雪芪通肾汤对糖尿病肾病大鼠肾功能及肾脏p38丝裂原活化蛋白激酶mRNA表达的影响

目的探讨雪芪通肾汤对糖尿病肾病大鼠肾功能及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）mRNA表达的影响。方法将46只大鼠随机分为4组，即正常组10只，模型组、贝那普利组和雪芪通肾组各12只。模型组、贝那普利组、雪芪通肾组用采用链脲佐菌素（STZ）造模。造模成功后，各治疗组均给药24周。取动脉血测肾功能，取左侧肾脏，检测p38MAPKmRNA在肾组织中的表达。结果贝那普利组、雪芪通肾组较模型组的血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）均降低（P〈0．01）。雪芪通肾组较正常组Cr无明显变化（P〉0．05）。半定量分析结果表明贝那普利组、雪芪通肾组p38MAPKmRNA的表达比模型组有所降低（P〈0．01），比正常组有所升高（P〈0．01）。结论雪芪通肾汤可降低糖尿病大鼠肾脏p38MAPKmRNA表达，保护肾功能，延缓糖尿病肾病进程。     

RNA干扰抑制马桑内酯诱导的大鼠星形胶质细胞Mdr1基因的表达

目的观察RNA干扰对培养的大鼠星形胶质细胞逆转P-糖蛋白介导的多药耐药现象的影响。方法用短发夹RNA表达载体p-SIREN shuttle质粒转染马桑内酯诱导表达P-糖蛋白的星形胶质细胞，荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定Mdr1 mRNA的表达量，免疫细胞化学方法检测P-糖蛋白表达的变化，流式细胞术检测转染前后细胞罗丹明蓄积外排的变化。结果建立表达P-糖蛋白的星形胶质细胞模型，有效地将p-SIREN shuttle质粒转染该细胞模型。转染后实验组细胞Mdr1 mRNA水平被抑制达67．70％，P-糖蛋白表达明显低于对照组（P〈0．01），实验组P-糖蛋白作用底物罗丹明的细胞外泵出率（23．08％）明显低于对照组（78．35％，P〈0．01）。结论RNA干扰对马桑内酯诱导的星形胶质细胞Mdr1表达有明显抑制作用，并且在很大程度上逆转多药耐药蛋白的耐药作用。     

hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用

目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径.方法 设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTCAGCGTGCTCAACTA,构建重组siRNA表达质粒pGenesil-hTERT,同时构建不针对任何基因的阴性对照重组pGenesiL-HK.两种重组质粒经酶切、电泳分析和测序鉴定后,用脂质体转染法分别转染乳腺癌MCF-7细胞,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测端粒酶活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 酶切电泳测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功.转染pGenesil-hTERT的MCF-7细胞,凝胶电泳见端粒酶特征性条带明显减少,端粒酶活性受到明显抑制pGenesil-hTERT转染细胞后凋亡率较对照组明显升高(P＜0.01),且转染48h凋亡率最高,达54.7%±2.41%.结论 hTERT-siRNA可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性、促进细胞凋亡,此法有望应用于肿瘤基因治疗.     

逆转录病毒介导的c-met-小干扰RNA抑制肝癌转移的体内研究

我们对c-met与肝癌的临床病理因素的关系进行了分析，明确了c-met与肝癌转移有关联。此前也通过逆转录病毒载体介导，成功建立了表达c-met-siRNA的肝癌细胞株MHCC97-H／c-met-siRNA，并证实逆转录病毒载体能长期、稳定表达针对靶基因c-met的siRNA，因此，本研究拟进一步在体内研究c-met-siRNA对肝癌生长、转移的影响，以期为c-met-siRNA应用于临床防治肝癌转移复发提供实验依据。     

短发卡RNA对人胃癌细胞STAT3基因的沉默作用

目的:探讨STAT3基因小发夹RNA（shRNA）表达质粒对胃癌MKN-45细胞STAT3基因的干扰作用。方法:根据STAT3 mRNA 编码序列，设计RNA干扰靶点，构建STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒（psiRNA-H1/STAT3），使用脂质体转染人胃癌细胞系（MKN-45细胞）。实验分为对照（A）组，psiRNA-H1转染（B）组和psiRNA-H1/STAT3转染（C）组。通过RT-PCR和Western Blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响。结果:psiRNA-H1/STAT3经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确，并经测序证实。将其成功转染MKN-45细胞后，该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05)。 结论:将成功构建的针对STAT3基因的shRNA表达载体转染MKN-45细胞，能有效抑制该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达，为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据。     

PRL-3 miRNA重组慢病毒对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用

目的 观察PRL-3在人胃癌SGC7901细胞增殖中的作用.方法 构建表达人工PRL-3 miRNA的慢病毒载体,转染SGC7901细胞,并检测其沉默PRL-3表达的效果;MTT试验评价沉默PRL-3表达对SGC7901细胞增殖的抑制作用.结果 成功构建表达PRL-3慢病毒载体.PRL-3慢病毒转染组,可沉默SGC7901细胞PRL-3的表达.MTT试验结果,沉默PRL-3的表达后,与空载体组比较,SGC7901细胞数下降了30.4%;生长曲线比较,SGC7901细胞的增殖受到明显抑制(P＜0.05).结论 PRL-3在胃癌生长中起着重要作用,可作为胃癌潜在的治疗靶点.     

白细胞介素-12基因修饰对树突状细胞表面分子表达及细胞因子分泌的影响

目的 观察白细胞介素(IL)-12基因修饰对树突状细胞(DC)表面分子及细胞因子分泌的影响.方法 采用重组逆转录病毒介导IL-12基因修饰人外周血单个核细胞(PBMC)来源的Dc;ELISA法检测各组DCs和各组T细胞上清中IL-12、IL-10、IFN-γ因子的分泌水平;流式细胞仪(FACS)分析各组DC表面CD83、CD86的表达;MTT法检测DC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力;统计学分析比较各组间的差异.结果 IL-12基因修饰使得DC高表达CD83和CD86分子,分泌高水平IL-12及IFN-γ,但对IL-10因子的分泌无明显影响,刺激同源T淋巴细胞增殖明显,诱导激活的T细胞上清中IFN-γ水平显著增高、IL-10分泌水平显著降低.结论 经IL-12基因修饰后的DC表型成熟,分泌IL-12及IFN-γ的能力增强,对IL-10因子的分泌无影响,能抑制T细胞分泌IL-10因子,优化抗原提呈的微环境.     

流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基片段的克隆及表达

目的 将流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基进行亚克隆、表达，获得重组的亚克隆多肽，为进一步研究PBl亚基功能奠定基础。方法 以FB1亚基cDNA为模板，用PCR方法扩增出PB1-1片段，应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pQE30重组，阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定，IPTG诱导各亚克隆系高效表达；优化表达条件。结果 PCR法扩增出487bp的片段，酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒，在E．coli M15中表达得到相对分子量约为20KD的重组蛋白，获得蚕组多肽。结论 成功地亚克降及表达了流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基。     

沉默树突状细胞恒定链以增强其抗肿瘤作用的体外实验研究

目的初步观察用小分子干扰RNA(siRNA)沉默树突状细胞(DCs)恒定链(Ii)后,DCs疫苗的体外抗肿瘤效果。方法从小鼠骨髓分离骨髓前体细胞,细胞经100 ng/ml GM-CSF和100 ng/ml IL-4诱导培养6 d后,转染针对DCs Ii链特异的Ii-siRNA,转染后加用50 ng/ml TNF-α继续诱导细胞成熟48 h,然后分别用Western blot检测沉默效果及CCK-8试剂盒检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;此外,DCs共转染Ii-siRNA和小鼠胃癌前体细胞MFC的总RNA后,与同种异体淋巴细胞共培养,通过ELISA检测培养上清IFN-γ/和IL-4的水平,并收集致敏淋巴细胞进行体外杀伤实验。结果Ii-siRNA明显抑制DCs Ii的表达。沉默Ii链能够增强DCs的淋巴细胞增殖能力,并促使淋巴细胞向Th1的方向漂移[IFN-γ:(5107±351)pg/ml,IL-4:(65±13)pg/ml,P＜0．05]。淋巴细胞经共转染Ii-siRNA和MFC RNA的DCs激活后,明显而特异地杀伤靶肿瘤细胞(杀伤百分率: 66．94%±2．75%,P＜0．05)。结论通过siRNA沉默DCs的Ii链可能是一种行之有效的增强抗肿瘤免疫的方法。     

乙型肝炎治疗研究进展

乙性肝炎病毒感染所导致的慢性肝炎是我国的一个大问题,给患者及社会带来了很大负担。慢性乙型肝炎现行治疗主要依靠干扰素、核苷类似物等,其存在高耐药、低耐受以及不良反应等问题。新的、更为安全有效的治疗药物及方法亟待发展。最近,科学家们发现人体内的TRIM22分子对抑制乙肝病毒的复制起到重要作用,为乙肝的治疗及有效药物的研发开辟了新的道路。