Folding and function of the myelin proteins from primary sequence data.

To explain how the myelin proteins are involved in the organization and function of the myelin sheath requires knowing their molecular structures. Except for P2 basic protein of PNS myelin, however, their structures are not yet known. As an aid to predicting their molecular folding and possible functions, we have developed a FORTRAN program to analyze the primary sequence data for proteins, and have applied this to the myelin proteins in particular. In this program, propensities for the secondary structure conformations as well as physical-chemical parameters are assigned to the amino acids and the pattern of these parameters is examined by calculating their average values, autocorrelation functions and Fourier transforms. To compare two proteins, their sequences are aligned using a unitary scoring matrix, and homologies are searched by plotting a two-dimensional map of the correlation coefficients. Comparison of the corresponding myelin basic proteins (MBP) and P0 glycoproteins (P0) for rodent and shark showed that the conserved residues included most of the amino acids which were predicted to form the alpha or beta conformations, while the altered residues were mainly in the hydrophilic and turn or coil regions. In both rodent and shark the putative extracellular domain of P0 glycoprotein displayed consecutive peaks of beta propensity similar to that for the immunoglobulins, while the cytoplasmic domain showed alpha-beta-alpha folding. To trace the immunoglobulin fold along the P0 sequence, we compared the beta propensity curve of P0 with that of the immunoglobulin M603, whose three-dimensional structure has been determined. We propose that the flat beta-sheets of P0 are orientated parallel to the membrane surface to facilitate their homotypic interaction in the extracellular space. An extra beta-fold in the extracellular domain of shark P0 compared with rodent P0 was found, and this may result in a greater attraction between the apposed extracellular surfaces and may account for a smaller extracellular space as measured by x-ray diffraction. A computer search of the myelin protein sequences for functional motifs revealed sites for N-glycosylation, phosphorylation, nucleotide binding, and certain enzyme activities. We note especially that there are potential nucleotide binding sites in proteolipid protein (PLP), MBP and 2',3'-cyclic nucleotide 3'-phosphodiesterase (CNP). This is consistent with the experimental observations that PLP acts like an ionophore or proton channel when reconstituted into planar lipid bilayers, MBP binds GTP, and CNP catalyzes in vitro the hydrolysis of 2',3'-nucleotides into corresponding 2'-nucleotides.     

牛骨形态发生蛋白的提取及异位诱导成骨的研究

本研究从1kg牛长骨中提取出部分纯化的牛骨形态发生蛋白(bBMP)160mg.电泳显示其主要区带分子量在33.7～13.4ku(34.0～13.5kd)之间,包括bBMP的生物活性成份18.1ku(18.2kd)蛋白质。将bBMP植入NIH小鼠肌肉内,5天诱导出软骨细胞,10天形成骨组织,14天出现骨髓。软骨或骨的诱发率87.5%。作者观察到bBMP诱导成骨的方式是软骨内成骨,其过程可分为间质细胞增生期、软骨细胞演变期和骨形成期。     

前列腺素E1和一氧化氮联合治疗室间隔缺损并肺动脉高压的疗效观察

目的 :观察静脉应用前列腺素E1(PGE1)、吸入一氧化氮 (NO)及二者小剂量联合应用对室间隔缺损 (VSD)并肺动脉高压的治疗作用。方法 :将 2 4例VSD并肺动脉高压的病人随机分为 3组 ,观察静脉注射PGE16 0ng/ (kg·min)、吸入NO 2 0ppm及静脉注射PGE130ng/ (kg·min)联合吸入NO 10 ppm对病人的血流动力学及血氧饱合度的影响。结果 :静脉注射PGE16 0ng/ (kg·min)使肺动脉平均压 (MPAP)明显下降 ,体动脉平均压 (MSAP)亦有所下降 ,心指数 (CI)明显增加。吸入NO 2 0 ppm组MPAP明显下降而MSAP无明显变化 ,CI有所升高 ,但差别不显著。静脉注射PGE130ng/ (kg·min)同时吸入NO 10 ppm组MPAP明显下降 ,但不显著 ,CI明显升高。 3组血氧饱合度均明显升高。结论 :联合应用小剂量PGE1和NO不仅能有效降低MPAP ,又能适当轻度降低MSAP ,改善心功能 ,减轻了NO的毒副作用 ,是一种较理想的治疗方案     

幽门螺杆菌ureB基因表达产物的反应原性

目的：克隆幽门螺杆菌ureB基因，并进行表达，验证表物的反应原性。方法：应用PCR技术从技术临床分离株中扩增出ureB基因，克隆入载体pGEM-7zf( ）进行测序，进一步转到友大肠杆菌表达载体pBV220进行诱导表达，以Western blot实验验证重组蛋白的反应原性。结果：测序后经同源性比较，证实扩增后得到的片断确为ureB基因，并原核表达出可被抗Hp抗体识别的非融合重组蛋白。结论：获得了有反应原性的重组ureB蛋白。     

不同人群载脂蛋白E基因频率分布特征

目的 :研究江苏地区汉族人群载脂蛋白E(ApoE)基因型及等位基因频率 ,并与国内外不同人群比较分布特征。方法 :聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP)方法检测 16 8例江苏地区无血缘关系汉族人群ApoE基因型。计算各基因型及等位基因频率。结果 :江苏地区汉族人群载脂蛋白E各基因型频率分别为 :ε2 / 2 =0 .6 0 % ;ε2 / 3 =11.90 % ;ε2 / 4 =1.2 0 % ;ε3 / 4 =10 .70 % ;ε3 / 3 =75 .0 0 % ;ε4 / 4 =0 .6 0 % ;各等位基因频率分别为 :ε2 =7.14% ;ε3 =86 .31% ;ε4 =6 .5 5 %。频率分布在不同年龄、性别无显著差异。与其他地区中国人群频率分布相似。中国人群ε3 等位基因频率明显高于欧美人群 ,而ε4等位基因频率明显低于欧美人群。结论 :江苏地区汉族人群载脂蛋白E等位基因频率分布与其他地区中国人群频率分布相似 ,但与欧美人群有显著差异。     

谷胱甘肽合成酶系基因协调表达体系的构建

通过 PCR获得 E.coli B谷胱甘肽合成酶系基因 ( gsh I,gsh II)片段 ,结合定点突变稀有起始密码子 ,设定 gsh I与 gsh II位置与距离 ,构建双顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I- gsh II,建立GSHI、GSH- II蛋白表达体系。结果表明 :以 0 .0 8mmol/L IPTG于 2 8℃诱导工程菌 E.coli BL2 1( DE3) ( p Trc99A/gsh I- gsh II) ,GSH- I、GSH- II蛋白比为 4.5∶ 1 ( m∶ m)时谷胱甘肽合成能力最高 ,达到每克湿菌体 8.5 mg。通过构建单顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I、p Trc99A/gsh II测定GSH- I与 GSH- II蛋白的最适配比 ,结果表明 :在 GSH- I、GSH- II蛋白总量恒定的情况下 ,要提高谷胱甘肽产率 ,两者比例以 3∶ 1～ 6∶ 1为宜     

E838等抗放药对放射损伤防治作用的比较

目的；比较研究E838，WR－2721，盐酸胱胺和炔雌醇等对放射损伤的防治作用及其相互之间的协同作用关系。方法：采用小鼠腹腔注射或灌胃的方法在致伤前或／和致伤后按常用量给药，观察30d存活率，死亡动物平活日和保护系数K的差异。结果：（1）致伤前预防给药，上述4种药物均明显提高了放射损伤的存活率，并延长了死亡动物的平均存活日，其中以E838和WR2721效果最佳；（2）致伤后给药则仅E838和茜草显示了治疗效果；（3）联合用药实验显示所研究的5种配伍用药方式均有较好的防治效果，但以WR2721（防）＋E838（治）效果最好。结论：E838和WR2721与其它抗放药相比具有较理想的辐射防护作用，且E838还有一定的治疗作用,两者合理配伍使用可发挥协同的作用效果。     

低胆红素血症对机体抗氧化能力和脂质过氧化的影响及VitE的干预效果

目的 :探讨低胆红素血症对机体抗氧化能力和脂质过氧化的不良影响并观察VitE的干预效果。方法 :从体检健康人群中有意选择 4 5例胆红素水平偏高者 (≥ 15 μmol/L)和 4 0例胆红素水平偏低者 (≤ 9μmol/L)作为研究对象 ,抽空腹静脉血检测血清总抗氧化能力 (T -AOC) ,丙二醛 (MDA)及血浆氧化修饰低密度脂蛋白(Ox -LDL) ,并给低胆红素组每人每天口服VitE 10 0mg ,连续 2周 ,复测上述指标。结果 :与高胆红素组比 ,低胆红素组T -AOC明显降低 (P <0 .0 1) ,而MDA和Ox -LDL明显升高 (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,但低胆红素组补充VitE干预后 ,T -AOC显著升高 ,而MDA和Ox -LDL显著降低 (均P <0 .0 1) ,分别达到甚至超过了高胆红素组的相应水平。结论 :低胆红素血症可显著降低机体抗氧化能力 ,促进脂质过氧化 ,但这一不良影响可以通过补充VitE得到有效纠正。     

激素替代治疗对绝经后Ⅱ型糖尿病和高血压患者肾脏微血管病变的影响

目的 :探讨激素替代治疗对绝经后Ⅱ型糖尿病和高血压患者肾脏微血管病变的影响。方法 :36例患有Ⅱ型糖尿病和高血压的绝经后妇女随机分为治疗组和安慰剂组各 18例 ,采用双盲法予口服克龄蒙或安慰剂 1片 /日 ,共 4 5个周期 ,测量用药前后各参数值并进行比较及线性相关分析。结果 :治疗组用药前后 2 4小时尿蛋白定量由 ( 0 4 45± 0 0 36 )g降到 ( 0 36 1± 0 0 32 ) g(P <0 0 1) ,内生肌酐清除率由 ( 92 0± 5 2 )ml/min增到 ( 99 1± 4 8)ml/min (P <0 0 5) ,空腹血糖由 ( 7 0 2± 0 4 3)mmol/L降到 ( 6 55± 0 31)mmol/L(P <0 0 5) ,血清总胆固醇由 ( 6 6 6±0 2 8)mmol/L降到 ( 5 71± 0 71)mmol/L(P <0 0 1) ,血压无明显改变。 2 4小时尿蛋白定量和内生肌酐清除率与其他参数间无显著相关性。安慰剂组用药前后各项指标无明显改变。结论 :激素替代治疗对绝经后Ⅱ型糖尿病和高血压患者肾脏微血管病变有改善作用