小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞增殖、凋亡以及组织非特异性碱性磷酸酶的表达

目的:观察小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞的增殖、凋亡和其组织非特异性碱性磷酸酶(tissue nonspecific alkaline phosphatase,TNSALP)的表达,探讨中间层在釉质形成过程中的可能作用.方法:取出生后1、3、5、7、9、11、15d的BALB/c小鼠56只,解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,脱钙,制片,HE染色进行牙釉质发育情况的组织学观察,分别采用原位末端标记法(TUNEL法)、SP免疫组织化学技术、PV二步法观察中间层细胞的凋亡及检测Bcl-2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),并对TNSALP进行组织学定位.通过Image-pro plus 6.0图像分析软件.对图像进行半定量分析.采用SPSS13.0软件包进行t检验、单因素方差分析及SNK-q检验.结果:出生后1d.中间层细胞增殖细胞核抗原由比成釉细胞表达高的强阳性表达逐渐降低;至7d时,其表达为阴性,而且中间层细胞随釉质的发育逐渐凋亡.中间层细胞先于成釉细胞表达TNSALP,出生后5d时即呈现强阳性染色,而后其表达又逐步减弱;成釉细胞7d时开始出现阳性,且呈逐渐增强趋势.结论:中间层细胞的增殖和凋亡及其TNSALP的表达与成釉细胞具有相关性,提示中间层细胞有可能参与成釉细胞的分化及釉质形成.     

细胞角蛋白14在牙齿软组织萌出通道中的组织学定位

目的牙齿萌出时,源于成釉器的缩余釉上皮与口腔上皮细胞融合为上皮团形成牙齿的软组织萌出通道,本研究对细胞角蛋白14在这一过程中的表达进行组织学定位,从而探讨其可能作用。方法不同发育期SPF级BALB/c小鼠9只。循环内固定后分别双侧下颌骨10%EDTA脱钙30d,常规脱水包埋,近远中向5μm连续切片,行苏木精-伊红和免疫组化染色。PV免疫组化两步法检测细胞角蛋白14和细胞增殖核抗原在各组织的表达。结果牙齿萌出过程中口腔上皮对细胞角蛋白14呈现时空特异性表达,非牙齿萌出部位的口腔上皮仅基底层阳性表达细胞角蛋白14,而萌出牙齿冠方的口腔上皮阳性表达则较广泛;缩余釉上皮在牙齿萌出过程中始终阳性表达细胞角蛋白14,而且伴随缩余釉上皮和口腔上皮融合的发生,缩余釉上皮的外层细胞和口腔上皮的基底层和基底上层细胞呈现细胞角蛋白14强阳性表达。结论细胞角蛋白14与牙齿萌出软组织通道的形成密切相关,可作为缩余釉上皮相关研究的上皮性标记物。     

报告基因及其在生物膜研究中的应用

报告基因技术是指通过把转录控制元件剪接到报告基因,从而报告细胞内与基因表达有关的信号级联,被广泛应用于检测细胞信号传导和基因表达.伴随激光共聚焦显微镜、荧光共振能量转移技术等观察成像技术的进步,绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白等新报告基因的应用,为生物膜胞间信号传递及基因表达变化的研究提供了新的途径.     

增殖细胞核抗原在小鼠牙胚后期发育中的表达

目的:探讨增殖细胞核抗原在小鼠牙胚发育后期中的表达及作用。方法:制备出生后BALB/C小鼠牙胚发育各阶段石蜡标本,采用SP免疫组化法观察增殖细胞核抗原在牙冠发育及牙周组织发育过程中的表达。结果:在釉质形成早期,中间层细胞、成釉细胞均呈PCNA阳性表达,且两者在同期表达强弱程度上具有一致性;随着牙冠发育的完成,PCNA的表达减弱;出生后第5天,内外釉上皮融合增殖形成上皮根鞘,牙根开始发育,此时上皮根鞘细胞呈PCNA强阳性表达,牙囊组织亦呈现阳性表达,随着牙周组织的发育和重塑的完成,PCNA在各组织的表达逐渐减弱。结论:细胞增殖是牙齿正常发育所必需的重要调控机制,特别是在釉质形成及牙根形成的过程中,具有重要的作用,提示PCNA可能是组织发生的初始标志物之一。     

上皮根鞘细胞在牙骨质发育中的作用

目的：观察牙根发育中上皮根鞘细胞（Hertwig＇s epithelial root sheath,HERS）断裂后结局和增殖凋亡相关基因的表达,探讨上皮根鞘在牙根发育特别是牙骨质形成中的可能作用.方法：用TUNEL（ TdT- mediated - dUTP nick end labeling , TUNEL） 法原位细胞凋亡检测牙根发育中上皮根鞘细胞凋亡的情况.以细胞角蛋白14（cytokeratin 14）标记上皮根鞘细胞,追踪其断裂后结局.SP免疫组化法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA ）和凋亡抑制基因Bcl-2在上皮根鞘细胞的表达.结果：牙冠形成后,内外釉上皮结合增殖形成HERS,此时呈PCNA表达阳性;牙根发育开始后,HERS呈Bcl-2阴性表达,在少量牙本质基质形成处,上皮根鞘细胞开始呈TUNEL阳性表达,之后HERS断裂,在其外侧可见成牙骨质细胞的形成,断裂的HERS细胞部分转入牙周膜形成上皮剩余（the epithelial rest of Malassez）,而细胞牙骨质形成中可见部分埋入细胞呈CK14阳性表达.结论： HERS细胞的凋亡可能会为成牙骨质细胞分化提供信号,部分HERS细胞可能参与牙骨质的形成.     

牙周基础治疗对慢性牙周炎合并2型糖尿病患者血糖水平的影响

目的探讨牙周炎基础治疗对伴发2型糖尿病的慢性牙周炎患者血糖水平的影响。方法选择伴发2型糖尿病的慢性牙周炎患者(观察组)和无糖尿病背景的慢性牙周炎患者(对照组)各32例,观察两组牙周炎基础治疗前后牙龈出血指数(SBI)、牙周探诊深度(PD)及血糖的变化。结果两组在牙周基础治疗后SBI、PD较治疗前均有明显下降(P均<0.05),治疗后两组间SBI、PD比较亦有统计学差异(P均<0.05)。伴发2型糖尿病的慢性牙周炎患者治疗后血糖水平降低,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05);不同程度牙周炎患者血糖水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论牙周基础治疗可有效降低伴发2型糖尿病的慢性牙周炎患者的血糖水平。     

超声荡洗减轻根管治疗术后疼痛的效果评价

目的评价根管超声荡洗对根管治疗术后疼痛程度的影响。方法临床选取需根管治疗磨牙240例,其中牙髓炎病例120例(A组),牙髓坏死及慢性根尖周炎病例120例(B组)。A、B两组各随机取60例超声荡洗(记为A1、B1),两组中另外各60例常规冲洗(记为A2、B2),比较术后疗效。结果超声根管组A1和B1术后效果优于常规冲洗组A2和B2(P<0.05)。A1和B1组未见差异无统计学意义(P>0.05)。牙髓坏死及慢性根尖周炎病例的B2组与A2组差异有统计学意义(P<0.05)。结论根管超声荡洗可明显缓解根管治疗治疗术后疼痛程度。     

细胞凋亡在小鼠牙釉质形成中的作用

目的检测小鼠牙釉质形成过程中成釉细胞的凋亡及调控基因Bcl-2的表达,探讨细胞凋亡在釉质形成过程中的作用。方法制备出生后3、5、9及15 d发育阶段的BALB/C小鼠牙胚的石蜡标本,采用原位末端标记法(TUNEL法)及SP免疫组织化学技术,观察成釉细胞分化各阶段细胞凋亡及Bcl-2的表达情况。结果凋亡在分化各期的成釉细胞中皆有表达,在成熟期表达增强,近颈环处处于分泌前期及分泌期的成釉细胞Bcl-2表达阳性,而在冠方尤其牙尖处的成釉细胞中则表达下调或消失。结论细胞凋亡在釉质形成的过程中起到一定的作用,Bcl-2作为凋亡抑制基因参与了成釉细胞的增殖与凋亡的调控。     

Bcl-2在成釉细胞分化、分泌过程中的表达研究

目的:检测凋亡调控抑制蛋白Bcl-2在成釉细胞分化、分泌过程中的表达,观察细胞超微结构的变化,探讨Bcl-2和细胞凋亡在该过程的可能作用。方法:制备出生后2、5、7、9、14 d不同发育阶段的BALB/C小鼠下颌第一磨牙牙胚标本,采用原位末端标记法(TUNEL法)和PV免疫组织化学技术观察成釉细胞分化、分泌和釉质发育完成各阶段细胞凋亡以及Bcl-2的表达情况;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:出生后第2～5天,小鼠下颌第一磨牙成釉细胞处于分化期,超微结构可见胞浆内有高尔基复合体和线粒体,并有细胞增生的核分裂;免疫组化结果显示Bcl-2阳性表达,TUNEL检测结果发现部分细胞胞核阳性表达,提示细胞凋亡的存在;出生后第7天,成釉细胞已开始分泌,可见新形成的釉质,胞核远基底排列,胞核附近可见大量线粒体,胞质内可见大量高尔基复合体和粗面内质网,胞浆呈Bcl-2强阳性表达,TUNEL检测结果发现少量细胞胞核阳性表达;出生后14 d,釉质发育完成,成釉细胞变短,间隙变大,细胞器数量减少,核膜逐渐不清,核糖体脱颗粒水肿,呈现凋亡征象,胞浆未见Bcl-2阳性表达。结论:细胞凋亡在釉质发育的各期皆有表达,Bcl-2作为凋亡抑制基因可能参与了成釉细胞的分化、分泌的调控。     

不同吸烟程度对牙龈上皮凋亡抑制蛋白表达的影响

目的观察不同程度吸烟患者的凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达情况。方法选择37名行牙龈切除、拔除智齿及牙冠延长术的患者,年龄21～65岁,男34例,女3例。按照吸烟史分为Ⅰ组(吸烟史<6年,日均支数<11支)17例,Ⅱ组(吸烟史≥6年,日均支数≥11支)20例。选7例健康牙龈作为对照组。牙龈标本制作石蜡切片,行组织学观察。采用SP免疫组化法对凋亡抑制基因Bcl-2的表达进行组织定位。石蜡切片脱蜡、水化至水,按照SP免疫组化说明书步骤操作,常规脱水封片后行组织学观察。Bcl-2的阳性表达呈棕黄色,阴性为蓝色。PBS作阴性对照。结果 Bcl-2阳性表达主要分布在颗粒层和棘层,胞质呈棕黄或褐色,越接近基底层表达越强。吸烟组Bcl-2的在颗粒层和棘层的阳性表达细胞数较对照组减少且着色变浅,基底层细胞则都为阴性表达。凋亡阳性表达的细胞胞核呈棕黄褐色。对照组较吸烟组阳性表达弱,胞核着色轻。对照棘层和基底层的细胞凋亡阳性表达率分别为0.431和0.672,低于各吸烟组的平均水平。吸烟组牙龈上皮基底层及棘层细胞的阳性表达与对照组间具有显著性差异(P<0.05);吸烟Ⅰ组与吸烟Ⅱ组也存在显著性差异(P<0.05)。结论吸烟可导致牙龈Bcl-2基因的表达降低。