菌落PCR快速分析抗体库重组率时的假阳性现象

目的　评价菌落PCR法鉴定噬菌体抗体库阳性重组率的可靠性。方法　鼠抗体基因Lc片段、Fd片段经酶切、纯化后 ,依次克隆入pComb3载体上相应的酶切位点 ,电转化XL1 blue菌后建立鼠源性Fab噬菌体抗体库。比较菌落PCR法、质粒PCR法及质粒酶切法鉴定转化菌阳性重组率的一致性。同时用空菌、空载体、空载体菌等作模板为对照PCR ,以排除相关组分的干扰。结果　建立的Lc库的库容为 1.175×10 6CFU ,Fab库的库容为 1.0 2×10 6CFU。 3种方法鉴定的阳性重组率不同 (Lc的重组率依次为 10 0 %、78%、78% ,Fd的重组率依次为 90 %、6 6 %、6 6 % ,Lc与Fd同时插入的重组率依次为 90 %、5 0 %、5 0 % )。菌落PCR法鉴定的重组率偏高 ,存在假阳性现象。对照PCR提示 ,XL1 blue菌本身可能是导致假阳性扩增的原因。结论　用菌落PCR法不能准确鉴定噬菌体抗体库的重组率 ,用质粒PCR法或质粒酶切法鉴定更为可靠     

大隐静脉曲张传统手术与激光治疗的临床对比研究

对比研究大隐静脉高位结扎+分段剥脱术和激光治疗的疗效。研究组32例采用血管腔内激光治疗大隐静脉主干及小腿曲张血管；对照组32例采用传统手术方法（大隐静脉高位结扎+分段剥脱术）。比较两组手术时间、术中出血量、术后开始下床活动时间、住院天数、疼痛程度等指标。结果示：研究组手术时间、术中出血量、术后开始下床活动时间、住院天数均显著低于对照组（P<0.01），疼痛程度亦明显轻于对照组。提示大隐静脉曲张血管腔内激光治疗临床综合疗效明显优于传统手术方法，具有微创、无疤，无痛等优点。     

射频消融诱导兔VX2肝脏移植瘤细胞凋亡

目的　探讨射频消融 (RFA)对兔VX2 肝脏移植瘤的治疗机制。方法　通过VX2 肿瘤组织混悬液肝内注入法建立兔肝脏肿瘤模型 ,随机分为实验组及对照组 ,分别予以RFA治疗及假性处理 ,于治疗结束后 0、12h、1、2、4、8、16d共 7个时间点分别切取肿瘤中心组织及边缘组织为检测标本 ,进行HE染色、透射电镜检查并运用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况。结果　治疗组毁损区边缘部组织中有大量阳性细胞 ,中心部分亦有较多的阳性细胞 ,两者凋亡细胞指数差异非常显著 (P <0 .0 1)。对照组标本中仅发现极少数阳性细胞 ,且其中心区与边缘区无统计学差异 ,其凋亡细胞指数与治疗组标本相比 ,差异均非常显著 (P <0 .0 1)。于不同时间点观察 ,治疗组细胞凋亡高峰在 2 4h左右 ,而对照组细胞凋亡则无明显时间分布特征。结论　诱导肿瘤细胞凋亡是射频消融治疗肝脏恶性肿瘤的一项重要机制。其发生的部位主要是肿瘤周边区 ,时间高峰在RFA作用后 2 4h左右。     

集束电极射频热毁损治疗肾上腺转移癌37例

肾上腺属于人体肿瘤转移的好发器官之一。随着影像技术的提高，使许多肾上腺转移癌早期被发现。我科自1999年以来对37例肾上腺肿瘤进行集束电极射频热毁损治疗，取得了良好效果，现报道如下。     

后腹腔镜手术切除肾上腺节细胞神经瘤疗效观察

目的 :探讨后腹腔镜微创手术治疗肾上腺节细胞神经瘤的适应证和可行性。方法 :采用后腹腔镜手术治疗肾上腺节细胞神经瘤患者 5例 ,其中左侧肾上腺节细胞神经瘤 2例 ,右侧 3例。结果 :5例后腹腔镜手术全部获得成功 ,4例肾上腺肿瘤为单发 ,1例为多发 (4个肿瘤 ) ;肿瘤最大直径 2 .5～ 8.0 (4 .2± 1.8)cm ;手术时间35～ 10 5 (5 9± 2 7)min ,估计出血量 10～ 30 (19± 7)ml,术后镇痛剂吗啡用量 0～ 2 0 (8± 8)mg ,2例未用镇痛剂 ;排气、恢复进食时间 1～ 3(1.4± 0 .5 )d ;术后住院时间 4～ 7(5 .4± 1.5 )d。无围手术期并发症发生。结论 :后腹腔镜手术切除肾上腺节细胞神经瘤是安全可行的 ,能充分体现腹腔镜手术创伤小、恢复快的优点。肾上腺节细胞神经瘤是腹腔镜手术很好的适应证。     

超声刀在新生儿及小婴儿腹腔镜手术中的应用

目的 探讨超声刀在新生儿及小婴儿腹腔镜手术中的应用效果. 方法 使用超声刀在腹腔镜下完成先天性巨结肠根治术15例,卵巢囊肿切除术4例,肠回转不全矫治术3例. 结果 本组手术均成功,无中转开腹,术后无并发症发生. 结论 超声刀在新生儿及小婴儿腹腔镜手术中的应用疗效满意,安全,微创.     

胃泌素拮抗剂和活化T淋巴细胞联合应用对结肠癌细胞的杀伤作用

目的:探讨联合应用胃泌素拮抗剂和CD28/CD80单克隆抗体共刺激活化的健康人外周血T淋巴细胞(PBLs)在体外对结肠癌细胞株HT-29的杀伤作用.方法:分离与体外培养外周血PBLs,并用CD28/CD80共刺激活化PBLs;用含活化的PBLs和(或)胃泌素拮抗剂CI-988的RPMI 1640培养基培养HT-29细胞.MTT法检测2者对HT-29细胞的杀伤率,并用电镜观察效应细胞杀伤结肠癌细胞株HT-29的超微结构及HT-29细胞的凋亡情况.结果:胃泌素拮抗剂与活化PBLs合用,对结肠癌细胞株HT-29的杀伤率((95.81±1.99)%)大于单用胃泌素拮抗剂((66.36±1.31)%)(P＜0.05).电镜结果显示,效应细胞作用12 h肿瘤细胞就发生部分坏死,部分肿瘤细胞可见凋亡.结论:联合应用活化的PBLs和胃泌素拮抗剂CI-988可以提高对结肠癌细胞株HT-29 杀伤作用.活化的淋巴细胞杀伤结肠癌细胞可能是通过诱导肿瘤细胞坏死及凋亡2条途径来实现.     

嵌合轻链为模板导向筛选人源性抗肝癌抗体重链Fd片段

目的:利用噬菌体抗体库和导向选择技术,以抗HAb18G嵌合抗体轻链为模板,筛选人源性抗肝癌抗体Fd片段.方法:利用RT-PCR自肝癌患者外周血淋巴细胞中扩增全套人抗体重链Fd基因片段,克隆入含嵌合L链的展示载体pComb3X,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库.然后,利用大肠杆菌表达的非融合HAb18GE为抗原进行亲和筛选,利用pⅢ融合抗体的形式进行克隆鉴定,并对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测.结果:构建成功库容量为2×107PFU的杂合人-鼠噬菌体抗体库,利用非融合表达的HAb18GE进行6轮筛选.ELISA及流式细胞仪检测,其中7个克隆呈特异性阳性反应.其中克隆AP6-2和AP6-7亲和力较高,测序显示其基因序列相同,且与亲本抗体恒定区序列相同,属IgG2亚类,可变区属VH3家族.结论:通过本实验,利用嵌合轻链为模板,进行Fd片段替换,成功筛选到人源性抗体Fd片段.     

集束电极射频热毁损治疗肾上腺转移癌37例

目的:观察集束电极射频热毁损治疗肾上腺转移癌的安全性及临床疗效。方法:将37例(50个病灶)诊断为肾上腺转移癌的患者在局麻下行集束电极射频热毁损治疗,观察其治疗时反应及术后肿瘤缩小情况。结果:射频治疗过程中患者无特殊不良反应;术后未见肾上腺功能明显减退,不需特殊处理。治疗后肿瘤总缓解率为92.6%,特别是直径小于10cm的肿瘤疗效明显。结论:集束电极射频热毁损治疗肾上腺转移癌安全有效。     

简易腹腔化疗管的临床应用及常见并发症分析

我们于2002年7月至2005年12月对168例患者,腹腔内病灶周围安放简易腹腔化疗管行灌注化疗,疗效显著,现报告如下。临床资料1一般资料168例患者,其中胃癌105例;结、直肠癌63例。男100例,女68例。最小年龄32岁,最大年龄79岁,平均年龄46.4岁。全组病人术后均经病理诊断证实,均为腺癌