鼠疫耶尔森菌低钙应答V抗原人源单克隆抗体筛选与鉴定

目的 筛选抗低钙应答V抗原(LcrV)的人源单克隆抗体,分析抗体基因特点,检测抗体与抗原结合的特异性、亲和力及功能。方法 使用PCR方法从鼠疫疫苗临床试验志愿者外周血细胞cDNA扩增抗体轻、重链可变区基因片段,构建ScFv噬菌体抗体文库。用LcrV对文库进行富集筛选,将获得的抗体基因表达成人IgG1后,测定抗体与LcrV抗原结合的特异性、亲和力、免疫调节功能以及保护能力。结果 成功构建了鼠疫耶尔森菌人源ScFv抗体文库,库容量为7.54×10⁸。抗体文库经LcrV筛选后获得了3株抗LcrV抗体,命名为RV-B4、RV-D1和RV-E8。3株抗体重链为VH1-46和VH3-30,轻链分别为VL1-51、VK3-20和VK1-39。3株抗体经ELISA及Western blot验证均与LcrV特异性结合,其与V抗原结合的解离常数(KD)分别为2.1 nmol/L、1.24 nmol/L和42 nmol/L。RV-D1体外降低人THP-1分泌TNF-α,动物攻毒试验中未发现抗LcrV抗体的保护效果。结论 从鼠疫疫苗免疫人群获得了靶向低钙应答V抗原的人源抗体,以结合抗体为...     

甲型H1N1流感病毒裂解疫苗安全性和免疫原性初步研究

2009年春,墨西哥首发新甲型H1N1流感病例并形成人际传播,随后在北美洲和全球迅速蔓延。世界卫生组织6月11日将甲型H1N1流感警戒级别升至6级,宣布全球将面临41年来首次流感大流行。随着持续性的社区传播,进人秋冬季节的北半球进入第二波流行的趋势。     

江苏省手足口病病原学流行特征分析

手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主.引起手足口病的肠道病毒包括肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)和A组柯萨奇病毒(Coxsackie A,CoxA)、埃可病毒的某些血清型[1].     

江苏省手足口病病原学流行特征分析

手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主.引起手足口病的肠道病毒包括肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)和A组柯萨奇病毒(Coxsackie A,CoxA)、埃可病毒的某些血清型[1].     

江苏省东台地区临床急性肝炎患者中戊型肝炎流行病学调查

戊型肝炎(HE)主要经过消化道传播,其主要病原体为戊型肝炎病毒(HEV)[1,2].本研究目的是调查东台地区临床急性肝炎患者中,HEV的流行情况,并根据随访病例的系列样本,探讨HEV IgM、IgG、抗原和核酸等检测指标相互关系.     

动物致伤人群接种狂犬病疫苗后血清学与流行病学效果的初步分析

目的观察就诊的动物致伤者,分别全程足量接种两种剂型狂犬病疫苗后,其血清中抗体阳转率和疫苗保护率。方法2000—2001年就诊者全程接种浓缩苗,2002—2003年的全程接种精制纯化(vero细胞)苗。严重致伤者,于0、3天接种加倍量疫苗,并于0天的同时,对其伤口周围用抗狂犬病血清(40IU/kg)进行浸润注射。联合使用抗血清者,完成全程5次注射后第15、75天各加强1针疫苗。接种结束后15—20天,以间接混合酶标法检测血清中抗狂犬病病毒抗体。期内经疫情报告系统,收集当年观察人群狂犬病病例,计算两接种组人群的发病率,并分别与当年未接种疫苗的动物致伤人群比较,以估算疫苗保护率。结果4年中该人群抗体总阳性率为95.60%。接种精制纯化苗组的阳性率为96.37%,高于浓缩苗组的94.83%。狂犬病疫苗保护率,精制苗1年和2年的均为100.00%;浓缩苗1年的为95.46%,2年、3年和4年的为90.91%。结论动物致伤人群规范处理局部伤口后,及时全程接种狂犬病疫苗,其抗体阳性率较高。国产精制纯化苗接种人群的抗体阳性率和1~2年的疫苗保护率高于浓缩苗。从我国狂犬病防治工作实际出发,提示国产精制纯化苗需尽快降低成本,以巩固和提高其接种率。     

南京地区人感染杯状病毒的病原学检测

目的了解南京地区病毒性腹泻患者中杯状病毒的感染情况,明确该地区杯状病毒的主要基因型和分子进化特点。方法收集南京市儿童医院疑似病毒性腹泻粪便标本155例,南京市某三甲医院成人腹泻标本8例,采用RT-PCR方法检测粪便中诺如病毒和札如病毒的多聚酶区核酸片段,并测序以明确基因型,对核苷酸序列使用CLUSTALW和phylip软件分析病毒的分子进化和亲缘关系。结果婴幼儿的155例标本共检出15例杯状病毒阳性,检出率达到9.7%,成人检出5份阳性,与婴幼儿感染的诺如病毒核酸在多聚酶区未发现显著差异,均为GⅡ4型,与GENBANK上序列号为EU074213(苏州)、EU096514、EF200699的毒株有较高的同源性;婴儿腹泻中有一例经核酸序列比对确认为札如病毒感染,为SGⅡ型,与GENBANK上序列号为AF439862的有94%的同源性。结论杯状病毒是本地区病毒性腹泻的重要病原体,感染的该病毒以诺如病毒GⅡ4型为主,与近年多个地区发现的该病毒有较近的亲缘关系。南京地区存在札如病毒感染。     

基因多态性对疫苗免疫应答影响的研究进展

基因在免疫系统应答过程中扮演着重要的角色，不同的基因位点可能引起疫苗免疫应答率的高低差异。本文对基因多态性与疫苗免疫应答的文献进行综述，旨在探究基因多态性会对疫苗免疫应答产生的影响，从基因水平上探讨个体接种疫苗后产生免疫应答的效果，为个体化免疫发展策略提供科学依据。综述结果显示人类白细胞抗原基因、各类细胞因子及其受体基因、Toll样受体类基因的单核苷酸多态性都会影响疫苗免疫应答。     

几种戊型肝炎试剂的比较及IgG抗体定量方法的建立

目的 利用多种抗戊型肝炎病毒(HEV)IgM、IgG检测试剂对戊型肝炎恢复期血清进行确认,建立戊型肝炎病毒ISG抗体的定量检测方法,初步应用于戊型肝炎疫苗接种后抗体效价检测.方法 应用多种抗-HEV IgM、IgG试剂对江苏省确诊的戊型肝炎病人发病后6个月以上的血清样品进行检测;抗-HEV IgG阳性样本应用ORF2 C端抗原和ORF3抗原Western blot进行确认,用WHO抗-HEV Ig标准品标定确认阳性的混合血清抗-HEV IgG的含量,制备抗-HEV IgG定量检测的线性标准品,建立戊型肝炎疫茼免疫后抗体定量检测方法.结果 42份戊型肝炎恢复期血清采用G、K、MP、万泰4种抗-HEV IgG试剂检测的阳性率分别为71.4%、78.6%、92.9%、100%,G试剂阳性率低于MP(X2=5.19,P<0.05)和万泰试剂(χ~2=11.76,P<0.01),K试剂阳性率明显低于万泰试剂(χ~2=7.96,P<0.01);MP、G、X、万泰、K试剂抗-HEV IgM试剂的阳性率分别为21.4%、7.1%、21.4%、64.3%、78.6%;万泰和K试剂的阳性率均明显高于MP(χ~2=15.75,P<0.01;X2=27.43,P<0.01).Western blot确认试验分别有30和18份血清与ORF2、ORF3抗原有阳性反应.13份血清混合为HEV-D01,其抗-HEV IgG浓度经标定为57.94 U/ml.制备了浓度范围为0.077～0.877 U/ml的7个1.5倍系列稀释的定最线性标准品,用于戊肝疫苗临床试验,试验过程中对高、中、低浓度质控品的定量值均在均数±2s范围内,变异系数(cv)分别为16%、16%、12%.结论 不同抗-HEV IgM和IgG试剂之间的质量存在较大差别,建立了抗-HEV IsG定量检测标准品,适用于戊肝疫苗的临床血清抗体IgG定量检测.     

江苏省肠道病毒71型分离株的分子遗传演化特征

肠道病毒71型(EV71)是小RNA病毒科肠道病毒属成员,其感染主要引起患者手足口病(handfoot-mouth disease,HFMD),个别患者可引起无菌性脑膜脑炎等并发症.自1998年EV71在中国台湾暴发以来,EV71病毒在亚洲的流行呈上升趋势.流行病学资料表明,不同地区不同症状的EV71病毒性疾病的暴发可能与毒株间的差异等因素有关[1].为了解EV71病毒的遗传和变异特征,本实验室对2009年在江苏手足口病流行地区分离到的一株EV71型病毒株(Jiangsu01,GenBank:FJ600325.1)的基因组核苷酸序列进行了遗传进化分析,从分子水平为EV71病毒的流行以及所致疾病的防控提供理论基础.