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71.
目的:获得hnRNPA2/B1 cDNA序列,研究其在滑膜组织中的表达水平,探讨它在类风湿滑膜炎中可能的致病作用。方法:从人中血单个核细胞中提取总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的片段,将其克隆于PUC-T1质粒上,并经酶切电泳、DNA测序鉴定分析。采用免疫组化和原位杂交方法,分别利用单克隆抗体和特异的cDNA探针,检测滑膜组织中hnRNPA2/B1的含量及表达水平。结果:从人外周血单个核细胞总RNA中扩增得到目的片段,并经测序证实该片段为hnRNPA2/B1的编码序列。免疫组化和原位杂交显示hnRNPA2/B1在类风湿关节炎(RA)滑膜中的表达水平整体上较骨关节炎(OA)和正常对照滑膜组高(P<0.05)。结论:成功克隆hnRNPA2/B1 cDNA;初步证明hnRNPA2/B1水平在RA关节局部增高,推测它可能参与了类风湿滑膜炎的发病。 相似文献
72.
《济宁医学院学报》2001,24(1):30-32
目的对融合基因GM-CSF/Fcγ2进行定点突变,去除其补体结合位点,构建GM-CSF/Fcγ2-融合蛋白真核表达载体.方法通过设计突变引物,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM-CSF/Fcγ2-.并通过T-A克隆策略,把突变后的融合基因GM-CSF/Fcγ2-重组到真核表达载体pRc/CMV2中,构建真核表达质粒pRc/CMV2/GM-CSF/Fcγ2-并经过酶切和测序确证.结果成功对融合基因GM-CSF/Fcγ2-进行了突变,构建了真核表达载体pRc/CMV.2/GM-CSF/Fcγ2-.结论利用该PCR方法进行基因定点突变可行. 相似文献
73.
目的 对融合基因GM -CSF Fcγ2 进行定点突变 ,去除其补体结合位点 ,构建GM -CSF Fcγ2-融合蛋白真核表达载体。方法 通过设计突变引物 ,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM -CSF Fcγ2-。并通过T -A克隆策略 ,把突变后的融合基因GM -CSF Fcγ2-重组到真核表达载体pRc CMV2中 ,构建真核表达质粒pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-并经过酶切和测序确证。结果 成功对融合基因GM -CSF Fcγ2-进行了突变 ,构建了真核表达载体pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-。结论 利用该PCR方法进行基因定点突变可行 相似文献
74.
目的 对融合基因GM-CSF/Feγ2^-进行定点突变,去除其补体结合位点,构建GM-CSF/Feγ2^-融合蛋白真核表达载体。方法 通过设计突变引物,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM-CSF/Feγ2^-。并通过T-A克隆策略,把突变后的融合基因GM-CSF/Feγ2^-重组到真核表达载体pRc/CMV2中,构建真核表达质粒pRc/CMV2/GM-CSF/Feγ2^-并经过酶切和测序确证。结果 成功对融合基因GM-CSF/Feγ2^-进行突变,构建了真核表达载体pRc/CMV2/GM-CSF/Feγ2^-。结论 利用该PCR方法进行基因定点突变可行。 相似文献
75.
人截断型LBP基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建 总被引:3,自引:2,他引:1
目的 构建人N端截断型脂多糖结合蛋白(tLBP)基因的杆状病毒表达载体,为后续的蛋白表达及其抗内毒素保护作用研究奠定基础。方法 采用PCR技术从人全长LBP基因cDNA中扩增长度为695bp的基因片段,经pGEM-T载体亚克隆筛选和序列分析后,应用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统,基因重组和外源基因转座分别构建转移质粒pFASTBACtLBP和穿梭质粒pBac-midtLBP。结果 经PCR、琼脂糖凝胶电泳、酶切分析及序列测定,所克隆的基因片段为700bp左右的tLBP,并证实其目的基因重组载体发生了特异转座和病毒重组。结论 本实验成功克隆了tLBP目的基因片段并构建其杆状病毒表达载体。 相似文献
76.
77.
PPARγ2诱导脂肪细胞分化相关基因的克隆及鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 分离和克隆小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(mPPARγ2)诱导脂肪细胞分化的相关基因。方法 在体外建立mPPARγ2诱导NIH3T3成纤维细胞分化成脂肪细胞模型基础上,采用mRNA差异显示技术分离、克隆PPARγ2诱导的脂肪细胞高表达或低表达的cDNA片段,再通过半定量RT-PCR证实。结果 经mRNA差异显示技术分离到20条差异显示片段,进一步对差异显示片段进行PCR扩增,T/A亚克隆及测序分析,与Gen Bank基因数据库比较后,得到8个已知基因,一条新基因序列,2个EST序列和7个新的EST序列。半定量RT-PCR结果显示UNR基因在PPARγ2诱导的脂肪细胞中表达上调,而凋亡抑制因子5(AP15)的表达则下调。结论 UNR基因的高表达和API5基因的低表达可能与PPARγ2诱导脂肪细胞分化有关。 相似文献
78.
可溶性血管内皮细胞生长抑制因子基因的克隆与表达 总被引:3,自引:2,他引:1
目的:对可溶性人血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor,VEGI)基因进行克隆和表达,检测表达产物对血管内皮细胞增殖的抑制活性。方法:将可溶性人VEGI基因克隆入载体pUC19后测序;再将正确的VEGI基因亚克隆入表达载体pPROEXHTb,IPTG诱导表达;初步纯化表达产物,检测对新生牛主动脉内皮细胞增殖抑制活性。结果:可溶性人VEG 相似文献
79.
用RT-PCR技术从人胎盘组织内成功地扩增全长肝细胞生长因子(HGF)cDNA基因(2 184bp),并将其克隆至pGEM-T载体,经限制性核酸内切酶NdeⅠ,BglⅡ,HindⅢ,BamHⅠ和XhoⅠ的酶谱分析和DNA测序分析证实。再将其亚克隆至逆病毒载体pLNL-XHC,可进一步用于基因表达和基因治疗的研究。 相似文献
80.
人肺癌相关抗原的基因克隆 总被引:4,自引:0,他引:4
目的克隆人肺癌相关抗原的基因。方法用λgt11Sfi-Not定向克隆载体构建人肺鳞癌细胞系L-78的cDNA文库,并以抗人肺癌单抗ALT-04为探针进行了筛选。对名为hlc-14的cD-NA克隆作了测序分析与进一步研究。用重组的pXJ41-hlc14质粒转染NIH3T3细胞,通过免疫组化法对克隆基因进行了表达检测与鉴定,还观察了转染细胞的软琼脂集落形成能力。结果建成1.4×106pfu/ml人肺癌cDNA文库,经过四轮免疫学筛选获得6个cDNA克隆,最大的cDNA克隆为hlc-14,长954bp。对该克隆的测序结果与基因库资料比较,未发现同源序列。hlc-14cDNA转染的NIH3T3细胞有明显的肺癌相关抗原表达,并且在软琼脂中的集落形成能力增强。结论hlc-14是一个新的肺癌相关抗原的cDNA序列。这一序列的发现为阐明肺癌的发病机理、探索肺癌基因治疗的靶基因提供了新的线索 相似文献