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AML1-ETO融合mRNA是t(8,21)(q 22;q22)易位断裂点区域的转录产物,t(8;21)是FAB-M_2型急性髓性白血病(AML)最常见的基因异常。最近,~t(8,21)断裂点序列已得到克隆。我们应用一对引物(ETOU_1/ETOD_1)通过逆转录-聚合酶链反应(RT_-PCR)扩增到16例AML患者的AML1-ETO融合转录本。 相似文献
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实时定量RT-PCR监测慢性粒细胞白血病患者伊马替尼治疗过程中bcr/abl mRNA水平 总被引:7,自引:0,他引:7
目的观察甲磺酸伊马替尼(简称伊马替尼)治疗Ph+慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓bcr/ablmRNA水平的变化。方法采用实时定量(Realtimequantitative)RTPCR(RQPCR)技术连续监测34例α干扰素治疗无效Ph+CML患者在伊马替尼治疗前后不同时间120份骨髓标本bcr/ablmRNA水平。治疗前骨髓Ph+细胞百分率均≥95%。结果RQPCR的敏感度为10pgRNA,标准品日间差及日内差均<5%。10例伊马替尼治疗前标本中位bcr/ablmRNA水平为5.79%,各例之间差异甚大(0.24%~60.90%)。72份Ph+细胞百分率为0%~94%的治疗后标本bcr/ablmRNA水平与Ph+细胞百分率显著相关(r=0.82,P<0.001)。7例治疗12个月内达到完全遗传学缓解(CCyR)的患者bcr/ablmRNA水平随治疗时间延长而迅速降低,可供分析的6例患者治疗3个月时较治疗前下降65.9%~98.8%。达到CCyR后,bcr/ablmRNA水平随治疗时间延长继续下降,直至为0。4例治疗12个月后获得显著遗传学缓解患者(Ph+细胞百分率均<35%)bcr/ablmRNA水平缓慢下降,可供分析的3例患者治疗3个月时的bcr/ablmRNA水平分别比治疗前下降2.5%、18.5%及61.6%。5例持续遗传学无效,并且维持在慢性期的患者bcr/ablmRNA水平1例缓慢下降,2例缓慢上升,2例基本不变。4例治疗中发生急变的患者bcr/ablmRNA水平均逐步升高。结论对于伊马替尼 相似文献
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目的 研究格列卫 (Glivec ,STI5 71)诱导P2 10BCR/ABL(+)K5 6 2细胞凋亡机制。方法 采用Annexin Ⅴ /PI双染实验、DNA的PI染色、碘化二己基恶碳菁 (DiOC6 [3])染色、2 ,7 二氯荧光素二乙酸酯 (DCFH DA)染色及DNALadder等方法测定凋亡细胞。利用Westernblot实验分析K5 6 2细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平 ,测定Bcl XL、caspase 3蛋白的表达并分别测定线粒体及胞浆部分的细胞色素C(cytoC)蛋白。结果 STI5 71可诱导K5 6 2细胞凋亡 ,出现DNA亚二倍体凋亡峰及DNALadder,线粒体跨膜电位及活性氧物质降低 ,P2 10BCR/ABL酪氨酸磷酸化水平降低 ,Bcl XL、蛋白减少 ,caspase 3蛋白前体活化降解出相对分子质量为 2 0× 10 3 亚单位 ,胞浆部分出现cytoC ,同时线粒体cytoC减少。结论 STI5 71可迅速使P2 10BCR/ABL酪氨酸磷酸化水平下降 ,线粒体cytoC胞浆转位介导的信号通路是STI5 71诱导K5 6 2细胞凋亡的途径之一 ,STI5 71是有效的基因靶向治疗剂 相似文献
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为了探讨CD123联合应用其它免疫标志检测急性早幼粒细胞白血病(APL)中微小残留病(MRD)的作用及意义,采用四色流式细胞术(FCM)分析了186例初诊APL患者的免疫表型特点及20例正常骨髓中与APL细胞表型相同的细胞所占比例,并应用以CD34/CD117/CD123/HLA-DR为主的4色抗体组合对172份标本进行MRD检测并与实时定量PCR结果相比较。172份标本包括19例连续随访APL患者的116份骨髓或外周血标本和47例距初诊3个月至2年不等的非连续随访患者的56份骨髓标本,其中形态学完全缓解(CR)后117份,CR前55份标本。对18份标本同时加做抗体组合CD9/CD117/CD34/CD33检测。结果表明:初诊APL患者除高表达CD9、CD33、CD117和低表达CD34、HLA-DR外,CD123的阳性表达率为100%(30/30);正常骨髓中CD117+CD34-CD123+HLA-DR-细胞和CD117+CD34-CD9+CD33+细胞在有核细胞中的比例分别为(0.066±0.012)%和(0.089±0·066)%,与APL患者相比相差4个对数级;随访期内,19例患者全部获得形态学CR,中位时间为4周(3-6周),13例FCM结果转阴的中位时间为7.5周(5-11周),11例PCR结果转阴的中位时间为8周(5-12周);形态学CR后随访的117份标本中41份FCM检测MRD呈阳性,8份标本CD117+CD34-CD123+HLA-DR-细胞比例>5%,中位值为9.02%(5.26%-18.14%),33份标本CD117+CD34-CD123+HLA-DR-细胞比例<5%,中位值为0·48%(0.02%-4.70%);CD117+CD34-细胞中CD123+HLA-DR-细胞的中位相对比例分别为86.77%(63.29%-92.62%)和63.59%(15.11%-98.36%);FCM与PCR同时检测MRD结果显示,FCM(+)标本中95.9%(93/97)PCR为阳性,FCM的假阳性率为4.1%(4/97),PCR的假阴性率为8.75%(7/93)。FCMMRD(-)标本中,92%(69/75)PCR阴性,8%(6/75)为PCR阳性。连续随访的116份标本和形态学CR后的117份标本显示,CD117+CD34-CD123+HLA-DR-细胞比例与实时定量PCR检测的mRNA水平基本一致,两者均有一定的相关性(r=0.824,P<0.001和r=0.754,P<0.001)。结论:应用CD34/CD117/CD123/HLA-DR为主的2组4色抗体组合检测APL患者中的MRD简单可行,可与PCR检测相互补充。 相似文献
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四色流式细胞术分析B细胞型急性淋巴细胞白血病免疫表型 总被引:3,自引:3,他引:3
为了研究国人B细胞型急性淋巴细胞白血病(B-ALL)免疫表型特点,使用了四色流式细胞术CD45/SSC 设门分析181例B-ALL的免疫表型。研究结果发现,所有检测病例CDl9阳性率100%,HLA-DR阳性率98.9%,CD38,CD10和CD34阳性率分别为88.5%,76.8%和76.8%,CD117与T系抗原CD2和CD7在B-ALL中很少表达。儿童组(≤14岁)CD10比例较高,青少年(15-18岁)和成人组(≥19岁)髓系相关抗原CD13和(或)CD33表达较高。各年龄组CD10 /CD34 型比例最高,随年龄增长CD10 /CD34 型比例升高。CD10-CD34 型伴殖系抗原表达率明显高于其它亚型。与CD45 病例相比,CD45-或CD45 /-病例常伴有较高的CD10表达。43例标本RT-PCR检测bcr/abl结果显示:bcr/abl 组和bcr/abl-组伴殖系抗原表达率无显性差弄,m-bcr/abl 主要见于CD10/CD34 型。结论:典型的B-ALL细胞表达CD19和HLA-DR,不表达CD117。不同发育阶段CD34,CD10和CD45表达不一。青少年组免疫表型与成人组相似。CD45 多见于CD10-B-ALL。儿童组殖系抗原表达率较低。m-bcr/abl 多见于CD10/C1)34 型B-ALL。 相似文献
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用聚合酶链反应技术检测急性髓细胞白血病AML_1-ETO融合转录产物 总被引:1,自引:0,他引:1
应用一对引物(ETOU_1/ETOD_1)通过逆转录酶/聚合酶链反应(RT/PCR)扩增17例急性髓细胞白血病(AML)患者的AML_1-ETO融合转录本,12例初治患者(M_111例、M_41例)中一致性扩增到预期的200bp大小的片段,其中7例证实有典型t(8;21)或其变异型。扩增片段大小及其限制性内切醇谱提示t(8;21)易位的AML_1和ETO基因断裂点局限于一个内含子。5例M_2已完全经解2~38个月仍检测到相同的AML_1-ETO融合mRNA,提示体内仍残存少量t(8;21)异常克隆。AML_1-ETO融合转录本的检测是诊断和监测t(8;21)AML的有力手段。 相似文献
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转染反义VEGF cDNA抑制K562细胞裸鼠体内生长和肿瘤内血管生成 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 探讨转染反义血管内皮细胞生长因子 (VEGF)cDNA对慢性髓系白血病 (CML)急变细胞株K5 6 2裸鼠体内生长的影响。方法 利用转染反义 (AS)、正义 (S)VEGF1 2 1 cDNA及空载体 (V ,pcDNA3质粒 )的K5 6 2细胞株 ,观察转染细胞在裸鼠体内成瘤及生长情况 ;免疫组化法比较其裸鼠移植瘤微血管密度 (MVD) ;MTT法观察其对骨髓内皮细胞体外增殖的影响。结果 转染反义VEGF1 2 1 cDNA的K5 6 2 AS细胞组的瘤块体积小、生长慢于K5 6 2 V组 [(2 0 7.5± 192 .9)mm3 vs (4 45 .0± 15 0 .9)mm3 ,P <0 0 5 ],而K5 6 2 S组瘤块体积大于K5 6 2 V组 [(1174.6± 5 0 8.7)mm3 vs (4 45 .0± 15 0 .9)mm3 ,P <0 .0 1]。K5 6 2 AS组裸鼠体内肿瘤MVD低于K5 6 2 V组 [(11.0± 7.6 ) 0 .72mm2 vs (18.9± 7.0 ) 0 .72mm2 ,P <0 0 5 ],而K5 6 2 S组则高于K5 6 2 V组 [(5 0 .8± 11.7) 0 .72mm2 vs (18.9± 7.0 ) 0 .72mm2 ,P <0 .0 1]。K5 6 2 AS细胞的培养上清刺激骨髓内皮细胞增殖能力弱于K5 6 2 V ,而K5 6 2 S细胞的结果相反。结论 转染反义VEGF1 2 1 cDNA抑制K5 6 2细胞裸鼠体内肿瘤生长 ,降低裸鼠瘤块内MVD ,对骨髓内皮细胞的刺激增殖作用减弱 相似文献
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成人慢性髓性白血病细胞β1整合素功能障碍的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
为了探讨Ph(+)慢性髓性白血病(CML)骨髓细胞是否存在β1整合素活化障碍,我们以10例正常及12例CML骨髓单个核细胞(NBMMNC及CMLBMMNC)为研究对象,用β1整合素活化抗体8A2和粒巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)作活化剂,用流式细胞术测定上述细胞与可溶性纤连蛋白(FN)的结合能力及其β1整合素跨膜区9EG7表位的表达,并观察了ABL激酶抑制剂CGP57148B预处理对上述细胞β 相似文献
19.
目的:观察混合脐血浆在人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcels,HUVEC)培养中的作用。方法:在含20%(体积分数)混合脐血浆的内皮细胞培养体系中进行HUVEC的原代和传代培养,并对培养细胞进行纯度鉴定。同时用噻唑蓝试验观察不同体积分数的混合脐血浆对HUVEC增殖活力的影响。结果:20%(体积分数)的混合脐血浆对HUVEC培养有明显支持作用,该体系培养的HUVEC经第Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ:Ag)和Ⅰ型荆豆凝集素(UEAⅠ)鉴定纯度可达93.1%。结论:20份混合的脐血浆可以代替内皮细胞生长因子成功地用于HUVEC的培养,以获得高纯度可传代的内皮细胞。 相似文献
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慢性髓性白血病来源的树突状细胞的功能研究 总被引:13,自引:1,他引:12
为研究慢性髓性白血病(CML)来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能,将CML骨髓和外周血单个核细胞在含GM-CSF,IL-4,TNF-α的培养基中培养7-14天。利用流式细胞术对培养细胞进行表型鉴定,通过FITC-DX(FITC标记的葡聚糖)摄入实验,^3H-TdR掺入和MTT实验,以及LDH释放试验,分别检测不成熟DC对外源抗原的摄入能力,成熟DC对外源和内源抗原的呈递能 相似文献