大孔吸附树脂用于川草乌中总生物碱的分离提取

目的：优选大孔吸附树脂提取分离制川乌、制草乌水煎液中乌头类总生物碱的工艺条件。方法：应用正交设计安排试验因素,以酸性染料比色法测定总生物碱含量,比较并筛选不同工艺条件对乌头类总生物碱的提取分离效果。结果：不同浓度的乙醇对乌头类总生物碱的洗脱的效果有显著影响。应用本法乌头类总生物碱的提取率为８５％,水溶性固体杂质的去除率为８２％。结论：本法的工艺条件可用于含川草乌的中药制剂的制备。     

紫杉醇抗人宫颈癌细胞株的体外研究

目的 研究紫杉醇对人宫颈癌细胞株HCE1细胞凋亡率和细胞周期的影响.方法 用紫杉醇处理人宫颈癌细胞株HCE1细胞,采用MTT比色法检测紫杉醇对宫颈癌细胞增殖的影响,确定紫杉醇抑制宫颈癌细胞的最佳浓度,通过流式细胞仪分析紫杉醇处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果 紫杉醇对人宫颈癌细胞株HCE1细胞的增殖具有抑制作用,且随药物浓度的增加和作用时间延长,抑制作用越明显;低浓度紫杉醇只影响宫颈癌细胞的凋亡率不影响细胞周期,高浓度紫杉醇既影响宫颈癌细胞的凋亡率又影响细胞周期.结论 紫杉醇能有效诱导人宫颈癌HCE1细胞的凋亡.     

5-杂氮-2''-脱氧胞苷对鼻咽癌细胞株细胞周期及14-3-3σ基因甲基化的影响

目的 探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响,并进一步分析5-aza-2dC处理对14-3-3σ基因甲基化状态的影响. 方法 用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞,MTT实验观察细胞生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡比例,用甲基化特异性PCR(MSP)分析14-3-3σ基因甲基化状态.结果 5-aza-2dC对4株细胞均有生长抑制作用,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F.5-aza-2dC处理使4株细胞凋亡率出现剂量依赖性的增加,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F.经5-aza-2dC处理后,CNE1、CNE2、6-10B细胞出现不同程度的G,0/G,1期阻滞,而5-8F表现为G0/G,1期和G,2/M期双期阻滞.不经5-aza-2dC处理情况下4株细胞14-3-3σ基因均存在不同程度的甲基化,5-aza-2dC处理能够使14-3-3σ基因去甲基化. 结论 5-aza-2dC具有抗鼻咽癌作用,抑制作用强弱可能与鼻咽癌分化程度和转移潜能有一定关系,其机制可能与使14-3-3σ等抑瘤基因去甲基化有关.     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的分析5-杂氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-2dC）对鼻咽癌细胞株CNEl、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响。方法用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞，MTT实验观察细胞生长曲线，用流式细胞仪检测细胞周期分布情况和凋亡细胞比例。结果5-aza-2dC对4株细胞的增殖均具有抑制作用，CNEl和6-10B细胞的半数抑制剂量低于CNE2和5-8F。药物处理使4株细胞凋亡率呈剂量依赖性增加，CNEl和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。经5-aza-2dC处理后，CNEl、CNE2、6-10B细胞出现不同程度G0／G1期阻滞，而5-8F表现为G0／G1期和G2／M期双期阻滞．CNEl和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。结论5-aza-2dC对CNEl、CNE2、5-8F和6-10B细胞具有抑制增殖、促进凋亡和细胞周期阻滞作用，CNEl和6-10B对药物敏感性高于CNE2和5-8F。     

非小细胞肺癌端粒酶活力表达及其临床意义

目的：探讨非小细胞肺癌组织端粒酶活性表达及其临床意义。方法：应用TRAP－PCR－ELISA方法检测36例非小细胞肺癌组织及相应的32例癌旁组织,9例肺良性病变组织和9例正常肺组织中端粒酶活性表达。结果：肺癌组织中端粒酶活性表达阳性率为75％（27／36）,癌旁组织为6．25％（2／32）,肺良性病变组织为11．1％ （1／9）,正常肺组织为0％（0／9）。肺癌组织端粒酶活性表达与肺癌病理类型、组织分化程度、原发性肿瘤大小、淋巴结转移情况及临床分期无明显相关。结论：端粒酶在肺癌组织中的高表达可作为肺癌诊断和鉴别诊断的重要分子生物学指标之一。     

益气解毒片对鼻咽癌细胞端粒酶和端粒酶RNA抑制作用的实验研究

为研究益气解毒片对鼻咽癌细胞端粒酶和端粒酶RNA的影响,先用MTT法检测其杀伤鼻咽癌细胞(HNE1)的半抑制浓度(IC50),再用10×IC50、1×IC50、0.5×IC50作用HNE1 12 h、24 h、48 h、72 h、96 h,然后检测HNE1端粒酶(Telomerase)活性和端粒酶RNA的表达.结果:10×IC50作用HNE1 24 h,端粒酶活性下降为阴性,同时端粒酶RNA的表达受到抑制;1×IC50作用后,端粒酶活性稍有下调,但端粒酶RNA表达无明显改变;0.1×IC50作用后,端粒酶活性没有明显变化,但低于白空对照组.这提示较高浓度益气解毒片在体外能抑制端粒酶的活性和端粒酶RNA表达,可能通过对鼻咽癌细胞及其端粒酶的活性抑制而发挥抑瘤效应.     

Alterations of the p16 gene in nasopharyngeal carcinogenesis

Objective To investigate whether inactivation of p16 gene is frequent in nasopharyngeal carcinoma (NPC) biopsies and whether the p16 gene may play a role in NPC carcinogenesis.Methods In the present study, the expression of the p16 gene in 14 NPC biopsies was detected by immunohistochemistry method, and the possible deletion of the exon 1α and 2 of the p16 gene was also detected in these biopsies by comparative multiplex PCR-Southern blotting with an attempt to understand the mechanism of p16 gene down regulation. To further understand the role of the p16 gene in NPC carcinogenesis, a full-length wild-type p16 cDNA was introduced into NPC cell line HNE1 with p16 gene down-regulation by electroporation. Seven G418-resistant clones were isolated. PCR was used to detect the integration of the exogenous p16 cDNA and Northern blotting was used to detect the expression of the p16 gene in 4/7 clones. Finally the growth suppression of the positiveclone was detected twice by cytometry and xenografts.Results It was found that 12/14(85%) NPC biopsies lacked p16 expression, but only 2/14(14%) biopsies contained exon 2 deletion. In four stable transfectant clones, only one showed integration of exogenous p16 cDNA with p16 mRNA expression increasing. Comparaed to the HNE1 cell line and the transfectant clones without integration of exogenous p16 cDNA, this transfectant clone showed: (a) a longer doubling time; (b) an accumulation of cells in G1 phase; (c) longer latent period of tumor formation in nude mice.Conclusion These data suggested that the p16 gene is frequently inactivated in NPC, but the deletion of exons 1α and 2 of the p16 gene can not account for high frequent lack of p16 expression. In addition to the deletion, methylation and mutation must contribute to the alteration of the p16 gene expression. The direct evidence that the p16 gene may play a role in NPC was provided by the gene transfer experiment. Up-regulation of p16 expression can inhibit the growth and tumor formation of NPC cells. All these data show that the p16 gene is a functional tumor suppressor gene in NPC and takes part in promoting the malignant phenotype reversion of NPC cells.     

内毒素诱导淋巴细胞凋亡

内毒素 (ＬＰＳ)是革兰氏阴性细菌细胞壁的成分 ,它可以引起宿主的广泛病理生理效应 ,如休克、组织损伤 ,甚至宿主死亡。ＬＰＳ也激活免疫系统 ,但主要作用于中性粒细胞、单核/巨噬细胞和Ｂ淋巴细胞。ＬＰＳ是否能影响Ｔ淋巴细胞 ,一直是研究者们感兴趣的课题。本研究对ＬＰＳ体外诱导淋巴细胞凋亡进行初步观察。1　材料与方法1 1　材料　 (1)试剂 :ＬＰＳ(Ｓｉｇｍａ ,10 0 μｇ·ｍｌ-1) ,淋巴细胞分离液 (上海试剂二厂 ) ,ＲＰＭＩ16 40完全培养基 (Ｇｉｂｃｏ ,美国 ) ,丫啶橙 (Ｓｉｇｍａ ,2 0 0 μｇ·ｍｌ-1)和嗅乙啶 (上海生产 ,2 0 0 μｇ·ｍｌ-1)。     

城市医疗资源调整及其作用的理论研究

阐述城市医疗资源优化配置的理论,分析目前我国城市医疗资源配置的现状和存在的问题,归纳我国城市医疗资源配置不合理的主要原因,提出城市医疗资源配置的逻辑框架和城市医疗资源调整与重组的功能定位,以及城市医疗资源调整与重组的方法和作用,探讨在我国城市医疗资源调整中应注意的问题。     

人肺腺癌组织的血清蛋白质组学研究

目的采用以肿瘤免疫学与蛋白质组学研究技术有机地结合为基础的血清蛋白质组学研究体系(SERPA)筛选肺腺癌相关抗原。方法应用SERPA对4例人肺腺癌组织进行研究,分析肺腺癌组织总蛋白分别与肺腺癌患者的自身血清以及正常对照血清反应的W estern b lot图谱,识别鉴定差异反应的蛋白质。结果获得了分辨率较高的人肺腺癌组织与患者的自身血清以及正常对照血清的W estern b lot图谱,共识别27±5个差异反应的蛋白质。对其中的部分差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出一些与细胞生长增殖、细胞代谢、细胞周期调控、信号转导等有关的肺腺癌相关抗原。结论本研究为进一步筛选用于肺腺癌诊断、治疗和预后评估的肺腺癌分子标志物奠定了坚实的基础。