过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长

目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。     

热休克蛋白16.3多克隆抗体的制备

目的大肠杆菌表达Hsp16.3,制备其多克隆抗体。方法设计引物,从H37Rv基因组中扩增出目的片段Hsp16.3,pET28a-Hsp16.3质粒的构建、克隆和表达。对His-Hsp16.3进行诱导、表达和纯化。用纯化好的蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,用ELISA检测抗血清中多抗的效价,用Western blot法检测多克隆抗体的生物活性。结果重组质粒pET28aHsp16.3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,SDS-PAGE结果显示在His-Hsp16.3的相对分子质量(Mr)约为20 000。制备的多克隆抗体效价为1∶800,且特异性较好。结论成功的克隆、表达、纯化出His-Hsp16.3,并且成功制备了抗Hsp16.3多克隆抗体。     

新形势下医学免疫学实验课新型混合式教学初探

随着千万兆级的互联网和移动通信“5G”技术的迅猛发展，给高等教育的医学教育模式带来了机遇和挑战，打造新形势下符合时代需求的医学教育模式已成为教学改革的新热点。基于新形势下对医学教育的新需求，遵义医科大学医学免疫学教研室针对传统线下实验教学模式的弊端，尝试了线上有机结合线下的混合式教学的创新型模式，即线下传统教学模式、线上线下混合式教学模式、线上平台自主教学模式3种模式，其中包括搭建线上互联网和移动共享资源学习平台、线下分小组讨论教学、翻转课堂互动教学、综合实验设计等多样化教学手段，并有机融入课程思政的教学内容，不断优化不同模式课程考核的评估体系，对医学免疫学传统的线下实验教学进行了初步探索和尝试，为线上线下混合式新模式教学实践提供了丰富的经验。     

跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段基序稳定表达细胞株的建立及功能研究

目的 建立高表达跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段(TNF-intracellular domain,TNF-ICD)基序的人乳腺癌MCF-7细胞株,为研究TM-TNF-α的反向信号提供工具.方法 采用脂质体介入法将含人TNF-ICD的pIRES2-EGFP病毒载体导入MCF-7中,经鉴定、筛选获得能稳定表达TNF-ICD细胞株.采用MTT法检测转染细胞对TNF-α的敏感度,比色法检测NO含量,ELISA方法 检测NF-κB的活性.结果 TNF-ICD基因转染入MCF-7细胞后表达在细胞膜上,并能提高该细胞NF-κB活性,抵抗TNF-α的杀伤,增加其NO产生;应用NF-κB抑制剂PDTC处理后能恢复该细胞对TNF的敏感性.结论 获得稳定表达TNF-ICD的MCF-7细胞株,TNF-ICD可能作为TM-TNF-α细胞内的一段活化基序参与TM-TNF-α的反向信号,并通过活化NF-κB,抵抗可溶性TNF-α介导的细胞毒作用,增加NO的产生.     

microRNA-7 敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响

目的:观察microRNA-7(miR-7)敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响并探讨其意义。方法:利用脂多糖(LPS)腹腔注射(10 mg/ kg 体重)野生型(Wild type,WT)小鼠和miR-7 基因敲减(Knockdown,KD)小鼠建立急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)模型;HE 染色观察肺组织病理学变化;计算肺泡灌洗液(BAL)中的细胞总数;Real-time PCR 检测肺组织炎症相关因子表达变化;流式细胞术(FACS)进一步检测BAL 中固有免疫细胞酌啄T 细胞、F4/80 巨噬细胞(Macrophages,M渍)和适应性免疫细胞CD4+ T 细胞和CD8+ T 细胞的比例和绝对数变化;FACS 检测CD4+ T 细胞活化相关分子CD62L 和CD69 的表达水平。结果:相对野生型(Wild type,WT)小鼠,HE 染色显示miR-7KD 小鼠的肺组织小血管充血和炎性细胞浸润明显减少,病理性损伤明显减轻;Real-time PCR 结果显示促炎性细胞因子IL-6 的表达水平显著降低(P<0.01),而抗炎性细胞因子IL鄄4、TGF 的表达水平明显增加(P<0.05);同时,BAL 中总细胞数显著减少(P<0.05);FACS 检测进一步显示miR-7KD 小鼠的BAL 中F4/80+ M渍细胞的比例及绝对数均明显下调(P<0.05),而 T 细胞的比例上(P<0.05),但其细胞绝对数无差异(P>0.05);BAL 中CD4+ T 细胞和CD8+ T 细胞的比例及其绝对数均显著降低(P<0.05);最后CD4+ T 细胞活化膜分子CD62L的表达水平明显上调(P<0.05),而CD69 的表达水平显著下调(P<0.05)。结论:miR-7 敲减可减轻ALI 模型小鼠的肺部损伤,提示其可能在ALI 发生中发挥了重要调控作用。     

医学高校教研室职位设置与职责刍议

教研室全称是教学研究室,是高等学校教学、科研的基层 单位.它是按照承担一门或几门性质相近的教学集体.它担负着教学、科研、师资队伍建设、教学法研究、教材建设和课程建 设等重要任务[1].一直以来,我国医学高校普遍忽视教研室的建 设,对教研室的建设发展投入精力不足,对教研室的功能重视不足.     

体内和体外两种方法制备甲型副伤寒特异性转移因子

目的 比较体内、体外两种方法制备的甲删副伤寒特异性转移因子的理化性质及特异免疫活性.方法 此采用体内、体外两种方法制备甲型副伤寒特异性转移因子,检测其理化性质及以攻击试验测定特异免疫活性.结果 两种方法制备的甲型剐伤寒特异性转移因子理化性质及特异免疫活性无统计学差异,均符合中国药典生物制品标准.结论 定制备的甲型副伤寒特异性转移因子具有抗原特异性,能够转移针对甲型副伤寒沙门菌的特异免疫效庇.体外法是制备特异转移因子的一种更为简便、经济、有效的方法.     

TNF-SP-EGFP融合蛋白的构建表达及亚细胞定位

目的探讨肿瘤坏死因子信号肽（TNF-SP）在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法采用聚合酶链反应（PCR）技术，以TNF-SP-pcDNA3.0质粒为模板扩增TNF-SP基因，采用PCR产物的粘端克隆法，将TNF-SP定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点，构建TNF-SP-EGFP重组质粒，酶切，PCR检测，序列分析鉴定，采用脂质体转染法，将TNF-SP-EGFP融合基因转染COS-7细胞进行表达，经碘化丙啶（PI）染色后以激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果PCR检测，酶切鉴定及测序证实目的基因TNF-SP正确连接到pEGFP-N1的多克隆位点。TNF-SP-EGFP重组体转染COS-7后，激光共聚焦显微镜显示TNF-SP-EGFP在细胞质表达。结论成功地构建了TNF-SP-EGFP融合蛋白真核表达质粒，在COS-7细胞中获得表达，并证实其定位于细胞质。     

miRNA-126真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用

目的： 构建miRNA-126的重组真核表达载体,研究其对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和迁移的影响。 方法: 设计合成miRNA-126的正义和反义寡核苷酸,构建真核表达载体pcDNA6.2-miR-126,体外瞬时转染至4T1细胞,荧光显微镜下观测转染效率。Real-time PCR检测4T1细胞中miRNA-126的表达,MTT法和克隆形成实验检测4T1细胞的增殖和克隆形成能力,划痕法观察4T1细胞的体外迁移。 结果： 成功构建pcDNA6.2-miR-126真核表达载体,其可在4T1细胞中有效表达miR-126。与转染空质粒组（pcDNA6.2-Ctrl）相比,瞬时转染72 h后,pcDNA6.2-miR-126转染组4T1细胞的体外增殖能力受到明显抑制\[(030±0.03) vs (0.51±0.04),P<0.05\];瞬时转染48 h后,pcDNA6.2-miR-126组4T1细胞迁移能力也受到明显抑制\[(817±2.30) vs (28.33±2.16)个,P<0.05\]。 结论： miRNA-126过表达可抑制乳腺癌4T1细胞的增殖及迁移。     

miRNA-7在小鼠不同组织器官中表达的检测及其意义

目的 采用Real-time PCR方法来检测miRNA-7在小鼠12种不同组织器官中的表达情况并探讨其意义.方法 首先分别提取小鼠12种组织器官总RNA,用miRNA-7特异性引物逆转录为cDNA,采用Real-time PCR探针法检测miRNA-7在12种组织器官中的表达水平.结果 成功应用Real-time PCR方法检测miRNA-7在小鼠12种组织器官中的表达水平,结果显示,miRNA-7在肺组织中的表达水平最高,而在淋巴结中的表达水平最低.此外,在小肠、脑、胸腺、脾脏中也存在miRNA-7的高表达.结论 miRNA-7在小鼠的肺、小肠、脑、胸腺、脾脏中呈较高水平的表达,提示该分子可能在上述器官的发育、分化、功能维持及相关疾病发生中具有重要作用,为后续深入研究miRNA-7的生物学功能提供了前期试验依据.