脑泰方治疗气虚血瘀证脑梗塞临床研究

目的：观察脑泰方治疗气虚血瘀证脑梗塞疗效。方法：72例经确诊的气虚血瘀证脑梗塞患者随机分为2组,每组各36例,治疗组和对照组在常规方法治疗基础上分别口服或鼻饲脑泰方和尼莫地平,结果：治疗3周后,治疗组在愈显率,临床神经功能减少百分率均明显高于对照组（P＜0．05或＜0．01）,且在改善临床症状及血液流变学方面亦优于对照组（P＜0．05或＜0．01）。结论：脑泰方对气虚血瘀证脑梗塞有良好的治疗作用,临床疗效优于尼莫地平。     

Extract of Naotaifang,a compound Chinese herbal medicine,protects neuron ferroptosis induced by acute cerebral ischemia in rats

ObjectiveOur previous research showed that Naotaifang (a compound traditional Chinese herbal medicine) extract (NTE) has clinically beneficial effects on neurological improvement of patients with acute cerebral ischemia. In this study, we investigated whether NTE protected acute brain injury in rats and whether its effects on ferroptosis could be linked to the dysfunction of glutathione peroxidase 4 (GPX4) and iron metabolism.MethodsWe established an acute brain injury model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats, in which we could observe the accumulation of iron in neurons, as detected by Perl’s staining. Using assay kits, we measured expression levels of ferroptosis biomarkers, such as iron, glutathione (GSH), reactive oxygen species (ROS) and malonaldehyde (MDA); further the expression levels of transferrin receptor 1 (TFR1), divalent metal transporter 1 (DMT1), solute carrier family 7 member 11 (SLC7A11) and GPX4 were determined using immunohistochemical analysis, real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot assays.ResultsWe found that treatment with NTE reduced the expression levels of TFR1 and DMT1, reduced ROS, MDA and iron accumulation and reduced neurobehavioral scores, relative to untreated MCAO rats. Treatment with NTE increased the expression levels of SLC7A11, GPX4 and GSH, and the number of Nissl bodies in the MCAO rats.ConclusionTaken together, our data suggest that acute cerebral ischemia induces neuronal ferroptosis and the effects of treating MCAO rats with NTE involved inhibition of ferroptosis through the TFR1/DMT1 and SCL7A11/GPX4 pathways.     

基于网络药理学和分子对接的脑泰方防治高血压脑小血管病作用机制研究＊

目的 运用网络药理学和分子对接方法，探讨脑泰方防治高血压脑小血管病（Hypertensive cerebral small vessel disease， HT-CSVD）的作用机制。方法 首先，利用中医药数据库及分析平台（TSMSP）、中药分子机制的生物信息学分析工具（BATMAN-TCM）与中医药资料库@Taiwan，并结合相关文献筛选脑泰方的主要有效活性成分，再经PubChem数据库与Swiss Target Prediction数据库预测其潜在靶点。其次，通过Genecards与在线人类孟德尔遗传（OMIM）数据库分别筛选出高血压和脑小血管病相关靶点，其交集靶点作为HT-CSVD的相关靶点。再次，利用Cytoscape 3.7.2软件构建“脑泰方-成分- HT-CSVD -靶点”网络可视化关系图，并基于蛋白互作（PPI）网络分析数据库，确立脑泰方和HT-CSVD 的PPI网络。最后，利用基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库对靶点进行富集分析；利用分子对接进行对接反向验证。结果 脑泰方4味中药中有40种有效成分和804个预测靶点，393个潜在靶点可作用于HT-CSVD；脑泰方防治HT-CSVD的作用通路涉及细胞对氮化合物的反应、神经活性配体-受体互作等；在脑泰方药物的主要成分中，化合物西加小冠花苷（hyrcanoside）与表皮生长因子受体（EGFR）的结合度最高。结论 本研究初步揭示了脑泰方防治HT-CSVD的主要活性成分、作用靶点和相关通路，为后续进一步探讨脑泰方靶向防治HT-CSVD提供了新思路。但本研究的分子机制探析存在一定的局限性，仍需细胞、动物、和分子层面的实验验证，从而为脑泰方防治HT-CSVD的临床和基础研究提供更为充分、完善的证据。     

加味脑泰方对去势脑缺血大鼠脑损伤的影响与雌激素水平相关性研究

目的探讨加味脑泰方对去势脑缺血大鼠脑梗死面积、脑组织病理学变化与血清雌激素水平的影响,分析脑梗死面积与雌激素水平的相关性。方法随机将SD大鼠分为假手术组、去势组、脑缺血组、模型组、药物组(雌激素组、加味脑泰方低、中、高剂量组)。去势组、模型组、药物组大鼠制备去势模型,去卵巢术后11d,药物组给予药物灌胃3 d,然后模型组、脑缺血组、药物组大鼠制备局灶性脑缺血模型,24 h后取材,检测血清雌激素水平,TTC染色测量脑梗死面积,HE染色观察脑组织病理学变化情况。结果与脑缺血组比较,模型组大鼠脑梗死面积明显增大、雌激素水平更低,皮质和海马细胞坏死、核固缩更明显;与模型组比较,药物组干预后脑梗死面积减少,雌激素水平升高,尤其加味脑泰方高剂量组和雌激素组,雌激素、加味脑泰方中、高剂量组细胞形态明显改善;脑梗死面积与雌激素水平呈负相关。结论加味脑泰方可减轻去势脑缺血大鼠的脑损伤,可能与提高其雌激素水平相关。     

Effect of Naotaifang(脑泰方)Extract on Changes of Coagulation in Human Umbilical Cord Vein Endothelial Cell and Fibrinolysis Function Induced by Recombinant Human Tumor Necrosis Factor-α

Objective: To observe the changes of coagulation and fibrinolysis function in human umbilical cord vein endothelial cells (HUVEC) induced by recombinant human tumor necrosis factor-α (rh TNF-α) and the effect of Naotaifang extract(脑泰方，NTE) on it. Methods: Cultured HUVEC is randomly divided into six groups: Control group, NTE control group (only 2 g/L NTE), rhTNF-α group (100μg/L rhTNF-α), and low-dosage, middle-dosage and high-dosage NTE group (100 μg/L rhTNF-α and 0.67g/L, 2 g/L, 6 g/L NTE). The coagulation activity of frozen-dissolved HUVEC, yon Willebrand factor (vWF) content in the conditioned medium and tissue-type plasminogen activator (tPA) and plasminogen activator inhibitor (PAI) activity were to be detected after 24 hrs. Results: Compared with the control group, PAI activity were enhanced, vWF release markedly increased in conditioned medium of TNF-αgroup (P＜0. 01) and the frozen-dissolved HUVEC markedly shortens the rabbit plasma prothrombin time, and the above changes could be significantly inhibited by the 3 dosages of NTE (P＜0. 05, P＜0.01). Conclusion; NTE is effective in inhibiting the coagulation activity of the HUVEC non-stimulated or stimulated by rhTNF-α to enhance the vWF release, and to adjust fibrinolytic function, and mainly to inhibit the PAI activity.     

脑泰方提取物抗肿瘤坏死因子诱导人脐静脉内皮细胞损伤的研究

目的观察肿瘤坏死因子α(TNF α)对培养的人脐静脉内皮细胞的损伤作用及中药脑泰方提取物(NTE)的保护作用。方法将融合生长人脐静脉内皮细胞 (HUEC)随机分为空白对照组、TNF α组、NTE对照组和NTE高、中、低剂量组 ,观察 1 0 0ng/ml的TNF α作用 2 4h后内皮细胞显微形态的改变及培养液中血管性假血友病因子 (vWF)含量。结果TNF α作用后细胞形态发生显著变化 ,相差显微镜及普通光镜下主要表现为较多细胞收缩成圆形固缩状 ,细胞间隙变宽 ,甚至发生脱落并出现异常颗粒 ;部分细胞纵轴拉长 ,横轴缩小 ,表现为成纤维细胞型外观 ,培养液中vWF含量显著升高 (P <0 .0 1 ) ;NTE高剂量组、中剂量组细胞拉长 ,细胞间隙略增宽 ,但细胞及核边界尚清楚 ,形态较规则 ,与TNF组比较 ,圆形固缩状细胞数目减少 ,vWF含量明显降低 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ;单独添加中剂量NTE 2 4h后细胞形态和生长状况及vWF含量与空白对照组无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论一定剂量的NTE对TNF α诱导的HUEC损伤有较好的保护作用。     

脑泰方对脑缺血再灌注大鼠血管新生作用的实验研究

目的 观察脑泰方对脑缺血再灌注大鼠血管新生的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤组（模型组）和脑泰方（NTE）组,采用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型,模型组和NTE组再分为再灌注1、3、5、7d4个时相亚组,观察各组大鼠神经功能缺失计分、脑梗死体积、脑微血管密度（CMVD）的表达。结果①神经功能缺失计分：假手术组大鼠神经功能缺失计分均为0分;1d至7d时NTE组和模型组评分均下降：3d时NTE组与假手术组比较无统计学意义（P＞0．05）;7d时模型组与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。②脑梗死体积：假手术组未见明显脑梗死;1-7d时模型组脑梗死体积均明显增大;NrIE组3d至7d脑梗死体积减小．与同时相模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。③CMVD：1d时模型组及NTE组的微血管数均较假手术组增加,但差异无统计学意义（P＞0．05）;与假手术组比较,3d时NTE组微血管数增多,差异有统计学意义（P〈0．05）,7d时NTE组微血管数显著增加,两者比较差异有统计学意义（P＜0．01）。而模型组至7dCMVD高于假手术组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论脑泰方可通过促进脑缺血再灌注损伤大鼠缺血脑组织血管新生从而改善脑梗死体积和神经功能缺失计分。     

脑泰方对气虚血瘀型脑梗死患者血浆TXB2、6—Keto—PGT1α及血清TNF—α含量的影响

目的:研究脑泰方对气虚血瘀型脑梗死患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)及血浆血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量的影响,进一步探讨脑泰方治疗气虚血瘀型脑梗死的有效作用机制,为其临床应用提供理论依据。方法:利用放免法检测36例气虚血瘀型脑梗死患者用脑泰方前后血清TNF-α及血浆TXB2、6-Keto-PGF1α的含量,并与36例未用脑泰方的气虚血瘀型脑梗死患者进行对照。结果:用药3周后,治疗组降低血清TNF-α及血浆TXB2含量和升高血浆6-Keto-PGF1α的含量较对照组明显(P<0.05)。结论:脑泰方治疗气虚血瘀型脑梗死的疗效机理与其具有降低患者血清中增高的TNF-α含量及调节血管内皮/血小板功能平衡有关,且优于尼莫地平。     

中药脑泰方对大鼠脑缺血后VEGF和Angiopoietins表达的实验研究

目的 探讨中药脑泰方对大鼠脑缺血后血内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管生成素(angiopoietins,Ang)的表达变化及其在血管生成中的作用.方法 选择40只雄性SD大鼠,采用随机区组法分为A正常对照组,B假手术组,C MCAO模型组,D脑泰方组;,观察各组大鼠神经功能缺失计分、脑梗死体积;RT-PCR、Western blot方法检测不同组大鼠脑组织中VEGF、Ang-1及Ang-2 mRNA和蛋白的表达变化.结果 神经功能缺失计分及TTC染色显示脑泰方组脑缺血情况缓解;大鼠脑缺血后VEGF、Ang-2 的表达水平增高,脑泰方组表达显著高于模型组(P<0.05);Ang-1的表达水平在大鼠脑缺血后呈下降趋势,脑泰方组表达显著低于模型组(P<0.05).结论 大鼠脑缺血后VEGF、Ang-1和Ang-2共同协调作用促进血管生成,中药脑泰方在脑缺血损伤后治疗血管新生样作用中发挥着促进作用.     

脑泰方对局灶性脑缺血大鼠脑组织核因子-κB、基质金属蛋白酶9及其抑制剂表达的影响

目的观察益气活血中药脑泰方对局灶性脑缺血大鼠海马C2区缺血组织基质金属蛋白酶9(MMP-9),核因子-κB(NF-κB)及基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)表达的影响,探讨其治疗局灶性脑缺血的机制。方法随机将SD大鼠分为假手术组、模型组及脑泰方低、中、高剂量组(3、9、27 g/kg)。各组大鼠灌胃给药连续3 d,每日1次,预处理后采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血模型,术后连续灌胃给药3 d。采用HE染色观察海马C2区细胞,免疫组化法检测海马C2区MMP-9、NF-κB及TIMP1表达。结果脑泰方高剂量组大鼠正常细胞较模型组明显增多,仅少数细胞出现核固缩样改变;脑泰方高、中、低剂量组MMP-9表达明显降低(P＜0.05);脑泰方高、中剂量组NF-κB表达明显下降(P＜0.05);脑泰方高、中、低剂量组TIMP1表达明显升高(P＜0.05)。结论脑泰方干预通过抑制NF-κB、降低MMP-9表达,增强TIMP1表达,保护血脑屏障,减轻脑水肿,对局灶性脑缺血导致的血脑屏障损伤有一定保护作用。