组、miR-NC组和NKX6.3组食管癌EC9706细胞中NKX6.3表达、细胞增殖能力、细胞内活性氧、线粒体膜电位、细胞凋亡及侵袭能力，以及Ki67、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达差异均有统计学意义（P＜0.01）。其中，NKX6.3组NKX6.3表达量、细胞内活性氧，细胞凋亡率，Vimentin、E-cadherin、Bax及Caspase-3蛋白表达水平较miR-NC组升高；而线粒体膜电位、细胞增殖率、细胞侵袭数目、N-cadherin及Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论 NKX6.3可抑制食管癌细胞增殖和侵袭，促进细胞凋亡，该作用可能通过调控食管癌细胞中的增殖凋亡相关蛋白表达及活性氧水平实现。     

肾透明细胞癌组织中RSK4的表达及临床意义

目的:检测核糖体S6蛋白激酶4（RSK4）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）中的表达,探讨其高表达与预后及对肾癌细胞系增殖的影响。方法:采用免疫组织化学EnVision法检测48例ccRCC标本及20例肾盂积水标本中RSK4蛋白的表达,用统计学方法分析RSK4的表达与患者临床病理特征及预后的关系;建立过表达RSK4的肾癌细胞系,检测RSK4过表达对肾癌细胞周期及增殖的影响。结果:48例ccRCC肿瘤组织标本中,RSK4的阳性率为75%（36/48）;在20例肾盂积水患者中,RSK4的阳性率为25%（5/20）,二者具有统计学差异（P＜0.05）;经统计学分析,RSK4的表达与ccRCC患者的年龄、性别之间未见明确相关性（P＞0.05）,但与肾透明细胞癌的WHO/ISUP分级显著相关（P=0.019）;单因素及多因素生存分析发现,RSK4的表达及WHO/ISUP分级与患者预后相关（P＜0.05）;过表达RSK4的肾癌细胞系增殖能力显著增强,对细胞周期也有明显的影响（P＜0.05）。结论:RSK4在ccRCC中的表达显著升高,与预后相关;RSK4过表达对肾癌细胞系的周期、增殖均有显著影响,提示RSK4在肾透明细胞癌中高表达,可能通过促进细胞增殖导致预后不良,而其具体作用机制尚有待进一步研究。     

siRNA抑制骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达及其生物学作用研究

背景与目的：sirtuin6(SIRT6)蛋白是对人体细胞生长、代谢调控及应激反应等具有重要作用的一种核蛋白,常在细胞核中发挥多种调控作用。但该蛋白在骨肉瘤中的作用还不清楚,本研究通过下调人骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达,观察其对U2OS细胞的作用。方法：设计合成SIRT6的siRNA序列,通过Lipofectamine^TM2000转染U2OS细胞系,通过蛋白质印迹法（Western blot）检测SIRT6蛋白的表达情况,利用流式细胞术检测细胞凋亡,细胞计数试剂盒（cellcounting kit-8,CCK-8）法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,CCK-8法分析对紫杉醇的敏感性。结果：成功构建SIRT6 siRNA序列,Western blot检测转染后24、48和72 h的蛋白水平,实验组较对照组明显降低。流式细胞术检测细胞凋亡也显示实验组凋亡增加（P＜0.05）。Transwell法检测结果显示,实验组侵袭与迁移能力较对照组下降（P＜0.05）。CCK-8法检测细胞生长情况,可见经紫杉醇处理后实验组生长较对照组下降明显,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：下调骨肉瘤U2OS细胞中SIRT6的表达可以抑制骨肉瘤细胞侵袭,促进凋亡,并增强骨肉瘤细胞对紫杉醇的化疗敏感性。     

Silent information regulator 2 promotes clear cell renal cell carcinoma progression through deacetylation and small ubiquitin-related modifier 1 modification of glucose 6-phosphate dehydrogenase

The regulatory relationship between silent information regulator 2 (SIRT2) and glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PD) in clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is still unclear. The present study aimed to explore the function of SIRT2 and its regulatory effect on G6PD in ccRCC. The Cancer Genome Atlas data mining of SIRT2 was first analyzed. Quantitative real-time PCR and western blot analyses were used to assess the mRNA and protein expression levels, respectively. Cell viability, colony formation, cell cycle, cell apoptosis, and TUNEL assays and EdU staining were used to investigate the roles of SIRT2 in ccRCC proliferation and apoptosis. The coimmunoprecipitation (Co-IP) assay was used to analyze the association between SIRT2 and G6PD in ccRCC cells. Quantitative Co-IP assay was used to detect the levels of G6PD ubiquitination and small ubiquitin-related modifier 1 (SUMO1). An in vivo experiment was also carried out to confirm in vitro findings. The results indicated that SIRT2 promoted ccRCC proliferation and inhibited apoptosis by regulating cell cycle and apoptosis related proteins. Silent information regulator 2 interacted with G6PD, facilitated its activity through deacetylation, and increased its stability by reducing its ubiquitination and enhancing its SUMO1 modification. Silent information regulator 2 also promoted ccRCC tumor development in vivo. Taken together, the present study indicated that SIRT2 promoted ccRCC progression by increasing G6PD activity and stability, and it could be a potential new diagnostic and therapeutic target for ccRCC.     

免疫相关基因HCST对肾透明细胞癌预后的影响及其机制

目的:分析造血细胞信号转导因子(hematopoietic cell signal transducer,HCST)在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）中的表达及与ccRCC预后、免疫浸润的关系,探讨HCST对ccRCC细胞生长侵袭的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库分析HCST基因在ccRCC组织中的表达水平。Cox比例风险模型分析HCST表达水平及临床特征与ccRCC患者预后的关系。肿瘤免疫评分数据库（tumor immune estimation resource,TIMER）分析ccRCC组织中HCST表达水平与免疫细胞浸润程度的相关性。体外培养ACHN细胞,分为对照组、siRNA阴性对照组和HCST siRNA组。MTT法、流式细胞实验和Transwell实验分别检测各组ACHN细胞增殖、凋亡和侵袭活性。蛋白质印迹法检测caspase-3、Bax、Bcl-2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果:与正常肾脏组织比较,HCST mRNA在ccRCC组织中的表达显著上调,且与肿瘤的分期、淋巴转移及远处转移正相关(P＜0.01)。HCST高表达、肿瘤T分期及M分期是影响 ccRCC患者预后的独立危险因素(P＜0.05)。ccRCC中HCST表达与CD8+T细胞、树突状细胞、NK细胞及Treg细胞的浸润程度正相关(P＜0.001)。与对照组比较,HCST siRNA组ACHN细胞的增殖活性、侵袭能力、Bcl-2、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),ACHN细胞凋亡活性、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P＜0.05)。siRNA阴性对照组与对照组比较上述各指标,差异无统计学意义(P＜0.05)。结论:HCST在ccRCC中表达上调,且与ccRCC患者的免疫浸润和预后相关。沉默HCST的表达可抑制ccRCC细胞的增殖与侵袭、促进其凋亡。     

MLK4低表达调控ROS/MAPKs信号通路诱导肾细胞癌细胞凋亡的机制研究

目的:观察MLK4低表达是否通过调控ROS/MAPKs信号通路诱导肾细胞癌细胞凋亡。方法:利用qRT-PCR和Western blot方法检测MLK4在人正常近端肾小管上皮细胞HK-2和肾细胞癌细胞系786-0中的表达情况；脂质体Lipofectamine 3000转染MLK4 siRNA（si-MLK4）至786-0细胞系后用qRT-PCR和Western blot两种方法检测肾细胞癌细胞系中MLK4的沉默效率；CCK-8和Ki-67方法检测si-MLK4对786-0细胞系增殖的影响，Transwell 方法检测si-MLK4对786-0细胞系迁移的影响，流式细胞术检测si-MLK4对786-0细胞系凋亡的影响，DCF-DA分析法检测si-MLK4对786-0细胞系ROS水平的影响，同时利用Western blot方法检测MAPKs信号通路的改变情况。结果:qRT-PCR和Western blot结果显示MLK4在人肾细胞癌细胞系786-0中表达量明显高于人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2；qRT-PCR和Western blot结果显示:相对于si-NC组，si-MLK4转染人肾细胞癌细胞系后MLK4在mRNA和蛋白水平表达量均降低；CCK-8和Ki-67结果显示si-MLK4抑制人肾细胞癌细胞系786-0增殖，Tranwell结果显示si-MLK4抑制人肾细胞癌细胞系786-0迁移，而流式细胞术结果显示si-MLK4促进人肾细胞癌细胞系786-0凋亡；DCF-DA分析结果发现si-MLK4促进人肾细胞癌细胞系786-0 ROS的产生，Western blot结果显示:p38、p-ERK1/2、p-JNK磷酸化水平明显增加，提示si-MLK4通过ROS/MAPKs信号通路诱导人肾细胞癌细胞系786-0的凋亡。结论:si-MLK4通过ROS/MAPKs信号通路诱导人肾细胞癌细胞系786-0的凋亡，提示MLK4可作为预防肾细胞癌发生发展的靶点，为治疗肾细胞癌提供了新的理论基础和思路。     

Aberrant DNA methyltransferase 1 expression in clear cell renal cell carcinoma development and progression

Objective： To better understand the contribution of dysregulated DNA methyltransferase 1 （DNMT1） expression to the progression and biology of clear cell renal cell carcinoma （ccRCC）. Methods： We examined the differences in the expression of DNMT1 in 89 ecRCC and 22 normal tissue samples by immunohistochemistry. In addition, changes in cell viability, apoptosis, colony formation and invading ability of ccRCC cell lines （786-0 and Caki-1） were assessed after transfection with DNMT1 siRNA. Results： We found DNMT1 protein was significantly higher expressed in ccRCC than that of in no-tumor tissues （56.2% and 27.3%, respectively, P=0.018）. The expression of DNMT1 was strongly associated with ccRCC tumor size, tumor pathology stage, histological grading, lymph node metastasis, vascular invasion, recurrence and prognosis. Moreover, knockdown of DNMT1 expression significantly inhibited ccRCC cell viability, induced apoptosis, decreased colony formation and invading ability. Conclusions： Expression of DNMTI protein is increased in ccRCC tissues, and DNMT1 expression is associated with poor prognosis of patients. Experiments in vitro further showed DNMT1 played an essential role in proliferation and invasion of renal cancer cells. Moreover, targeting this enzyme could be a promising strategy for treating ccRCC, as evidenced by inhibited cell viability, increased apoptosis, decreased colony formation and invading ability.     

FOXO1在肾癌组织和细胞中的表达及临床意义

目的:探讨FOXO1在肾癌组织和细胞中的表达及其与肾癌发生发展的关系。方法:实时定量PCR和Western blot检测肾癌细胞中FOXO1 mRNA和蛋白的表达情况;免疫组化方法检测肾癌组织中FOXO1蛋白的表达;应用针对人FOXO1基因的小干扰RNA在体外转染769-P细胞;CCK8检测细胞增殖情况。结果:免疫组化结果显示透明细胞肾癌和乳头状细胞肾癌FOXO1的阳性率低于嫌色细胞肾癌（P＜0.05）;FOXO1蛋白的表达与透明细胞肾癌的分期、分级有关（P＜0.05）;769-P细胞FOXO1 mRNA和蛋白表达水平高于786-O和Caki-1细胞;利用特异性的siRNA抑制FOXO1 mRNA和蛋白表达后,发现769-P细胞的增殖加快。结论:FOXO1表达下降与肾癌的分型和透明细胞肾癌的分期、分级有关,FOXO1可作为肾癌诊断和预后的标志物及治疗的靶点。     

转录因子BATF3通过调控波形蛋白促进肾透明细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的：探讨碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白3（BATF3）在肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的表达及其调控ccRCC细胞恶性生物学行为的分子机制。方法：收集2019 年3月至2022 年1月间在中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院手术切除的64例ccRCC组织和相应癌旁组织,qPCR 法检测ccRCC组织、癌旁组织和肾癌ACHN、786-O细胞中BATF3 mRNA的表达,免疫组化检测ccRCC 组织、癌旁组织中BATF3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征的关系。构建BATF3敲减及过表达质粒,分别转染786-O、ACHN 细胞,通过MTS 法、Transwell 实验检测BATF3 对786-O 或ACHN 细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,qPCR 法检测敲减或过表达BATF3 对786-O 或ACHN 细胞EMT 相关基因表达的影响,CHIP、双荧光素酶报告基因实验检测BATF3是否与波形蛋白（VIM）启动子区结合并调控其转录,MTS法、Transwell 实验检测同时过表达BATF3及敲减VIM对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果：与癌旁组织比较,ccRCC 组织中BATF3的mRNA和蛋白均呈高表达(均P<0.01),并且BATF3 mRNA 与ccRCC 的分化程度和TNM分期密切关联（均P<0.01）;与正常肾上皮细胞293T相比,BATF3 在ACHN 及786-O细胞中均呈高表达（均P<0.01）。敲减BATF3 表达均能明显抑制786-O 细胞的增殖、迁移、侵袭能力(均P<0.01),过表达BATF3则均能促进ACHN细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,敲减或过表达BATF3能抑制786-O 细胞或促进ACHN细胞的EMT相关基因的表达（均P<0.01）。BATF3可与VIM启动子区的位点结合,直接调控VIM的转录表达。同时过表达BATF3及敲减VIM可逆转过表达BATF3对786-O 细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结论：BATF3在ccRCC 组织中呈高表达,并与其分化程度和TNM 分期密切关联;BATF3 通过调控VIM 的表达影响ACHN、786-O 细胞的恶性生物学行为,其可作为临床治疗ccRCC的潜在靶点。