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pCDM8-GFP报告载体的构建及鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
1 实验资料 pDM 8 PBLcDNA文库由Jackson博士惠赠 ,pEGFP N3真核表达载体购自Clontech公司 .NotI、HindⅢ和T4DNA连接酶购自大连宝生物公司 .COS7细胞为本室冻存。pCDM8 GFP载体的构建方法参照文献 .提取 pCDM8 X(X表示载体中插入的未知cDNA片段 )和 pEGFP N3质粒 ,分别用NotI和HindⅢ进行双酶切 ,回收酶切片段 ,用T4连接酶进行连接 ,转化感受态宿主菌。挑单菌落培养 ,提取质粒用NotI和HindⅢ双酶切进行阳性克隆鉴定 .提取重组pCDM8 GFP载… 相似文献
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目的探讨声敏剂血卟啉衍生物在肿瘤组织中的富集情况,以便在给药后超声结合血卟啉治疗肿瘤时选择最佳的超声处理时间。方法H-22肝癌荷瘤小鼠尾静脉注射HpD后,不同时间点取材,采用荧光分光光度法测定不同组织提取液中HpD的荧光强度,研究HpD在不同组织中的分布以及代谢变化。结果给药后2 h肿瘤组织以外的其他各组织内(血浆、肝、肾、皮肤、肌肉)血卟啉含量均达到其代谢过程的最高点,后逐渐下降;肿瘤组织中的HpD含量注射后不断上升,6 h时达到顶峰,随后又开始下降,10~24 h代谢比较缓慢,表现为肿瘤组织中对HpD的滞留作用,24 h时肿瘤组织中的HpD含量高于其他各组织,48~72 h趋于稳定在较低水平。结论提出了不同部位的肿瘤应选择各自适当的时间点进行超声处理。 相似文献
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目的:建立骨钙素酶免疫测定方法,并应用于临床检测血清骨钙素。方法:应用了3种检测模式,根据检测灵敏度、剂量反应曲线的形态进行分析,选择出合适的模式进一步应用于临床血清标本的骨钙素检测。结果:所采用的骨钙素单克隆抗体是钙离子依赖型的。固相抗原竞争法适合于临床定量测定骨钙素。最低可测限为1.4μg/L;20μg/L骨钙素样品批内CV=3.98%,批间CV=12.67%。测定正常献血员140名(年龄17-45岁),第5-95百分位点的骨钙素含量,男性为7.5-15.0μg/L女性为7.0-17.5μg/L。70例疑有骨质疏松症患者血清骨钙素含量2.91-30.20μg/L,以第95百分位点的骨钙素含量为cut-off值,升高5例。与进口试剂盒(Novocalcin,USA)相比较,有较好的相关性,r=0.81。结论:固相抗原竞争法酶免疫测定可以灵敏地检测血清中骨钙素含量,有实用价值。 相似文献
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本文以间接免疫萤光法测定96例淋巴细胞恶性患者血清中抗人T细胞白血病病毒Ⅰ型(HTLV—1)抗体。其中,80例急性淋巴细胞白血病;12例非何杰金氏淋巴瘤;4例慢性淋巴细胞白血病。发现一例成人抗HTLV—1抗体阳性,抗体滴度1:80,阳性率1.04%。並在培养细胞中检出HTLV—1抗原阳性细胞,前后两次阳性率分别为1.7~1.5%(P>0.05)。确诊病人已感染本病毒,提示HTLV—1已传入江西。认为测定HTLV—1抗原比抗体更重要,可用于早期确诊及游行病学调查。 相似文献
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Survivin转录变异体在胃癌组织中的表达及其与预后的关系 总被引:2,自引:0,他引:2
目的研究survivin各转录变异体在胃癌组织中的表达情况及与其预后的关系。方法采用实时荧光定量RT-PCR技术,对77例胃恶性肿瘤患者的肿瘤组织、正常胃黏膜的成对标本进行mRNA定量检测。结果在检测患者肿瘤组织中野生型survivin、survivin-2B与survivin-△Ex3的表达量均显著高于其对应正常胃黏膜组织中的表达量(P<0.01)。在胃癌组织中,survivin的表达率为100%(77/77),survivin-2B的表达率为79.8%(61/77),survivin-△Ex3的表达率为64.9%(50/77)。survivin高表达组患者的生存率明显低于低表达组(P<0.01)。结论Survivin的3个转录变异体中,野生型survivin对胃癌患者预后具有重要的评估价值。 相似文献
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环缩酚肽抑制视网膜表达VEGF及PECAM基因和血管增生 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]观察两种环缩酚肽衍生物(Hep-A和Hep-B)对氧诱导的小鼠视网膜表达血管内皮生长因子(VEGF)和细胞黏附分子(PECAM;ICAM-1;VCAM-1)基因的影响及血管增生的变化.[方法]建立氧诱导的血管增殖性视网膜病变模型,12 d开始给小鼠皮下注安慰剂(第1组,n=7)、Hep-A 10 mg/kg(第2组,n=6)或者Hep-B 10 mg/kg(第3组,n=6),每天两次.5 d后取出左侧眼,分离视网膜并抽提RNA,用荧光定量PCR测出上述基因含量,并分别求出每个靶基因与标准基因S16含量的比率;右眼经心脏荧光素灌注后取眼球做视网膜平铺片,用图像分析软件定量计算视网膜新生血管的面积.[结果]视网膜中VEGF/S16的mRNA比率为:第1组(0.554±0.050),第2组(0.355±0.037),第3组(0.287±0.051);PECAM/S16为:第1组(2.050±0.249),第2组(1.228±0.153),第3组(1.027±0.210).经ANOVA分析,第2组和第3组分别与第1组比较,视网膜中VEGF基因表达分别减少36%和48.2%(P=0.001);PECAM基因表达分别减少40.1%(P<0.05)和49.9%(P<0.01);而VCAM-1和ICAM-1表达无明显差异.视网膜平片检测视网膜新生血管面积:第1组为(1.06±0.03)mm2/眼,第2组为(0.17±0.01)mm2/眼,第3组为(0.11±0.01)mm2/眼;经ANOVA分析,第2组和第3组分别与第1组比较,视网膜新生血管的面积明显减少(P<0.001).[结论]两种环缩酚肽衍生物均抑制氧诱导的小鼠视网膜表达VEGF和PECAM基因,并抑制其形成视网膜新生血管. 相似文献
90.
目的介绍实验性骨折愈合研究中活体顺序性荧光标记的技术与方法。方法以成年兔胫骨骨折外固定为模型,术后分别以Tetracydin(TC,黄色,25mg/kg)、Calcein(CG,绿色,10mg/kg)、Xylenal(XO,桔色,90mg/kg)、Alizarin—complen(AE,红色,30mg/kg)四种荧光染料于兔颈部皮下定期注射;并于术后第3、6、12及24周活杀动物,解剖出胫骨,梯度乙醇脱水、脱脂,甲基丙烯酸甲脂包埋,切片厚度40~100μm,打磨,荧光显微镜下观察、摄像;同时通过组织学观察、X线摄片了解骨愈合速度与质量。结果顺序性荧光标记显示,加压组中钙化的内、外骨痴均于术后第2周出现于截骨处的远、近断端,但尚未形成骨性连接。亦无骨皮质的改建。外骨痴增生停止于术后12周,且骨皮质的改建至12周已渐减少.至术后24周已基本完成;对照组:内骨痴于术后第3周出现于截骨处远、近断端,无钙化的外骨痴形成,亦无骨皮质的改建;外骨痂增生停止于术后12周,骨皮质改建至24周尚未完成,其结果与组织学观察、X线摄片具有一致性。结论活体顺序性荧光标记技术可以从细胞水平判断新骨的开始时间、骨生长速度及生长方向,并能节约实验动物数量,是实验性骨折愈合研究中较为理想的研究手段。 相似文献