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81.
人牙髓干细胞诱导后人牙本质基质蛋白1基因转录活性的变化和意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,HDPSC)经矿化液诱导后牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)的表达、细胞生物学变化以及对人DMP1基因启动子转录活性的影响。方法:通过建立体外培养的HDPSC体外矿化诱导模型,运用RT-PCR、组织染色等方法检测矿化诱导后细胞DMP1 mRNA表达、细胞形态和矿化能力的变化以及对两个DMP1基因启动子重组报告基因载体pGL3-P-193~ 86和pGL3-P-505~ 86活性的影响。结果:HDPSC经矿化液诱导后,能够向成牙本质细胞方向分化,出现成牙本质细胞样细胞表型。与对照组相比较,随着诱导时间的延长,细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性增强,较早的出现了矿化结节,说明在诱导液作用后细胞矿化能力升高。诱导后的细胞出现了DMP1 mRNA表达水平增高,pGL3-P-193~ 86和pGL3-P-505~ 86活性均出现增强的趋势,尤其以pGL3-P-505~ 86活性增强更明显。结论:矿化液可诱导HDPSC向成牙本质细胞方向分化,诱导后的细胞矿化能力增强,DMP1表达和转录活性也随之增强,提示DMP1可能参与成牙本质细胞的分化过程。 相似文献
82.
小鼠牙本质涎磷蛋白5′端非编码区启动子报告基因载体的构建和分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphopmtein,DSPP)基因启动子,构建含DSPP启动子不同片段的报告基因载体,在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析各种载体中DSPP启动子活性:方法:PCR、报告基因载体构建、瞬时转染和报告基因检测。结果:PCR获得DSPP启动子的3个不同片段,将它们克隆到萤火虫荧光素酶报告基因载体pG13-Enhancer,构建出3种含DSPP启动子不同片段的报告基因载体,将这些报告基因载体瞬时转染至MDPC-23细胞,载体中的启动子具有不同的活性。结论:成功构建了含小鼠DSPP启动子片段的报告基因载体,为以后研究DSPP基因表达调控的分子机制提供了实验工具。 相似文献
83.
报告基因技术是指通过把转录控制元件剪接到报告基因,从而报告细胞内与基因表达有关的信号级联,被广泛应用于检测细胞信号传导和基因表达.伴随激光共聚焦显微镜、荧光共振能量转移技术等观察成像技术的进步,绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白等新报告基因的应用,为生物膜胞间信号传递及基因表达变化的研究提供了新的途径. 相似文献
84.
目的:构建尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)启动子区的双荧光素酶报告质粒并检测其活性,从而验证SND1蛋白对NNMT基因的调控作用。方法:根据NNMT基因启动子区上、下游-1 500至+200区间的序列设计引物,并以HepG2细胞提取的RNA逆转录得到cDNA为模板进行PCR扩增,得到的NNMT启动子区片段经酶切后连接到双荧光素报告载体GLuc-ONTM启动子报告克隆中,得到Gluc-NNMT 启动子重组质粒,分别与pLVX-IRES-Puro-Flag-SND1质粒和pLVX-IRES-Puro-vector质粒共同转染HeLa细胞,并检测启动子活性。然后用免疫共沉淀的方法验证NNMT蛋白是否与SND1蛋白之间存在相互作用。结果:重组质粒构建成功。双荧光素酶活性实验显示,共转染Gluc-NNMT启动子重组质粒和pLVX-IRES-Puro-Flag-SND1过表达质粒的实验组与对照组相比,NNMT启动子区活性明显增强。结合免疫共沉淀实验结果,证明NNMT与SND1存在相互作用。结论:成功构建了NNMT启动子双荧光素酶报告质粒,SND1对NNMT启动子活性有增强作用,SND1与NNMT蛋白之间存在相互作用。 相似文献
85.
目的通过构建RASAL2 3′-非翻译区(3′-UTR)双荧光素酶报告载体,探索RASAL2与非编码核糖核酸(ncRNA)miR-1290的靶向调控情况。方法借助在线数据库Targetscan预测miR-1290与RASAL2结合位点;利用聚合酶链反应(PCR)技术扩增RASAL2基因3′-UTR序列,并以GV272为载体将其连接,分别构建野生型GV272-RASAL2-wt 3′-UTR和突变型GV272-RASAL2-mut 3′-UTR荧光素酶报告基因重组质粒;并将miR-1290及相应阴性对照分别与这两种重组质粒共转染到293T细胞中,通过检测各组荧光素酶活性,探索miR-1290与RASAL2基因的结合情况。结果酶切和测序数据表明:野生型GV272-RASAL2-wt 3′-UTR及突变型GV272-RASAL2-mut 3′-UTR双荧光素酶报告载体构建成功;相较于miR-1290与突变型GV272-RASAL2-mut 3′-UTR共转染组,miR-1290与野生型GV272-RASAL2-wt 3′-UTR共转染组的荧光素酶活性无明显变化(P>0.05)。结论成功构建了RASAL2 3′-UTR的双荧光素酶报告基因载体,但miR-1290不能与RASAL2结合,不能抑制其表达。 相似文献
86.
《中国药理学通报》2016,(9)
目的研究人参皂苷Rc、Re、Rf和Rg1能否激活h AhR受体信号通路诱导CYP1A1基因及蛋白表达。方法利用前期实验室构建的p GL4.17-CYP1A1报告基因质粒、pc DNA3.1-h AhR表达质粒与pRL-TK内参质粒共转染Hep G2细胞,检测人参皂苷Rc、Re、Rf和Rg1对AhR的转录激活效应;并利用Real-time PCR及Western blot技术对人参皂苷Rc、Re、Rf和Rg1的不同浓度、不同时间处理组进行mRNA及蛋白的检测。结果报告基因模型检测结果显示,人参皂苷Rc、Re、Rf和Rg1对AhR具有转录激活作用,其中人参皂苷Re与Rf对AhR转录激活效应明显;同时不同浓度人参皂苷Rc、Re、Rf和Rg1均能上调CYP1A1 mRNA与蛋白表达水平。结论人参皂苷Rc、Re、Rf和Rg1可以诱导CYP1A1mRNA与蛋白质水平的表达,这种诱导作用可能与上述皂苷成分激活AhR并提高其对CYP1A1的转录活性有关。 相似文献
87.
88.
心肌梗死干细胞移植疗法是一种新兴的治疗手段。通过干细胞的定向分化、旁分泌等机制促进坏死心肌组织修复和心肌细胞再生,改善心脏功能。磁共振成像不仅可以观察心脏解剖结构的改变,还能通过标记磁性对比剂或MRI报告基因的方法对干细胞移植后的定位、迁移、存活及增殖等情况进行示踪。本文就干细胞移植MRI示踪及其在急性心肌梗死治疗中的应用进行综述。 相似文献
89.
补阳还五汤对内皮型eNOS启动子活性的影响 总被引:13,自引:0,他引:13
目的:研究补阳还五汤含药血清对人内皮型一氧化氮合酶(eNOS)启动子活性的影响。方法:基因亚克隆方法构建pGL2 eNOS和pEGFP- 1 -eNOS质粒载体;应用jetPEITM转染内皮细胞ECV304,分别用HTS7000生化分析仪和荧光显微镜观察报告基因的表达。结果:含补阳还五汤及黄芪的血清均能增强 pEGFP -1- eNOS转染的内皮细胞的绿色荧光蛋白的表达,并能增强转染 pGL2- eNOS荧光素酶的表达。结论:补阳还五汤和黄芪可能通过增强内皮型eNOS启动子的活性、延缓内皮功能障碍的发生以防治动脉粥样硬化。 相似文献
90.
帕金森病(Parkinson′s disease,PD)是一种中枢神经系统变性疾病,在老年人中其发病率和致残率均较高,且近年来PD的发病年龄呈年轻化趋势。该病的特征性病理表现主要为中脑黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元胞质中路易小体(Lewy body)的形成、DA能神经元变性及残存神经元合成DA能力下降所致纹状体DA缺乏和胶质细胞增生。患者的典型临床症状包括静止性震颤、运动迟缓、肌张力增高和姿势性 相似文献