天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导PC12细胞凋亡JNK通路的影响

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP~+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其是否通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路发挥神经保护作用。方法:将32只SD大鼠随机分为空白组、天麻钩藤饮低、中、高剂量组,每组8只。天麻钩藤饮按照5.7,11.4,22.8 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备空白和含药血清。PC12细胞常规培养并分为空白组、模型组、天麻钩藤饮含药血清低、中、高剂量组,空白组和模型组加空白血清,其他3组加10%的天麻钩藤饮含药血清,孵育30 min后,模型组和含药血清组再加500μmol·L~(-1)MPP~+共孵育48 h后收集细胞,采用Cell Titer 96Aoueous MTS Reagent powder(MTS法)检测细胞存活率。后续实验分为5组,即:空白组,MPP~+组,MPP~++含药血清高剂量组,MPP~++SP600125组,MPP~++含药血清高剂量+SP600125组,采用Annexin VFITC/PI双染色法检测细胞凋亡,分光光度法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JNK,p-JNK,c-Jun,p-c-Jun蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低(P0.05);与模型组比较,10%的天麻钩藤饮低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加(P0.05)。后续试验中,与空白组比较,MPP~+组细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显升高(P0.05)。与MPP~+组比较,MPP~++含药血清高剂量组,MPP~++SP600125组均能够使细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显降低(P0.05),而MPP~++含药血清高剂量+SP600125组的作用明显高于MPP~++含药血清高剂量组(P0.05),但不高于MPP~++SP600125组。JNK和c-Jun蛋白表达无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与JNK信号通路密切相关。     

基于JNK通路探讨调更汤对GT1-7下丘脑神经元细胞凋亡的保护作用

目的:研究调更汤通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路改善下丘脑神经元细胞凋亡的作用机制。方法:采用下丘脑神经元细胞GT1-7细胞株,以三丁基氯化锡(TBTC)诱导模拟神经元细胞凋亡模型作为模型组(1 mg·L~(-1)),以17β-雌二醇(17β-E_2)为阳性药物作为17β-E2组(100 nmol·L~(-1)),调更汤低、中、高剂量组(31. 25,62. 5,125 mg·L~(-1))进行干预。以倒置荧光显微镜观察细胞形态学变化;细胞增殖毒性(CCK-8)法检测细胞活力; Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核的形态改变;Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染色法检测下丘脑神经元细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JNK通路凋亡相关蛋白凋亡信号调节激酶1(ASK1),JNK,p53,活化半胱氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)表达水平及JNK抑制剂SP600125干预后磷酸化JNK(p-JNK),cleaved Caspase-3的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞活力显著降低(P 0. 01),细胞凋亡率显著升高(P 0. 01),JNK通路相关蛋白磷酸化ASK1(p-ASK1),p-JNK,磷酸化p53(p-p53),cleaved Caspase-3的表达显著增加(P 0. 01)。与模型组比较,调更汤显著改善GT1-7细胞活力(P 0. 01),降低细胞凋亡率(P 0. 01),调节p-ASK1,p-JNK,p-p53,cleaved Caspase-3蛋白的表达;高剂量调更汤联合应用SP600125(10μmol·L-1)处理后,更显著的抑制GT1-7细胞p-JNK,cleaved Caspase-3的蛋白表达(P 0. 01)。结论:调更汤通过JNK通路改善下丘脑神经元细胞凋亡,为调更汤治疗绝经综合征和中枢神经保护作用提供理论依据。     

27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡

目的:实验以MDA-MB-231为研究对象,观察27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸(DY-17)诱导细胞凋亡作用。方法:采用MTT检测12,24,36,48,60,72 h细胞增殖活性。采用荧光染色技术检测DY-17诱导凋亡实验。运用流式细胞仪测定MDAMB-231的凋亡坏死率。采用Western blotting检测对照组、EGF组、EGF+DY-17 40μmol·L-1组、EGF+SP600125组的JNK,磷酸化JNK,Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达变化。结果:DY-17抑制MDA-MB-231细胞增殖呈剂量和作用依赖性。流式细胞仪检测DY-17(20,40μmol·L-1)诱导MDA-MB-231细胞凋亡坏死率分别为31.86%,49.91%,荧光显微镜下DY-17(20,40μmol·L-1)与对照组比较细胞发生凋亡坏死明显增加。与对照组比较,EGF组磷酸化JNK蛋白表达上调;与EGF组比较,EGF+DY-17组磷酸化JNK蛋白表达下调。与EGF组比较,EGF+DY-17组Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达均上调。结论:DY-17通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡。     

“病证结合”方案治疗排卵障碍性不孕症的随机对照研究

目的探讨天麻素对肌萎缩侧索硬化症h SOD1~(G93A) NSC34细胞模型的影响及机制。方法给予正常培养的NSC34细胞天麻素后,观察细胞形态活力变化。通过转染h SOD1~(WT)和h SOD1~(G93A)质粒,建立h SOD1~(WT)和h SOD1~(G93A)NSC34稳定细胞系后再给予天麻素干预以观察h SOD1~(WT)和h SOD1~(G93A) NSC34细胞形态和活力变化以及MDA水平。结果在正常培养的NSC34细胞内加入天麻素后,细胞的形态和活力均无明显影响(P0.05);在成功转染h SOD1~(WT)和h SOD1~(G93A)质粒的NSC34细胞内加入天麻素后,细胞活力明显增加(P0.05,P0.01),MDA水平下降(P0.01)。结论天麻素对正常培养的NSC34细胞无明显影响,但对转染h SOD1G93A质粒后的细胞,有明显促进细胞存活和降低MDA的作用。     

三七皂苷R1抑制JNK通路减轻H_2O_2诱导心肌细胞损伤的作用

目的观察三七皂苷R1(R1)对过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞损伤的保护作用及与JNK通路的关系。方法分离原代培养的乳鼠心肌细胞,加入H2O2构建心肌损伤模型,以不同质量浓度R1(25,50,100μmol·L-1)及JNK通路抑制剂SP600125作用心肌细胞,MTT法测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡;试剂盒测丙二醛(MDA)含量及过氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot测心肌细胞中p-JNK、Bax、Bcl-2蛋白相对表达。结果与对照组相比,H2O2能显著降低心肌细胞活力,增加心肌细胞凋亡率,增加心肌细胞内MDA含量,降低SOD活性,上调心肌细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并减少Bcl-2蛋白表达(P0.05);与模型组比,R1及SP600125均能显著提高心肌细胞活力,降低心肌细胞凋亡率,减少心肌细胞内MDA含量,提高SOD活性,降低心肌细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论R1可显著减轻H2O2诱导的心肌细胞损伤,其机制与抑制JNK通路的激活有关。     

基于MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1通路探讨三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型的影响

目的:通过研究三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶,SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路的影响,探讨三七总皂苷抑制肿瘤的可能机制。方法:建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型,将48只造模成功的小鼠随机分为三七总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg~(-1))和模型组,每组12只,三七总皂苷各剂量组腹腔注射剂量为10 mL·kg~(-1),模型组给予相同剂量的生理盐水,连续给药28 d。给药结束后分离肿瘤组织、称质量、切片、匀浆等,采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1蛋白表达。结果:与模型组比较,三七总皂苷中、高剂量组的肿瘤质量明显下降(P0.05);肿瘤细胞凋亡数量随三七总皂苷剂量的升高明显升高(P0.05);三七总皂苷中、高剂量组肿瘤组织中MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型具有抑制作用,其作用机制可能与激活MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1信号通路有关。     

慈菇消脂丸含药血清对非酒精性脂肪肝细胞模型Caspase-8、FasL、p-c-Jun表达的影响

目的探讨慈菇消脂丸含药血清对游离脂肪酸(FFA)混合物诱导的HepG2细胞非酒精性脂肪肝病模型凋亡相关蛋白Caspase-8、FasL、p-c-Jun表达的影响。方法以HepG2细胞为研究对象,实验随机分为正常组(10%胎牛血清),模型组(500μmol/L FFA),中药低、中、高剂量组(500μmol/L FFA+2%、4%、6%含药血清),阳性药组(500μmol/L FFA+20μmol/L SP600125)。实验时间为24 h,实验结束后,用油红O染色镜下观察细胞浆内变化。流式细胞术检测细胞凋亡率。实时荧光定量PCR和Western Blot法检测Caspase-8、FasL、pc-Jun mRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组细胞凋亡率增加(P<0.01),Caspase-8、FasL、p-c-Jun蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05);与模型组比较,各药物干预组及阳性药组细胞凋亡率均下降(P<0.05),除中药低剂量组对FasL蛋白表达及中药中剂量组对Fasl mRNA表达无影响外,其余各组Caspase-8、FasL、p-c-Jun mRNA及Caspase-8、p-c-Jun蛋白表达均下降(P<0.05)。结论慈菇消脂丸可以改善HepG2细胞脂肪变及凋亡,与下调Caspase-8、FasL、p-c-Jun表达相关。     

温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞凋亡及PI3K，Akt，GSK3β表达的影响

目的:探讨温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞的保护作用及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为5组,其中正常组20只,氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组给予20 mL·kg-1生理盐水灌胃,氯氮平组给予氯氮平原药20 mg·kg-1灌胃,温胆汤组分别给予剂量为40,20,10 g·kg-1的温胆汤灌胃,1次/d,8 d后处死大鼠,取血,离心取血清,灭活,过滤除菌,离心管分装备用。将星型胶质细胞分为空白组、模型组、氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,其中空白组、模型组给予空白血清培养,其余各组给予相应含药血清培养;除空白组外,其余各组用10 mmol·L-1谷氨酸处理24 h后予流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测星型胶质细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞凋亡率则显著下降(P0. 01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达显著降低(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA的表达显著降低(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。结论:温胆汤含药血清可有效升高PI3K,Akt,GSK3β表达,从而调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路,保护神经细胞。     

JNK通路对左归丸含药血清调控MC3T3 成骨细胞Runx2 mRNA表达的影响

目的:探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在左归丸含药血清调控成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖和成骨特异转录因子核心结合因子(Runx2) mRNA表达中的作用.方法:以MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,选用JNK特异抑制剂SP 600125,实验分为空白对照组、SP 600125组、左归丸组、左归丸加SP 600125组、倍美力组、倍美力加SP 600125组.孵育48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测SP600125对左归丸含药血清干预MC3T3-E1成骨前体细胞增殖作用的影响,采用Western blot法分析JNK蛋白磷酸化水平,采用Real Time RT-PCR法检测成骨细胞特异转录因子Runx2 mRNA表达情况.结果:与空白对照组比较,左归丸含药血清组显著促进细胞增殖,明显上调p-JNK蛋白和Runx2 mRNA表达(P＜0.01);SP600125显著抑制左归丸含药血清诱导的增殖和p-JNK蛋白表达(P＜0.01),对Runx2 mRNA表达的影响不显著.结论:JNK信号通路的激活可能参与了左归丸含药血清诱导的MC3T3-E1成骨前体细胞增殖,但左归丸含药血清诱导的Runx2mRNA高表达对JNK信号通路依赖不显著.     

麦冬皂苷D通过上调CYP2J2/EETs抗Ang Ⅱ诱导的内皮细胞凋亡

探讨麦冬皂苷D(OP-D)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导内皮细胞凋亡的影响及其机制,为中药的安全性及有效性提供参考依据。MTT法检测Ang Ⅱ对细胞存活率的影响;检测OP-D对Ang Ⅱ诱导的细胞总蛋白含量的影响;酶标仪测定OP-D对Ang Ⅱ诱导的细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率的影响;Western blot和RT-PCR法检测OP-D及外源性11,12-EET对Ang Ⅱ诱导的细胞中JNK及其下游靶分子c-Jun的磷酸化水平表达;流式法检测细胞凋亡率;最后进一步借助CYP450酶抑制剂PPOH及JNK特异性抑制剂SP600125,探究OP-D保护内皮细胞的可能内在机制。结果显示,不同剂量的Ang Ⅱ(1×10~(-8)~1×10~(-6)mol·L~(-1))对细胞存活率没有显著的影响,1×10~(-6)mol·L~(-1)的Ang Ⅱ处理24 h可诱导细胞总蛋白含量的增加(P0.05,P0.01),刺激LDH释放率的增多(P0.001),JNK和c-Jun的磷酸化水平明显增加(P0.01,P0.001),caspase-3的蛋白表达上调(P0.01),细胞凋亡率增高(P0.001)。提前给予SP600125显著抑制了JNK和c-Jun的磷酸化水平。OPD预处理后,能明显降低Ang Ⅱ诱导的细胞总蛋白含量(P0.01)及LDH的释放(P0.01,P0.01),减少JNK和c-Jun的磷酸化水平,降低caspase-3的表达及细胞凋亡率,提前给予PPOH后,OP-D保护效应被抑制。11,12-EET预处理降低JNK和c-Jun的磷酸化水平(P0.05)。结果表明Ang Ⅱ通过JNK/c-Jun途径诱导细胞凋亡;OP-D通过诱导CYP2 J2表达及增加11,12-EET含量抗Ang Ⅱ激活JNK/c-Jun通路所诱导的细胞损伤及凋亡。     

氧化苦参碱对高糖引起的H9C2细胞氧化应激损伤的影响

目的:研究氧化苦参碱对高糖诱导H9C2细胞氧化应激损伤的保护机制。方法:分组培养H9C2心肌细胞并分为空白组,高糖组,氧化苦参碱低、高剂量组(50,100 mg·L^-1),阳性药维生素E组(1×10^-4 mol·L^-1),甘露醇等渗组。通过乳酸脱氢酶外漏法检测细胞损伤,检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量变化,通过荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量和细胞线粒体功能的完整性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞内MDA,ROS含量,Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组比较,氧化苦参碱显著降低乳酸脱氢酶的外泄、显著抑制细胞内ROS的产生(P<0.01),明显降低MDA的含量和Bax蛋白的表达(P<0.05),增加SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白的表达(P<0.01)。结论:氧化苦参碱通过改善线粒体功能来调节氧化应激从而抑制由高糖引起的H9C2心肌细胞凋亡。     

Acupuncture for dystonia in brain-type Wilson's disease with internal retention of damp heat pattern: A randomized clinical trail针刺治疗湿热内蕴型肝豆状核变性脑型肌张力障碍-随机临床试验

ObjectiveTo observe the clinical efficacy of acupuncture on dystonia in brain-type Wilson's disease (WD) with internal retention of damp heat pattern.MethodsA total of 60 patients with WD dystonia with internal retention of damp heat pattern were randomized into acupuncture and medication groups using a random number table, with 30 participants in each group. All patients had a low-copper diet and consumed dimercaptopropanesulfonate sodium (DMPS) for copper excretion. In the acupuncture group, on the base of the same treatment as that given to the medication group, acupuncture was applied at B?ihuì (百会GV20), Shéntíng (神庭GV24), Chéngjiāng (承浆CV4), Jiānyú (肩髃LI5), Nàoshū (臑俞SI10), Wàiguān (外关TE5), Nèiguān (内关PC6), Sh?usānl? (手三里LI10), Hég? (合谷LI4), Yángxī (阳溪LI5), Huántiào (环跳GB30), Bìguān (髀关ST31), Yánglíngquán (阳陵泉GB34), Fēnglóng (丰隆ST40), Zúsānl? (足三里ST36), Sānyīnjiāo (三阴交SP6), Xuánzhōng (悬钟GB39), and Xíngjiān (行间LR2). Before and 24 days after treatment, the modified Ashworth scale (MAS) and Burke–Fahn–Marsden dystonia rating scale (BFMDRS) were used to evaluate dystonia symptoms.The allocation scheme was concealed for the outcome assessors.ResultsThe data of 30 cases were analyzed in each group.Before treatment, the MAS score difference between the acupuncture and medication groups was not statistically significant (P > 0.05). Compared with the score before treatment, the MAS score was lower significantly in both the acupuncture group (2.63 ± 0.76 vs 4.50 ± 0.78) and medication group (3.30 ± 0.65 vs 4.40 ± 0.77) after treatment (both P < 0.05). After treatment, the MAS score in the acupuncture group was significantly lower than that in the medication group (P < 0.01). Before treatment, the BFMDRS score was not significantly different between the two groups (P > 0.05). Compared with the score before treatment, the BFMDRS score was significantly lower in both the acupuncture (64.97 ± 14.26 vs 85.23 ± 16.99) and medication groups (11.33 ± 2.60 vs 75.40 ± 16.25) after treatment (both P < 0.05). The BFMDRS score of the acupuncture group was lower than that of the medication group after treatment (P < 0.05).During treatment, 1 case had allergic reaction of DMPS in the acupuncture group, manifested as reddish skin and skin rashes, and the allergic symptoms disappeared after anti-allergic treatment. There was no any adverse reaction in the medication group.ConclusionCombined treatment with acupuncture and Western medication is significantly effective against dystonia in brain-type WD with internal retention of damp heat pattern.     

六味地黄汤和桂附地黄汤对小剂量氢化可的松减停给药后致小鼠药源性虚证的调节作用

目的:研究补肾复方对小剂量氢化可的松减停给药诱发的小鼠证候及肾上腺皮质功能的影响。方法:48只雄性ICR小鼠随机分为正常组、氢化可的松组、六味地黄汤组、桂附地黄汤组,每组12只。每组给予1.32 mg·kg^-1·d^-1氢化可的松28 d减半剂量7 d停止用药14 d造模,减量及停药阶段同步给予相应组六味地黄汤药液12.5 g·kg^-1·d^-1,桂附地黄汤药液13.5 g·kg^-1·d^-1,连续21 d。实验第28,49天采用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠表征信息(抓力、体表红外温度);在实验第50天处死小鼠取材,摘取脾脏、胸腺,计算脾脏与胸腺脏器指数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清皮质酮含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾上腺类固醇合成急性调节蛋白(Star),胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1),细胞色素P450家族21亚家族A多肽1(Cyp21a1),细胞色素P450家族11亚家族b多肽1(Cyp11b1),低密度脂蛋白受体(Ldlr),B类I型清道夫受体(Scarb1/SRBI),3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(Hmgcr),酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶-1(Acat1),激素敏感性脂肪酶(HSL/LIPE),胰岛素诱导基因1(Insig1),固醇调节元件结合转录因子2(Srebf2)mRAN表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测低密度脂蛋白受体(LDLR),B类I型清道夫受体(Scarb1/SRBI),胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1),胆固醇21-羟化酶(CYP21A2)蛋白表达。结果:与正常组比较,连续给药28 d后,模型组小鼠体质量与躯体平均红外温度均显著下降(P<0.01);减停造模后,模型组小鼠抓力明显下降(P<0.05),胸腺指数显著升高(P<0.01),血清皮质酮含量明显降低(P<0.05),肾上腺Cyp21a1,Hmgcr mRNA表达明显下降(P<0.05,P<0.01),Lipe,Acat1 mRNA表达显著上升(P<0.01),肾上腺CYP11A1,SRBI蛋白表达显著下降,LDLR蛋白表达上升。与模型组比较,中药治疗21 d后,桂附地黄汤组小鼠体质量显著下降(P<0.01);六味地黄汤组小鼠脾脏指数显著下降(P<0.01);桂附地黄汤组Cyp11a1,Cyp21a1,Acat1,Lipe mRNA表达明显上升(P<0.05,P<0.01),Ldlr,Scarb1 mRNA表达明显下降(P<0.05),六味地黄汤组Ldlr,Acat1,Lipe mRNA表达明显下降(P<0.05,P<0.01);六味地黄汤及桂附地黄汤组CYP11A1,SRBI蛋白表达上升。结论:桂附地黄汤可通过纠正肾上腺皮质激素合成酶的表达,以促进药源性虚证小鼠肾上腺皮质功能恢复。     

苦豆子总碱对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦平滑肌作用机制的影响

目的:观察苦豆子总碱(total alkali Sophora alopecuroids,TASa)对糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis,DGP)大鼠胃窦平滑肌活动的影响。方法:1腹腔注射链脲佐菌素建造糖尿病大鼠模型;2测定糖尿病大鼠胃内色素残留率和小肠传输速率以证实DGP模型的建立;3用恒温灌流浴槽,将标本分为正常组(NS)和DGP模型组,模型组分:TASa,TASa+异搏定(1×10-7mg·L-1),TASa+酚妥拉明(1×10-6mg·L-1),TASa+苯海拉明(1×10-6mg·L-1),TASa+消炎痛(1×10-6mg·L-1)和TASa+阿托品(1×10-6mg·L-1)6组,以探讨TASa对DGP大鼠胃窦平滑肌的作用及机制。结果:TASa能增强DGP大鼠胃窦平滑肌收缩波的振幅、持续时间和收缩面积(P0.01),但对频率无显著影响;异搏定能明显抑制TASa收缩平滑肌的作用,而阿托品、酚妥拉明、苯海拉明和消炎痛无影响。结论:TASa可能是激活Ca2+通道而加强DGP大鼠胃窦平滑肌的收缩作用。     

江西建昌帮阴附片和阳附片对阳虚小鼠棕色脂肪组织的影响

目的:观察棕色脂肪组织(BAT),细胞,蛋白以及相应基因在大黄混悬液所致阳虚模型小鼠中的表达情况,探讨建昌帮特色附子炮制品的产热机制。方法:随机选取20只小鼠,雌雄各半,作为正常雌、雄组,其余80只小鼠灌服大黄混悬液(质量浓度0. 25 g·mL~(-1))建立阳虚模型,造模结束后随机分为模型雌、雄组,生附片雌、雄组,阴附片雌、雄组以及阳附片雌、雄组,每组10只。按照小鼠组别给予相应药液,灌胃2周(1. 54 g·kg~(-1)·d~(-1)),正常组和模型组给予等体积蒸馏水。灌胃结束后,采集小鼠肩胛处BAT,进行苏木素-伊红(HE)染色观察BAT细胞变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测解偶联蛋白1(UCP1)及其mRNA的表达。结果:与同性别正常组比较,模型组的BAT比重显著降低(P0. 01);雌性小鼠中生附片组和阴附片组的BAT比重较模型组显著增加(P0. 01),而雄性小鼠各给药组与模型组相比则无显著性差异。与同性别正常组比较,模型组小鼠BAT的细胞有许多散在分布的空泡,由于空泡较大,可观察到的细胞较少;与同性别模型组比较,生附片组小鼠BAT细胞可见细胞空泡减少,细胞较小并且排列紧密,阳附片组中BAT细胞的密度也明显增加,阴附片组BAT细胞中空泡相对减少,但细胞无显著增加。同性别小鼠之间比较,模型组与正常组的UCP1表达水平相比具有统计学意义(P0. 05,P0. 01);在雌性小鼠中,阳附片组较模型组的UCP1表达水平显著升高(P0. 05),雄性小鼠的各给药组较同性别模型组均有显著差异(P0. 05),其中阳附片的显著性最优。模型组较同性别正常组的UCP1 mRNA相对表达量显著下降(P0. 05,P0. 01);在雌性小鼠中,与模型组比较,阳附片组、生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量显著升高(P0. 05,P0. 01),与阳附片组比较,生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量有显著性差异(P0. 05);在雄性小鼠中,与模型组比较,阳附片组的UCP1 mRNA相对表达量显著升高(P0. 01),生附片组、阴附片组则无显著性差异,生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量与阳附片组比较有显著性差异(P0. 05)。结论:生附片、阴附片和阳附片对大黄所致的阳虚证均有明显改善作用,机制可能为促进UCP1蛋白及其mRNA的表达、增强BAT的活性,且阳附片效果最好。     

加味黄芪桂枝五物汤联合醒脑开窍针刺法治疗脑卒中后肩手综合征的临床观察

目的:观察加味黄芪桂枝五物汤联合醒脑开窍针刺法治疗脑卒中后肩手综合征(SHS)的临床疗效及对神经源性炎症介质和血液流变学指标的影响。方法:将148例患者随机按数字表法分为对照组和观察组各74例。两组口服双氯芬酸钠缓释片,75 min/次,1次/d,连续2～4周;肿胀明显,口服醋酸泼尼松片,10 min/次,1次/d,连续1～2周。并采用醒脑开窍针刺法,1次/d,6次/周;对照组口服脑心通胶囊,4粒/次,3次/d,观察组内服加味黄芪桂枝五物汤,1剂/d。两组疗程均为连续治疗4周。进行对治疗前后肩手综合征评估量表(SHSS)评分,记录疼痛、肿胀消失时间;进行治疗前后Fugl-Meyer功能量表上肢部分评分(U-FMA),日常生活活动能力(ADL)评分和气虚血瘀证评分;检测治疗前后降钙素基因相关肽(CGRP),P物质(SP),缓激肽(BK)水平和血液流变学指标。结果:观察组患者的临床疗效优于对照组(Z=2. 106,P0. 05);观察组SHSS量表的感觉、自主神经、运动3个维度评分和SHSS总分均低于对照组(P0. 01);观察组疼痛、肿胀消失时间均短于对照组(P0. 01);观察组患者U-FMA,ADL评分均高于对照组(P0. 01),气虚血瘀证评分低于对照组(P0. 01);观察组CGRP水平高于对照组(P0. 01),SP和BK水平均低于对照组(P0. 01);观察组的全血黏度(高切、低切)、血浆黏度、纤维蛋白原和血小板聚集率等均低于对照组(P0. 05)。结论:在西医常规治疗的基础上,内服加味黄芪桂枝五物汤配合醒脑开窍针刺疗法可减轻SHS严重程度和中医临床证候,缩短病程,改善上肢运动功能,并可抑制神经源性炎症反应,改善血液流性,提高患者的日常生活活动能力和临床疗效。     

安寐丹调控OXA/CREB/PER1信号通路改善SD模型大鼠昼夜节律紊乱＊

目的 观察中医经典名方安寐丹对睡眠剥夺（Sleep disruption，SD）模型大鼠食欲素（Orexin）及其介导的食欲素A（Orexin A，OXA）/cAMP反应元件结合蛋白（cAMP Response Element Binding Protein，CREB）/Period1（period circadian regulator 1， PER1）基因信号通路的作用。方法 40只雄性6月龄SD大鼠随机等分为空白组、模型组、艾司唑仑组、安寐丹组，空白组常规进食进水，其他三组采用对氯苯丙氨酸（PCPA）腹腔注射叠加多平台水环境剥夺法构建SD模型，自主活动仪监测昼夜活动节律。空白组、模型组给予等容的0.9%氯化钠灌胃，艾司唑仑组给予艾司唑仑0.09 mg·kg^-1、安寐丹组给予安寐丹水煎剂9.09 mg·kg^-1灌胃治疗，连续4周。4周后运用Morris水迷宫检测其学习记忆，免疫荧光检测下丘脑Orexin神经元表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠下丘脑组织OXA、食欲素B（Orexin B，OXB）含量，蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）和实时荧光定量（Quantitative Real-time PCR，RT-PCR）检测各组大鼠下丘脑组织OXA/CREB/PER1信号通路蛋白和mRNA表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠24 h自主活动时间和活动距离均高于空白组；活动时间、活动距离显著增加（P<0.01），上平台潜伏期与游泳总路程显著延长（P<0.01），穿越站台次数和站台活动时间均减少（P<0.01）；下丘脑组织OXA、OXB含量高于空白组（P<0.01）；且OXA、CREB 蛋白和mRNA表达均显著升高（P<0.01），PER1 蛋白和mRNA表达均显著下调（P<0.01）。与模型组比较，安寐丹组大鼠上平台潜伏期缩短（P<0.01）、游泳总路程减少（P<0.05）、穿越平台数量增加（P<0.05）；下丘脑组织OXA、OXB含量降低（P<0.05），OXA蛋白表达下调（P<0.05）、CREB蛋白表达下调（P<0.01）、PER1蛋白表达上调（P<0.01），OXA和CREB mRNA表达降低（P<0.05），PER1 mRNA表达升高（P<0.05）。结论 安寐丹改善SD模型大鼠昼夜节律紊乱可能与调节Orexin及其介导的OXA/CREB/PER1信号通路相关。     

胶艾汤对血虚模型大鼠补血作用的有效部位筛选

目的比较胶艾汤不同溶剂提取部位对血虚模型大鼠外周血象、免疫器官指数、白细胞介素2(IL-2)和促红细胞生成素(EPO)水平以及红细胞膜能量代谢酶活性的影响,筛选胶艾汤补血作用的有效部位。方法采取每天于眼底静脉丛放血5 mL/kg,连续放血12d的方法,复制大鼠血虚模型;造模同时各组动物分別ig给予胶艾汤及其正丁醉、石油醚、醋酸乙酯、水部位浸膏(剂量均为生药量12g/kg),以复方阿胶浆为阳性对照。造模第12天检测各组大鼠外周血红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板计数(PLT),计算脾脏和胸腺器官指数。检测血清中IL-2和EPO水平,检测全血红细胞膜能量代谢酶Na~+,K~+-ATP及Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶活性,UPLC法初步分析胶艾汤不同提取部位的化学成分差异。结果与对照组比较,模型组大鼠RBC、HGB、HCT、PLT、胸腺指数以及IL-2水平明显降低,Na~+,K~+-ATP酶和Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶活性明显减弱,脾脏指数及EPO水平明显升高,表明血虚模型复制成功。与模型组比较,胶艾汤正丁醇组可明显升高HCT、RBC、HGB、PLT(P0.05、0.01);降低脾脏指数及EPO水平(P0.05、0.01);明显升高胸腺指数、IL-2水平(P0.01),升高红细胞膜Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶及Na~+,K~+-ATP酶活性(P0.05、0.01)。石油醚组可明显升高PLT及IL-2水平(P0.01),降低EPO水平及脾脏指数(P0.05、0.01)。醋酸乙酯组可明显降低脾脏指数及EPO水平(P0.01),升高红细胞膜Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶活性(P0.05)。水部位组可明显升高PLT(P0.05),降低EPO水平(P0.01)。胶艾汤正丁醇提取部位中检测到其他提取部位不含有的咖啡酸、苯甲酰芍药苷、甘草酸铵,且正丁醇提取部位中没食子酸、原儿茶酸、磷酸川芎嗪、绿原酸的量均高于胶艾汤醋酸乙酯和水提取部位。结论正丁醇部位是胶艾汤补血作用的最强有效部位。     

维胃方对胃溃疡大鼠胃黏膜MPO、H~+-K~+-ATP酶活性的影响

[目的]观察维胃方对胃溃疡大鼠胃黏膜髓过氧化物酶(MPO)和H+-K+-ATP酶的影响,探讨维胃方治疗胃黏膜损伤的可能机制。[方法]采用乙酸烧灼法,建立胃溃疡模型,用比色法测定胃黏膜MPO和H+-K+-ATP酶活性,并观察胃黏膜组织病理学变化。[结果]从胃黏膜大体标本、切片观察,维胃方中剂量组疗效最佳。与自愈组和模型组比较,维胃方各组胃黏膜MPO活性显著降低(P0.01或P0.05),其中以维胃方中剂量组值最小。维胃方各剂量组的H+-K+-ATP酶活性均高于自愈组(P0.01或P0.05),接近正常组(P0.05),表明维胃方能恢复其活性。[结论]维胃方对大鼠实验性胃溃疡具有明显的保护作用,其机制可能是通过降低大鼠胃黏膜MPO活性,进而减轻炎症介质对胃黏膜的损伤。同时其能修复已损伤的胃黏膜,故能恢复H+-K+-ATP酶活性。     

Effect of acupotomy on chondrocyte proliferation and expression of CyclinD1, CDK4 and CDK6 in rabbits with knee osteoarthritis

ObjectiveThe aim of this study was to investigate the mechanism of acupotomology (Apo) in the prevention of articular cartilage destruction via the promotion of chondrocyte proliferation and chondrocyte expression of cell cycle regulators, CyclinD1, CDK4 and CDK6 in a rabbit knee osteoarthritis (KOA) model.MethodsTwenty-eight rabbits were randomly divided into a control group, an OA (osteoarthritis) model group, an Apo (acupotomology) group and EA (electro-acupuncture) group (n = 7). Improved Videman's method was used to induce a rabbit model of KOA over 6 weeks. One week later, acupotomy and electro-acupuncture therapy was applied to animals in the respective groups and treatment lasted 4 weeks. Following these treatments, quantitative real-time PCR, immunohistochemical staining and western blotting were performed to assess the mRNA and protein levels of cell cycle regulators CyclinD1 (Cell cycle protein D1), CDK4 (Cyclin-dependent kinase 4) and CDK6 (Cyclin-dependent kinase 6). Ethology measures and knee morphology were also compared among groups.ResultsThe Lequesne MG index score of morphology was increased (P < .01), and the passive range of motion (PROM) and the mRNA and protein levels of CyclinD1, CDK4, and CDK6 were significantly decreased (P < .01) in the OA model compared with the control group. The Lequesne MG index score and the morphology score were decreased in the Apo and EA group compared with the OA model group (P < .05 or P < .01), while the mRNA levels of CyclinD1, CDK4, and CDK6, and the protein levels of CDK4 were increased in the Apo and EA groups compared with the OA model group (P < .05 or P < .01). The PROM, and the protein levels of CyclinD1 and CDK6 were increased (P < .05) in the Apo group compared with the OA model group, while the PROM and the protein levels of CyclinD1 and CDK6 in the EA group were not significantly different (P > .05). Compared with the EA group, the morphology score was decreased in Apo group (P < .05).ConclusionsThe mRNA levels of CyclinD1 and CDK4, and the protein level of CDK4 in chondrocytes are regulate by both Apo and EA. Apo is more effective than EA in regulating the protein levels of CyclinD1 and CDK6. According to the observed changes in morphology and cytokine levels, acupotomy can promote chondrocyte proliferation and can alleviate the destruction of articular cartilage in a model of KOA.