活体小动物Micro-CT动态评价大鼠股骨牵张成骨

[目的]利用活体小动物Micro-CT可连续观察大鼠股骨牵张成骨(distraction osteogenesis,DO)的优点,观察DO的不同时期骨愈合的模式,为寻找加速DO的愈合速度和带架方法提供指导。[方法]通过应用自行研制的大鼠股骨DO外固定架系统,对12只大鼠制备股骨DO模型,术后截骨端加压固定7d(静息期),第8d开始按0.25mm/12h的速度牵引延长共14d,延长7mm(延长期)。术后第21d延长结束后,用可透X线的高分子夹板材料替换金属外固定架,再固定35d(巩固期)。术后第28、42d分别处死2只大鼠用于组织学检查,其余8只大鼠分别于术后第21、28、42、56d麻醉后行X线及活体Micro-CT检查,并于术后56d取材,对其中5只行生物力学测试,余3只用于组织学检查。[结果]在DO静息期及延长期,延长区无明显新骨形成,延长区内主要为由纤维样组织组成的假性生长板结构。在巩固期前期(21d以内)主要为骨量的增加,表现为骨矿含量增加,骨小梁数量增多;巩固期21d以后,骨量仍持续增加,同时骨的质量也开始明显提高,表现为骨小梁增厚,已矿化组织矿化度提高。在术后56d(延长结束后5周)后,延长区内仍处于成骨和骨结构的改建中,假性生长板基本消失,未骨化的软骨组织依然存在。术后56d,DO侧股骨的最大扭矩及失效能量均小于健侧股骨。[结论]①在大鼠股骨DO延长结束后应用可透X线的高分子夹板固定牵引针可以获得稳定的固定;②改进大鼠股骨DO模型的固定方式后,Micro-CT可用于活体动态观察及评价其新骨形成;③长骨牵张成骨中骨量的增加自延长结束后开始,持续5周以上,骨质量的改建在延长结束后2～3周才开始,二者的发生具有时相性,提示相应的干预手段应在不同的时期进行;④对DO的全面观察应长于术后56d或延长结束后5周。     

软骨素酶ABC处理化学去细胞异体神经后的形态学观察

[目的]观察软骨素酶ABC处理化学去细胞异体神经后,硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)去除效果以及对活性成分层粘蛋白(Laminin)的影响.[方法]取12根新鲜猪坐骨神经,每段长60 mm,应用7%脱氧胆酸钠与7%Triton X-100制备化学去细胞异体神经后,随机分为两组.实验组(n=6):软骨素酶ABC处理组,将6根去细胞异体神经浸泡在包软骨素酶ABC(2 U/ml)的PBS(pH 7.4);对照组(n=6)为PBS液浸泡.两组处理时间均为16 h 37℃水浴.分别对两组神经行HE染色以及CSPG、Laminin免疫荧光染色观察.[结果]实验组与对照组HE纵切片均未能观察到细胞,红染的神经基底膜呈波浪状纵形排列,轴突消失而形成管柱状空隙;对照中CSPG免疫荧光染色阳性,经软骨素酶ABC处理后CSPG免疫荧光染色阴性;而实验组和对照组基底膜管成分层粘蛋白免疫荧光染色显示为阳性.[结论]经软骨素酶ABC处理的去细胞异体神经特异性降解了不利于神经生长的成分CSPG,而对去细胞神经中促神经生长成分Laminin无影响,可能是修复周围神经缺损的良好的移植物.     

关节软骨源性多孔支架复合自体软骨细胞修复兔关节软骨缺损的长期疗效观察

[目的]对关节软骨源性多孔支架复合自体软骨细胞复合体修复兔膝关节软骨缺损的长期效果进行观察和评价。[方法]实验动物新西兰大白兔共10只,分两组:(1)关节软骨源性支架对照组:缺损内置入关节软骨源性支架;(2)关节软骨源性支架复合细胞组:缺损内置入关节软骨源性支架-自体软骨细胞复合体。手术后15个月取材做大体摄像,甲醛固定、10%EDTA脱钙,石蜡切片,采用四种组织化学染色法(HE、奥新兰(AB)、甲苯胺兰(TO)、藩红花"O"染色)和Ⅱ型胶原免疫组化染色,观察修复后的兔关节软骨组织细胞形态特征。[结果]关节软骨源性支架对照组,大体观察关节表面有凹陷。石蜡切片HE染色见未修复缺损处为梭形细胞,纤维软骨,缺损处AB、甲苯胺兰、藩红花"O"染色为阴性,Ⅱ型胶原染色为阳性;关节软骨源性支架复合细胞组,大体见关节软骨表面修复平整、光滑。常规HE染色镜下见软骨全层修复良好,为透明软骨细胞,可见软骨陷窝潮线排列结构。细胞外基质特染:AB、甲苯胺兰、藩红花"O",Ⅱ型胶原特种染色均为阳性。[结论]组织学观察结果发现,关节软骨源性支架组为纤维软骨组织结构,未能完全修复膝关节软骨缺损;而关节软骨源性支架复合细胞组关节软骨缺损修复良好,未见退变,具有软骨组织的特征。     

腹腔镜下广泛全子宫切除加盆腔淋巴结清扫治疗子宫恶性肿瘤11例临床研究

目的:探讨腹腔镜广泛全子宫切除和盆腹腔淋巴结切除术治疗子宫恶性肿瘤的可行性及临床价值。方法:回顾分析我院行腹腔镜子宫广泛切除和盆腔淋巴结切除术治疗11例经活检证实的早期子宫恶性肿瘤患者的临床资料,其中子宫颈癌8例,子宫内膜癌3例,总结其手术时间、术中出血量、淋巴结切除数、手术并发症及近期预后情况。结果:11例均用腹腔镜完成手术,手术时间平均(298.2±40.5)min,术中平均出血(255.5±158.5)ml,平均淋巴结切除(12.3±3.0)枚,术中无脏器损伤,11例术后随访1～13个月,无死亡及复发病例。结论:腹腔镜广泛全子宫切除和盆腔淋巴结切除术治疗子宫恶性肿瘤安全、可行,有临床应用价值。     

腺病毒介导的NELL1基因对小鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的探讨重组腺病毒(Ad-GFP-NELL1)介导的NELL1因子对小鼠成骨细胞(MC3T3E1)增殖、分化及OCN(骨钙素)和OPN(骨桥蛋白)基因表达的影响。方法免疫荧光染色鉴定重组腺病毒(Ad-GFP-NELL1)转染细胞后绿色荧光蛋白(GFP)及NELL1的表达;不同转染滴度Ad-GFP-NELL1转染MC3T3E1细胞,荧光显微镜下观察转染效果;将MC3T3E1细胞分为对照组,NELL1组(Ad-GFP-NELL1转染)和GFP组(Ad-GFP转染),利用CCK-8试剂盒检测并绘制生长曲线;观察和计量茜素红染色后钙结节数目;定量PCR检测成骨相关基因OCN,OPN表达的改变。结果免疫荧光显示Ad-GFP-NELL1转染大鼠骨髓基质干细胞72h后能同时表达NELL1和GFP;在最佳转染滴度200pfu/cell转染条件下,Ad-GFP-NELL1及Ad-GFP对MC3T3E1细胞增殖没有明显影响(P>0.05)。NELL1组细胞钙结节数目(7±2)比空白对照组(2±1)及Ad-GFP组(2±1)明显增多(P<0.05),OCN(3.7倍),OPN(5.1倍)的表达也明显上升。结论 Ad-GFP-NELL1转染MC3T3E1细胞后能有效促进细胞的成骨分化作用,且对其增殖无明显毒性作用。     

中期妊娠引产致宫颈阴道瘘23例临床分析

女性生殖道瘘多由产伤引起,宫颈阴道瘘几乎均发生于引产或生产后,其中大部分为中孕引产所致,可导致较严重的后果。严密观察产程和积极有效处理可预防其发生。本文通过对宫颈阴道瘘23例进行回顾性分析,探讨宫颈阴道瘘发生的原因及其防治。     

MYC-IGH易位是免疫母细胞型弥漫性大 B细胞淋巴瘤的主要致病特征

免疫母细胞亚型弥漫性大B细胞淋巴瘤( IB-DLBCL)被认为是一种预后较差具有侵袭性的DLBCL；而接受R-CHOP化疗的DLBCL若存在MYC基因重排提示生存期更短。作者采用免疫组化、FISH法对39例IB-DLBCL与68例非IB-DL-BCL的MYC基因状态进行对比分析。     

流式分析人脂肪组织中血管周围干细胞含量的方法探究

目的建立人脂肪组织中分离血管周围干细胞(PSCs)的方法,并研究其在脂肪组织细胞中所占的比例,为血管周围干细胞作为骨和软骨组织工程新的种子细胞奠定基础。方法取人的脂肪组织分别用Ⅰ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶消化得到血管基质成分(SVF),用细胞计数仪及流式细胞仪检测SVF中细胞密度、活细胞比例和PSCs细胞所占的比例。结果用细胞计数仪分析得出用Ⅱ型胶原酶消化脂肪组织所得到的SVF中活细胞比例更高,且差异具有统计学意义(P0.01),而细胞密度有增高趋势(P=0.18)。用流式细胞仪检测得出使用Ⅱ型胶原酶消化脂肪组织所得SVF中PSCs比例更高,且差异具有统计学意义(P0.01)。使用Ⅰ型胶原酶消化每10 ml脂肪组织中可以分离得到PSCs活细胞为(7.98±2.38)×105个,使用Ⅱ型胶原酶消化则每10 ml脂肪组织中可以分离得到PSCs活细胞为(16.68±4.56)×105个。结论使用Ⅱ型胶原酶消化脂肪组织可以得到更多的血管周围干细胞PSCs,其在脂肪组织中的含量可以满足骨和软骨损伤后自体细胞移植修复的需要。     

宫腔与阴道内联合放置米索前列醇预防剖宫产术后出血的临床研究

目的:观察宫腔与阴道内联合放置米索前列醇(简称米索)预防剖宫产术后出血的疗效。方法:随机抽取200例剖宫产术患者,胎儿娩出后,子宫体肌层注射催产素20 u,其中100例宫腔与阴道内联合放置米索(研究组),100例不加任何药物(对照组)。观察两组术中、术后2 h和术后24 h阴道出血的情况。结果:术后2 h、术后24 h及产后出血例数,研究组较对照组明显减少,有显著性差异(P<0.05)。结论:宫腔与阴道内联合放置米索可预防剖宫产术后出血,比单纯应用催产素疗效显著。     

仿生双相磷酸钙生物陶瓷支架的Micro-CT评价

[目的]体外用Micro-CT(Micro-computed tomography)图像对仿生双相磷酸钙生物陶瓷支架的三维结构进行计算机重建和评价.[方法]犬股骨头的松质骨样本行Micro-CT扫描,提取图像信息;三维凝胶叠层成型法制备出具有仿骨小梁结构的双相磷酸钙仿生生物陶瓷支架.随后用Micro-CT对支架扫描,以三维结构参数对支架和松质骨样本作三维评价和比较.三维参数包括:骨体积分数(Bone Volume Fraction,BVF,BV/TV)、骨表面积体积比(Bone surface/bone volume ratio,BS/BV)、骨小梁厚度(Trabecular thickness,TbTh)、骨小梁数目(Trabecular number,TbN)、骨小梁间隙(Trabecular spacing,TbSp)、结构模型指数(Structure Model Index,SMl)和各向异性程度(degree of anisoropy,DA).[结果]与犬股骨头松质骨样本相比,用本方法制备出的BCP支架具有相似的三维空间结构,二者的BV/TV、TbTh、TbN无显著差别(P＞0.05).小梁结构呈板状模型.[结论]本研究制备的BCP多孔支架的小梁具有一定的取向性,力学强度和良好的适于血管长入的空间结构.