深低温冷冻肌腱细胞活性的研究

目的研究深低温冷冻方法对肌腱细胞活性的影响,比较程序性降温和普通深低温冷冻法对腱细胞活性的影响.方法纯种SD大鼠24只（出生21 d）,随机分为3组,取双侧跟腱.新鲜肌腱对照组（A）,常规深低温冷冻组（B）,程序性降温深低温冷冻组（C）.采用相同的方法对3组肌腱细胞进行细胞培养.相差显微镜观察原代和传代后细胞的生长,绘制细胞的生长曲线,考察细胞的活性;对细胞进行成纤维细胞染色、胶原染色和对细胞进行形态观察（扫描电镜）;水解法定量分析细胞培养基中羟脯氨酸浓度的变化,检测细胞合成胶原的能力.结果原代细胞培养时A组细胞的生长速度快于B组和C组（P＜0.01）,C组细胞的生长速度快于B组（P＜0.01）,这种生长速度的差异在细胞传代后消失.细胞的形态学和组织学符合成纤维细胞形态.3组细胞培养基中羟脯氨酸浓度变化的差异无统计意义（P＞0.05）.结论经深低温冷冻处理的肌腱中仍存在具有活性的腱细胞,但数量显著少于新鲜肌腱中活细胞的数量.应用计算机控制程序性慢速降温方法处理的肌腱其活细胞的数量有所提高,但仍低于新鲜肌腱中活细胞的数量.     

Liver regeneration in acute severe liver impairment: a clinicopathological correlation study.

BACKGROUND: Although normally quiescent, the adult mammalian liver possesses a great capacity to regenerate after different types of injury. Major players in the regeneration process are mature residual cells, including hepatocytes, cholangiocytes and stromal cells. However, if the regenerative capacity of mature cells is impaired, hepatic progenitor cells (HPCs) are activated and expand into the liver parenchyma. Upon transit amplification, the progenitor cells generate new hepatocytes and biliary cells to restore liver homeostasis. AIMS/METHODS: To study the relationship between different histopathological parameters as well as their correlations with clinical parameters and outcome, we examined liver specimens from 74 patients with acute or subacute severe liver impairment by immunohistochemistry for CK7/CK19 (evaluation of HPCs activation/differentiation), Mib1(Ki 67)/P21 (evaluation of proliferative activity/proliferation arrest of hepatocytes) and hematoxylin and eosin (evaluation of hepatocyte loss). RESULTS: Of the 74 patients, 32% survived without transplantation, 14% died without transplantation and 54% were transplanted. Our results show that a threshold of 50% loss of hepatocytes, associated with significant decrease in the proliferative activity of remaining mature hepatocytes, is needed for extensive hepatic progenitor cell activation. Such activation is a sign of disease severity and occurs early (within 1 week) in the disease course. However, development of intermediate hepatocytes, suggesting HPCs differentiation towards mature hepatocytes, takes at least 1 week's time. We found a positive correlation between histopathological parameters (percentage hepatocyte loss, number of proliferating hepatocytes and number of HPCs) and clinical parameters of liver impairment such as model for end stage liver diseases (MELD). Surviving patients compared with those who either died or were transplanted had significantly less hepatocyte loss, less HPCs activation and more mature hepatocyte proliferative activity. Hepatocyte proliferative activity and degree of hepatocyte loss were the most important independent histopathological parameters in predicting outcome. CONCLUSION: Liver biopsy can provide important additional information in a patient with severe acute liver impairment.     

氯胺酮对体外培养大鼠神经干细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨氯胺酮对体外培养夫鼠神经干细胞(NSC)增殖与凋亡的影响。方法采用无血清培养和单细胞克隆技术,在大鼠海马分离培养具有单细胞克隆能力的细胞群,采用免疫荧光细胞化学技术证实为NSC。将NSC以5×10~4/孔接种于96孔培养板中,分别加入浓度为0(未加氯胺酮)、5、10、20、50、100、200、500、1000 mmol·L~(-1)氯胺酮,每个浓度5孔。采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测NSC光密度(OD),并计算生长抑制率(RI)。采用流式细胞仪测定氯胺酮浓度为0、10、100、500、1000 mmol·L~(-1)时NSC凋亡率。结果与氯胺酮浓度0时比较,200、500、1000 mmol/L氯胺酮可降低NSC OD,升高RI,10、100、500、1000 mmol·L~(-1)氯胺酮可升高NSC凋亡率(P＜0．05或0．01)。结论氯胺酮对体外培养大鼠NSC增殖有抑制作用,并能诱导NSC凋亡,且该作用与氯胺酮浓度有关     

细胞内游离Ca2+在发育中大鼠皮层神经元无镁诱导惊厥性损伤中的作用

目的: 观察细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)在培养的不同发育阶段皮层神经元无镁诱导惊厥性损伤中的作用,探讨惊厥性脑损伤年龄依赖性的可能机制.方法:体外培养6 d、17 d的胚胎大鼠皮层神经元用无镁细胞外液处理3 h,或于无镁处理前用NMDA(N-甲基-D-门冬氨酸)受体拮抗剂或Ca2+通道阻滞剂预处理,用MTT代谢率测定的方法检测神经元损伤,以Fluo-3作标记用激光共聚焦显微镜扫描的方法检测[Ca2+]i.结果:体外培养6 d、17 d的神经元单纯无镁组MTT代谢率较同期对照组降低.应用MK-801 10 μmol*L-1、AP-5 50 μmol*L-1、尼莫地平10 μmol*L-1预处理后再给无镁处理,培养6 d、17 d的神经元MTT代谢率均不同程度高于同期单纯无镁组.培养6 d、17 d的神经元相对荧光强度之间差异有显著性,两者与基线荧光强度比较差异亦有显著性.应用上述各种拮抗剂后,[Ca2+]i改变的峰值均明显低于同期单纯无镁组.结论: 在体外不同发育阶段的神经元,短暂无镁处理诱导惊厥样放电所引起的神经元线粒体功能损伤以及[Ca2+]i改变程度不同.这种[Ca2+]i改变的年龄依赖性可能是惊厥导致神经元损伤的年龄依赖性的机制之一.NMDA受体-Ca2+通道激活是导致这种[Ca2+]i改变及神经元损伤的关键环节.     

103Pd放射性核素支架抑制损伤血管平滑肌细胞增殖的实验研究

[目的]采用兔腹主动脉损伤致再狭窄的动物模型,探讨钯-103(103Pd)放射性核素支架对损伤血管中膜平滑肌细胞增殖的影响。[方法]选用雄性新西兰兔50只,随机分为普通支架组及核素支架组,设正常对照。分别于术后3、7、14、28及56 d取材,进行病理形态学、透射电镜、免疫组化(增殖细胞核抗原PCNA、细胞周期素蛋白Cy-clin E)及原位杂交(C-myc mRNA)实验观察。[结果]①光镜下发现,核素支架组管腔狭窄程度明显低于普通支架组,术后第56天最显著(P<0.01);②透射电镜显示,术后3~28 d,核素支架组中膜血管平滑肌细胞增殖明显低于普通支架组,7d时达峰,为13.78％±0.64％vs19.53％±0.44％(P<0.01);③免疫组化显示,术后3~28 d核素支架组PCNA及Cyclin E表达均低于普通支架组,7 d为表达高峰,PCNA为16.35％±0.79％vs24.36±0.55％,Cy-clin E为14.78％±1.07％ vs 22.65％±1.00％(P<0.01)。④对c-myc mRNA进行原位杂交显示,术后3~28 d核素支架组的表达明显低于普通支架组,7 d达峰值,为17.48％±0.53％ vs 25.34％±0.87％(P<0.01);⑤C-mycmRNA与PCNA相关性分析提示二者呈明显正相关(P<0.01)。[结论]103Pd放射性核素支架通过抑制损伤血管中膜平滑肌细胞的增殖,降低再狭窄的程度,从而减少再狭窄的发生率。     

丁酸对人结肠癌细胞株SW1116增殖及分化状态的影响

目的:探讨结肠中膳食纤维的酵解产物丁酸对人结肠癌细胞株生长、增殖及分化状态的影响。方法:将传代人结肠癌SW1116细胞株接种于不含及合不同浓度(2、3、4、7、10 mmol/L)丁酸的培养基中。经6、24、48和72h后,用四唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率、细胞匀浆中癌胚抗原(CEA)及和碱性磷酸酶(ALP)的表达;同时用电镜观察细胞形态的改变。结果:丁酸对SW1116细胞株的生长抑制作用呈浓度依赖性,在所观察的丁酸浓度及时限内,最高抑制率达53.9％。同时丁酸能大大增加SW1116细胞CEA和ALP的表达;当丁酸浓度≥7mmol/L和培养时间≥48h时,二者增加最为显著(P<0.001)。电镜显示丁酸能使细胞表面微绒毛明显增多。结论:丁酸能抑制SW1116细胞株的生长并诱导其分化。     

XGD-1对人外周血T淋巴细胞增殖和IL-2R表达的影响

目的 探讨XGD—l的免疫抑制作用及其作用机理。方法 不同浓度的XGD—l作用于植物血凝索(PHA)和刀豆索A(ConA)诱导的正常人外周血T淋巴细胞，共同培养48h和72h，用改良MTT法观察XGD—l对人T淋巴细胞增殖的影响，用流式细胞术检测XGD—l对T淋巴细胞表面IL—2R表达的影响；同时观察联合应用CsA和XGD—l对细胞增殖及IL—2R表达的影响。结果 XGD—l对PHA和ConA诱导的正常人外周血T淋巴细胞增殖有明显的抑制作用，其作用与药物浓度有关，在一定剂量范围内，抑制作用随XGD—l剂量的递增而加强；XGD—l对PHA和ConA激活的T淋巴细胞表面IL-2R的表达有显著抑制作用，阳性率从正常对照活化细胞的47．67％降为25．03％；联合应用CsA，上述抑制作用增强。结论 XGD-l具有免疫抑制作用，能降低IL-2R表达，可能是其免疫抑制作用的重要机理之一。     

宫颈鳞癌中erbB3、erbB4基因蛋白表达与细胞凋亡和增殖的相关性研究

目的　探讨原癌基因erbB3、erbB4与细胞凋亡和增殖的关系 ,为该基因作用机制提供新线索。方法　分别采用免疫组化、DNA末端标记技术 (TUNEL法 )和HE染色检测 5 0例宫颈鳞癌中erbB3、erbB4基因蛋白表达及凋亡指数 (AI)和增殖指数 (MI)。结果　宫颈鳞癌中erbB3、erbB4表达率分别为 5 2 .5 %、44 .0 % ,AI、MI值分别为 5 .5 0± 4.10和 4.18± 3 .63 ,随着宫颈癌恶性程度增高、FIGO分期进展、肿瘤体积的增大和淋巴结转移组 ,erbB3、erbB4表达率增加 ,AI、MI值也增高 ,但差异仅在分化程度上有显著性 (P <0 .0 5 )。双变量相关分析显示erbB3、erbB4表达与AI、MI间无相关性 (r3=0 .10 98、0 .12 3 6,r4 =0 .2 15 1、0 .2 5 5 8,P >0 .0 5 )。结论　erbB3、erbB4和AI、MI预示着宫颈癌恶性潜能 ,但不能作为预后有用指标。erbB3、erbB4的作用机制可能不是通过细胞凋亡或增殖起作用     

增殖细胞核抗原在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨鼻咽癌（ＮＰＣ）组织ＰＣＮＡ的表达与其临床进展、病理组织分裂的相互关系。方法：用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测１１３例ＮＰＣ和２５例鼻咽慢性炎的ＰＣＮＡ表达。结果：１０３例ＮＰＣ和３例鼻咽慢性炎呈ＰＣＮＡ阳性。ＮＰＣ呈ＰＣＮＡ低增殖频率者，倾向于Ｉ、Ⅱ期临床分期（８７．１％）及无淋巴结转移（７０．９６％）。高增殖频率者，倾向于Ⅲ、Ⅳ期临床分期（８２．１％）及有淋巴结转移（７９．４９％）。增殖频率与     

脾脏切除对胸腺和淋巴结免疫功能的影响

报道脾脏切除（脾切）对动物胸腺和淋巴结免疫功能的影响，脾切后３ｗ大鼠胸腺细胞自发增殖及ＣｏｎＡ诱导增殖均无明显变化，ＣｏｎＡ诱导淋巴结细胞增殖脾切组明显高于假手术对照组，脾切后３ｗ再用ＳＲＢＣ免疫，５ｄ后小鼠腹腔淋巴结数量脾切明显高于对照组，用ＱＨＳ法测定淋巴结细胞对ＳＲＢＣ初次抗体产生脾切组则明显低于对照组。