骨髓基质干细胞与软骨脱细胞基质多孔支架异位构建组织工程化软骨的实验研究

目的 探讨骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)与软骨脱细胞基质多孔支架(cartilage ECM-derived porous scaffold,CEDPS)在裸鼠体内异位构建软骨的可行性,并建立利用PKH26荧光和分子荧光活体成像系统无创评估组织工程化细胞-支架复合体在体内生长情况的新方法.方法 PKH26荧光标记成软骨诱导的BMSCs,接种入CEDPS支架,体外进行电镜、Desd/Live荧光染色观察,然后植入裸鼠背部,4周后利用分子荧光活体成像系统无创伤性评估组织工程化组织在裸鼠体内生长情况,取材进行组织学以及Ⅱ型胶原免疫荧光检测,与荧光图像比较.结果 体外培养的BMSCs-CEDPS复合体电镜检查结果表明随着培养时间的增加,细胞在支架中增殖显著,细胞基质分泌增加,Dead/Live染色表明BMSCs在支架内部活性良好.4周后活体荧光示踪显示BMSCs在支架内生长良好,无扩散趋势,BMSCs-CEDPS复合体在裸鼠体内生成软骨样组织,番红"O"、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,免疫荧光检查表明构建的软骨样组织内的细胞来源为接种的PKH26标记的BM-SCs.结论 利用BMSCs和CEDPS支架能够在裸鼠皮下异位构建类软骨样组织.PKH26标记与分子荧光活体成像系统结合,能够无创伤性评估组织工程化组织的种子细胞在动物体内生长情况与转归.     

软骨细胞外基质源性取向支架与骨髓基质干细胞体外软骨组织工程的初步研究

Objective To fabricate cartilage extracellular matrix (ECM) oriented scaffolds and investigate the attachment, proliferation, distribution and orientation of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) cultured within the scaffolds in vitro. Methods Cartilage slices were shattered in sterile phosphate-buffered saline (PBS) and the suspension were differentially centrifugated untill the micro- fiber of the cartilage extracellular matrix was disassociated from the residue cartilage fragments. At last the supernatant were centrifugated, the precipitation were collected and were made into 2%-3% suspension. Using unidirectional solidification as a freezing process and freeze-dried method, the cartilage extracellular matrix derived oriented scaffolds was fabricated. The scaffolds were then cross-linked by exposure to ultraviolet radiation and immersion in a carbodiimide solution. By light microscope and scan electron microscope (SEM) observation, histological staining, and biomechanical test, the traits of scaffolds were studied. After being labelled with PKH26 fluorescent dye, rabbit BMSCs were seeded onto the scaffolds. The attachment, proliferation and differentiation of the cells were analyzed using inverted fluorescent microscope. Results The histological staining showed that toluidine blue, safranin O, alcian blue and anti-collagen Ⅱ immunohistochemistry staining of the scaffolds were positive. A perpendicular pore-channel structures which has a diameter of 100 μm were verified by light microscope and SEM analysis. The cell-free scaffolds showed the compression moduli were (2.02±0.02) MPa in the mechanical testing. Inverted fluorescent microscope showed that most of the cells attached to the scaffold. Cells were found to be widely distributed within the scaffold, which acted as a columnar arrangement. The formation of a surface cells layer was found on the surface of the scaffolds which resembled natural cartilage. Coclusion The cartilage extracellular matrix derived oriented scaffolds have promising biological, structural, and mechanical properties.     

异种关节软骨脱细胞基质支架的免疫反应研究

[目的]观察异种脱细胞软骨基质支架的免疫排斥反应,探讨其用于组织工程软骨支架的可行性。[方法]分别获取猪和新西兰大白兔的关节软骨,制作成:①猪脱细胞软骨支架;②猪未脱细胞软骨支架;③兔脱细胞软骨支架。将9只新西兰大白兔随机分成三组,分别在兔背部深筋膜与肌膜之间埋入:①异种(猪)脱细胞软骨支架;②异种(猪)未脱细胞软骨支架;③同种(兔)异体的脱细胞软骨支架,术后分组饲养。于术后1、2、4周分别取支架埋藏部位组织,进行普通病理观察及CD4+、CD8+T淋巴细胞免疫组织化学检测,并在术前和术后1周,2周,4周抽取外周血,分离检测血清中对支架产生的抗体的浓度(ELISA法)。[结果]所有新西兰大白兔无不良反应,细胞免疫显示异种(猪)和同种(兔)的脱细胞软骨支架及周围埋藏部位组织无明显淋巴细胞浸润,而异种未脱细胞组支架在埋入第4周时有明显淋巴细胞浸润,体液免疫显示术前后抗体浓度无明显差异(P0.05)。[结论]猪来源的脱细胞软骨支架用于异种移植时无免疫反应,从免疫学方面为异种脱细胞软骨支架的临床应用提供了可行性。     

岛叶血管中心性胶质瘤1例

患者,男性,22岁,因“反复发作性意识丧失、四肢抽搐4年”入院。患者无明显诱因于2009年12月开始发作,表现为全身强直抽搐发作,近2年表现为复杂部分性发作,服用抗癫痫药物,效果不佳。MRI平扫示右侧岛叶皮层增厚,局部见结节状异常信号影,最大层面1.0 cm ×0.8 cm大小,界尚清,T1 W1等低信号,T2 W1混杂高信号（图1）。行右侧岛叶病变切除术,送病理检查。     

孕期营养指导结合孕妇体操、拉玛泽减痛分娩法训练对促进自然分娩的影响

目的探讨孕期营养指导结合孕妇体操、拉玛泽减痛分娩法训练在临床提升孕妇自然分娩的价值。方法 2000例孕妇根据产前护理方式分为观察组和对照组,每组1000例。观察组孕妇临床进行孕期营养指导,孕18～24周时指导孕妇体操,28周时指导拉玛泽减痛分娩法练习。对照组孕妇临床进行常规的孕前检查及健康教育。收集两组孕妇的分娩结局以及新生儿的重量指标,并对其进行分析。结果观察组孕妇的自然分娩率为79.6%,对照组孕妇的自然分娩率为57.9%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;观察组新生儿重量为（3227.3±425.4）g;对照组新生儿重量为（3533.6±433.8）g,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论孕妇产前进行营养指导联合孕妇体操、拉玛泽减痛分娩法的护理,能有效的提升初产妇自然分娩率以及降低新生儿的重量。     

移动互联网技术在乳腺癌患者术后康复个案护理中的应用

目的:探讨移动互联网技术在乳腺癌患者术后康复个案护理中的应用方法和效果。方法:将120例乳腺癌改良根治术患者随机分为研究组和对照组各60例,对照组实施常规个案管理模式,研究组在对照组基础上采用移动互联网技术,比较两组干预效果。结果:研究组患者干预后1、2个月生活质量总评分高于对照组(P0.05);研究组患者干预后1、2个月护理满意度高于对照组(P0.05)。结论:对乳腺癌患者术后康复个案护理中实施移动互联网技术,可以明显提升患者护理服务质量,降低并发症发生率,提高患者护理满意度。     

藻酸钙凝胶为载体体外短期培养羊软骨细胞的生物学性状

目的:观察以海藻酸钠为载体的成年羊软骨细胞移植前体外短期培养的生物学性状。方法:实验于2004-07/2005-11在解放军总医院骨科研究所完成。①取成年山羊关节软骨,酶消化法得到原代软骨细胞,体外培养扩增,选用培养的第2,3代羊关节软骨细胞与12g/L海藻酸钠混合,种植密度为2×109L-1,将102mmol/L氯化钙溶液滴入软骨细胞藻酸钠悬液,形成藻酸钙软骨细胞凝胶,用软骨细胞培养液培养。②3,6,912d,分别取凝胶,测定DNA、蛋白聚糖含量,并行苏木精-伊红、藩红花O染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果:①藻酸钙凝胶中细胞的光镜形态学观察:软骨细胞在藻酸钙中呈丛状或球状生长,细胞在整个培养过程维持球形状态。②复合软骨细胞的藻酸钙凝胶的组织形态学及免疫组化测定结果:木精-伊红染色可见随培养时间的延长,细胞群增多变大;藩红花O染色显示软骨细胞周围存在不断增大的橙红染区,提示软骨细胞分泌蛋白聚糖含量持续增加。Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。③软骨细胞藻酸钙凝胶培养过程中DNA及蛋白聚糖含量的测定:随时间的延长,DNA的量逐渐增加,说明藻酸钙中的软骨细胞在不断增殖。藻酸钙中软骨细胞分泌的特异性基质蛋白聚糖随时间的延长而增多,象征着软骨细胞表型的稳定。结论:成年羊软骨细胞在藻酸钙中短期培养生长增殖良好,藻酸钙能保留羊软骨细胞表型,具备植入体内的条件。     

新型脱细胞骨基质材料的制备及理化评估

背景:传统的结构性天然骨脱细胞的方法存在许多不足之处.目的:用新的理化方法对结构性骨块进行脱细胞处理制作新型骨支架材料的可行性,并检测其理化性能.方法:以股骨头负重区结构性骨块为原料,高压水枪冲洗,继而利用Triton-100、脱氧胆酸钠等进行脱细胞等理化处理,制备新型脱细胞骨基质材料,并对支架进行大体、组织学、扫描电镜、Micro-CT观察、生物力学等相关检测.结果与结论:新型脱细胞骨基质材料保留了骨的细胞外基质成分,脱细胞彻底,扫描电镜及Micro-CT观察显示支架具备三维多孔网状结构系统,具有天然骨的孔径和孔隙率;生物力学测试脱细胞组支架的弹性模量为(552.56±58.92) MPa,强度为(11.34±3.49) MPa,与新鲜骨的弹性模量及强度比较,差异无显著性意义(P > 0.05),可作为骨组织工程支架的良好载体.     

化学去细胞异体神经移植修复鼠全面神经的实验研究

目的利用具有＂一主干多分支＂特征的化学去细胞同种异体神经（CEAN）修复大鼠面神经缺损并评价修复效果。方法取成年SD大鼠双侧面神经进行去细胞同种异体面神经制备和自体面神经冻融处理并进行结构评价。取成年雄性SD大鼠30只,制备大鼠左侧面神经10 mm缺损模型,随机分成3组（n=10）,分别为采用自体神经移植组（A组）、去细胞同种异体面神经移植（CEANA）组（B组）和自体神经液氮冷冻组（C组）,术后行大体观察和组织学观察。结果利用化学法可制备出保留天然成分和空间结构的具有＂一干多支＂特征的CEAN。术后12周,A组、B组有髓神经纤维总数均优于C组（P〈0.05）,A组与B组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论保留天然成分和空间结构的具有＂一干多支＂特征的CEANA可用于修复大鼠全面神经缺损的治疗,具有同自体神经移植相似的修复效果。     

软骨细胞外基质与壳聚糖复合制备组织工程软骨支架及其性能研究

 目的 探讨采用壳聚糖与脱细胞软骨基质复合制备组织工程软骨支架的可行性,检测其理化性能和细胞相容性。方法 取天然人软骨粉碎.取 100 nm~5μm 软骨微丝,脱细胞处理后制备为质量浓度 1%悬液.与质量浓度 2%壳聚糖醋酸溶液按 1颐1(重量比)充分搅拌混合,冷冻干燥制备复合支架。对支架交联,并进行组织学、扫描电镜、孔隙率及吸水性测定、生物力学评估, MTT法分析支架浸提液毒性。分离培养犬软骨细胞.种植到支架上.倒置显微镜、电镜观察细胞在支架的生长、分化情况。结果 组织学显示支架中无细胞碎片残留.II型胶原免疫组化染色阳性。扫描电镜显示支架内孔洞相互连通似海绵状.孔径为(136.2±34.9)μm.孔隙率为 81.4%±3.5%.吸水性约为 1525.7±129.3%。支架纵向弹性模量为(1.940±0.335)MPa。 MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照培养液吸光度值比较.差异无统计学意义(P>0.05)。倒置显微镜观察.细胞在支架上粘附良好.扫描电镜下细胞在支架上均匀分布.呈圆形或椭圆形.有基质分泌。结论 软骨细胞外基质和壳聚糖复合制备的仿生三维多孔双相支架.具有较高的孔隙率和吸水性.良好的生物力学特性.无毒.生物相容性良好.是组织工程软骨的良好支架载体。