相变高分子微球增效高强度聚焦超声消融裸鼠骨肉瘤

目的制备相变高分子微球,观察其增效高强度聚焦超声(HIFU)消融裸鼠骨肉瘤模型的效果。方法制备包裹液态氟碳的高分子微球,检测其形态、结构、粒径电位及相变条件;建立裸鼠骨肉瘤模型,随机分为空白组(不予处理)、对照组(注射生理盐水)和实验组1、2、3(注射稀释倍数分别为5、10、20倍的Pct-MP溶液),处理后立即用海级星对肿瘤进行辐照。于辐照后即刻和72h提取标本并观察坏死面积、行HE染色,并对72h提取的标本的坏死周边组织进行细胞增殖和凋亡测定。结果成功制备相变高分子微球;HIFU辐照后即刻提取的标本,实验组1、2的坏死面积与对照组差异均有统计学意义(P均0.05),但与实验组3的差异无统计学意义(P0.05);72h后提取的标本,实验组1、2的坏死面积进一步扩大、与辐照后即刻提取的标本的差异有统计学意义(P均0.05)。HIFU辐照72h后,实验组1、2、3与对照组间坏死周边组织的凋亡和增殖指数差异均有统计学意义(P均0.05)。结论在骨肉瘤裸鼠模型中,自制相变高分子微球能够增强HIFU对于骨肉瘤的消融效果,增强作用与微球浓度有关。     

儿童股骨远端骨肉瘤保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术

 目的 介绍儿童股骨远端骨肉瘤保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术,并探讨其工作原理、手术操作技巧、早期临床疗效以及并发症的防治。方法 2012年8月至2013年7月期间,应用肿瘤瘤段骨切除、保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术治疗股骨远端骨肉瘤的儿童患者3例,均为男性,年龄8岁、9岁和15岁。术前给予新辅助化疗1~2周期,化疗结束后根据X线、CT 和MR等检查结果评价化疗疗效,对于化疗效果好且符合保留骨骺手术条件者采用此术式治疗。首先通过CT、MRI确定病变范围,根据影像学检查结果利用计算机辅助定制保留骨骺的肿瘤型假体以及模具,待假体定制完毕后行肿瘤瘤段骨切除、保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术,术后指导患者进行功能锻炼,切口愈合1周后给予术后的规范化化疗,并进行长期随访。 结果 3例患者手术时间分别为3 h、4 h和6 h,术中出血量分别为300 ml、500 ml和2 200 ml。对3例患者术后随访时间 为12~24个月,根据美国骨肿瘤学会评分系统（Musculoskeletal Tumor Society,MSTS）,术后3个月功能评分分别为24分、26分和13分,短期随访显示患者肢体功能良好。1例患者出现假体感染,经保守治疗（抗炎补液、切口换药等）无效后行大腿截肢术,余2例患者未出现假体松动等其他并发症。2例患者双下肢长度相差均< 2 cm。结论 通过严格掌握保留骨骺保肢手术的适应证,配合术前及术后的新辅助化疗,保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术为儿童股骨远端骨肉瘤的保肢治疗提供了新的选择方案,其疗效安全、可靠,且具有手术操作简单、手术时间短、术后恢复快等优点,但长期疗效尚需进一步观察。     

Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响

 目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白（heat shock protein, HSP）70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70。重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆。荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Ezrin和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶肿瘤细胞的杀伤作用。结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体。较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01%±0.22%上升至24.28%±0.50%,增殖速度则自395.14%±2.24%减少至310.00%±2.83%。另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。而Ezrin-shRNA/HSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果。MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT+IL-2+HSP70组的杀伤活性高于CT+IL-2组,最高达56.33%±1.95%。结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用。     

双氢青蒿素对人骨肉瘤细胞TE85细胞内尿激酶型纤溶酶原激活物和色素上皮衍生因子表达的影响

目的 观察双氢青蒿素(DHA)对人骨肉瘤细胞活性、转移能力以及细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法 将不同浓度的DHA(5、10、20、40、80 μmol/L)作用于体外培养的正常人成骨细胞和人骨肉瘤细胞TE85 12、24、48 h后,噻唑蓝(MTT)法测定DHA对细胞活性的影响,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞中uPA和PEDF mRNA水平的表达,Westen blot法检测uPA和PEDF蛋白水平的表达.结果 DHA对人成骨细胞活性无明显影响(P＞0.05).DHA能够明显抑制人骨肉瘤细胞TE85的活性(P＜0.05).不同作用时间下DHA对人骨肉瘤细胞TE85的半数抑制浓度(IC50)分别为(12 h)=(41.66±0.53) μmol/L、IC50(24 h)=(32.28 ±0.27)μmol/L和IC50 (48 h)=(22.53±1.26) μmol/L.DHA能够明显减少人骨肉瘤细胞的迁移和细胞中uPA的表达水平,同时细胞中PEDF表达升高(P＜0.05).结论 DHA对正常人体骨组织无害,能够有效抑制骨肉瘤细胞生长和转移.     

太赫兹波对MG-63荷瘤小鼠快速活体成像的实验研究

摘要 [目的]实验研究太赫兹波对人成骨肉瘤细胞株MG-63荷瘤小鼠活体体内恶性肿瘤组织能否显像及其特异性,并探讨太赫兹波技术在骨肉瘤肿瘤组织切除术中的指导作用。[方法]利用华中科技大学光电国家重点实验室连续太赫兹成像系统,进行人成骨肉瘤细胞株MG-63荷瘤小鼠活体的THz波显像,并在活体成像指导下进行瘤体切除术（实验组）与肉眼下行瘤体切除术（对照组）再次检测进行对比,术中取出组织送病理切片;将术后人成骨肉瘤MG-63荷瘤小鼠继续饲养一周后再次行THz波显像。[结果]活体人成骨肉瘤MG-63荷瘤小鼠体内瘤体组织处出现强烈吸收信号,与周围组织差异明显;术后THz波显像及病理切片均显示太赫兹波指导下行瘤体切除术比肉眼下行瘤体切除术更为彻底;继续饲养一周后对照组荷瘤小鼠原位再次复发。[结论]太赫兹波技术能对人成骨肉瘤细胞株MG-63荷瘤小鼠中肿瘤组织特异性显像,且能良好指导手术切除恶性肿瘤组织,有望在临床中应用。     

Autophagy and bone diseases

Autophagy is a ubiquitous cellular process, allowing the removal and recycling of damaged proteins and organelles. At the basal level, this process plays a role in quality control, thus participating in cellular homeostasis. Autophagy can also be induced by various stresses, such as nutrient deprivation or hypoxia, to allow the cell to survive until conditions improve. In recent years, the role of this process has been widely studied in many pathologies such as neurodegenerative diseases or cancers. In bone tissue, various studies have shown that autophagy is involved in the survival, differentiation and activity of osteoblasts, osteocytes and osteoclasts. The evolution of this knowledge has led to the identification of new molecular pathophysiological mechanisms in bone pathologies. This review reports the current state of knowledge on the role of autophagy in 4 bone diseases: osteoporosis, which seems to be associated with a decrease in autophagy, osteopetrosis and Paget's disease where the course of the autophagic process is disturbed, and finally osteosarcoma where autophagy seems to play a protumoral role. A better understanding of the involvement of autophagy in these pathologies should eventually lead to the identification of new potential therapeutic targets.     

长链非编码RNA TUG1在骨肉瘤中的发生机制—系统回顾和荟萃分析

目的本研究旨在系统回顾长链非编码RNA TUG1（lncRNA TUG1）在骨肉瘤发生、发展中的机制,以及探讨TUG1在评估骨肉瘤患者预后中的价值。 方法系统检索PubMed、Embase、Web of Science、CochraneLibrary、中国知网（CNKI）和万方医学数据库,收集TUG1与骨肉瘤发生及预后的相关文献。系统回顾TUG1在骨肉瘤发生、发展中的机制,并采用Stata12软件（Stata公司,美国）对TUG1与骨肉瘤患者预后的相关性进行meta分析。 结果目前的研究表明,TUG1主要通过发挥竞争性内源RNA（competing endogenous RNA）效应调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡和侵袭等过程,涉及通路包括AKT信号通路和Wnt/β-catenin信号通路。本研究共纳入4篇文献进行meta分析,共244例骨肉瘤患者。TUG1表达升高的骨肉瘤患者总体生存率低于TUG1表达降低的骨肉瘤患者（OR=1.921,95% CI：1.361,2.712,P=0.000）。不仅如此,骨肉瘤患者组织中TUG1表达升高往往提示肿瘤具有更大的体积（OR=4.084,95% CI：2.313,7.211,P=0.000）、较高的临床分级（OR=0.247,95% CI：0.133,0.539,P=0.000）和更早期远处转移（OR=1.943,95% CI：1.130,3.339,P=0.016）。然而,其与患者性别（OR=1.055,95% CI：0.620,1.793,P=0.844）和肿瘤发生部位（OR=0.806,95% CI：0.424,1.530,P=0.509）无显著相关性。 结论长链非编码RNATUG1与骨肉瘤发生、发展密切相关。不仅如此,TUG1表达升高提示骨肉瘤患者不良临床预后,其可能是一种评估骨肉瘤患者预后的生物学标志物。     

miR-155在骨肉瘤发生发展及肺转移进程中的作用及机制

目的 初步探究miR-155在骨肉瘤发生发展及其肺转移进程中的作用,并探讨其靶蛋白及相关机制。方法 通过数据库分析,结合临床组织与细胞样本的相关检测,对骨肉瘤及其肺转移进程中miR-155差异性进行对比分析;应用iTRAQ定量蛋白质组学技术,筛选骨肉瘤及其肺转移进程中miR-155的靶蛋白;在临床组织与细胞样本中,对筛选的miR-155靶蛋白进行验证。结果 miR-155在骨肉瘤组织和肺转移瘤组织中,较对照组均出现明显升高;与人正常成骨细胞相比,人骨肉瘤细胞系miR-155亦出现明显升高。利用iTRAQ实验得到3 714个蛋白,筛选出差异表达蛋白253个,其中上调144个,下调109个。经预测分析和实验验证C/EBP β是miR-155潜在的作用靶蛋白。结论 miR-155在骨肉瘤及其肺转移进程中出现显著升高,C/EBP β是其潜在的作用靶点。     

骨肉瘤软组织肿块骨化程度与患者临床病理特征的相关性

目的 探讨骨肉瘤软组织肿块骨化程度与患者临床病理特征的相关性。方法 回顾性分析有软组织肿块的普通型骨肉瘤患者临床资料,包括Enneking分期、化疗敏感度、总生存期和转移出现后的生存时间。影像学评估软组织肿块内成骨情况,病理形态学上评估骨样基质占比。结果 本研究共纳入符合要求的189例患者。Enneking ⅢB期患者中无成骨型、部分成骨型、成骨型分别占30.2%、9.6%和6.3%,无成骨型的骨肉瘤有更高的初诊转移率（P<0.05）;无成骨型、部分成骨型、成骨型的化疗有效率分别为60.5%、59.6%和31.3%,成骨型的普通型骨肉瘤化疗敏感度更差（P<0.05）;无成骨型的骨肉瘤总生存期短于部分成骨型或成骨型骨肉瘤（P<0.05）;成骨型骨肉瘤转移后的生存时间长于无成骨型骨肉瘤（P=0.078）。结论 在普通型骨肉瘤中,软组织肿块内的骨化程度与肿瘤的外科分期、化疗敏感度和预后相关,对患者化疗与手术时机的个体化选择可能有指导价值。     

MMP-9在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的研究骨肉瘤组织中基质金属蛋白酶-9(mmp-9)的表达情况,分析其与骨肉瘤肺转移的关系。方法应用免疫组织化学方法检测42例骨肉瘤组织中基质金属蛋白酶-9(mmp-9)的表达。结果非转移组5例阳性、转移组16例阳性、卡方值为9.54,P<0.05。组间有显著差异。结论mmp-9可以作为骨肉瘤发生肺转移的标志物。