Rho信号转导通路与细胞迁移

细胞迁移是机体正常生长发育必不可缺的生理过程,组织损伤和感染的过程中离不开它;而在一些慢性疾病如癌症、动脉粥样硬化和慢性炎性纤维化等伴随着特定细胞迁移,阻止这些细胞迁移能抑制疾病进展。细胞迁移涉及到细胞骨架和细胞黏附相关的动态组装和空间位置的改变。小G蛋白Rho家族是肌动蛋白细胞骨架重新组装的主要调节因子之一,在协调细胞迁移中起重要作用。     

以细胞骨架为靶点的抗肿瘤药物研究进展

本文详细介绍了细胞骨架的构成及功能，并对以细胞骨架为靶点的抗肿瘤药物的作用方式及抗癌机制进行了探讨，其对新药开发及指导临床合理用药均具有重要意义。     

大鼠视神经部分损伤后基因表达谱的 基因芯片研究

目的探讨视神经部分损伤后视网膜、视神经基因表达谱的变化。方法60只SD大鼠随机分成4组，反向镊夹持大鼠右眼视神经6 s，分别于伤后3、7、14、21 d取手术眼及对侧假手术眼（仅暴露但不夹持视神经）的视神经和视网膜，利用高密度基因芯片技术检测基因表达谱的变化。结果视神经损伤后有大量基因表达发生改变，伤后3、7、14、21 d的阳性基因表达率分别为2.35%、6.48%、3.82%和4.09%，总阳性表达率为11.77%，阳性表达基因的功能包括细胞生长和存活、细胞骨架、细胞外基质和细胞粘附、自由基和氧化损伤、能量和代谢、炎症、神经传递和离子转运、细胞信号转导、结构蛋白、转录和翻译等。修复基因的表达上调或下调是基因表达变化的主体，破坏基因的变化占的比例较小，其中伤后7 d表达上调的修复基因占表达改变的基因的13.98%，表达下调的修复基因占24.73%，伤后14 d表达下调的修复基因占17.20%。结论视神经损伤后有大量的基因表达发生改变，全面了解视神经损伤后基因表达的变化对于深入研究损伤后反应特别是再生反应的机制具有重要意义。(中华眼底病杂志,2005,21:163-166)     

胶质瘤细胞与星形胶质细胞骨架荧光成像的比较

目的探讨C6胶质瘤细胞与侵袭性相关的骨架构筑特点。方法利用免疫荧光技术对C6胶质瘤细胞及星形胶质细胞的骨架成分进行成像及比较分析,流式细胞仪检测两种细胞F-actin的荧光强度。结果C6胶质瘤细胞的三种骨架成分呈网架结构,以核为中心向外周放射,边界不齐、毛糙,此外,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构。星形胶质细胞三种骨架成分呈网架结构,但细胞边界整齐,微丝稀疏,中间丝发达密集,呈栏栅状排列。C6胶质瘤细胞内F-actin的荧光强度(202.54±11.06)明显强于星形胶质细胞内F-actin的荧光强度(62.64±10.23),P<0.01。结论C6胶质瘤细胞骨架呈网架结构,边界不齐、毛糙,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构,可能均与侵袭性相关的特征结构表现,C6胶质瘤细胞含有丰富的F-actin与侵袭性有关。     

丹参酮ⅡA对体外兔血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察丹参酮A对体外兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,并初步探讨丹参酮A的作用机制。方法采用兔胸主动脉,用组织贴块法培养,设立空白对照组,加入不同浓度的丹参酮A共同孵育24 h、48 h和72 h,采用MTT法观察该药对细胞增殖的影响;划痕法观测细胞迁移情况;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量;TRITC-鬼笔环肽标记F-actin,观察该药物对细胞骨架微丝结构的影响。结果1同一时间点,丹参酮A各浓度组显著抑制体外培养兔VSMC增殖和迁移。细胞的A570值(24 h、48 h、72 h分别为r=-0.762,P=0.000;r=-0.837,P=0.000;r=-0.944,P=0.000)、迁移距离(24 h、48 h、72 h分别为r=-0.966,P=0.000;r=-0.980,P=0.000;r=-0.966,P=0.000)与浓度呈负相关;2作用24 h后,处于G0/G1期的VSMC百分比增加,细胞DNA含量减少,凋亡率增加。兔VSMC在G0/G1期所占比例(r=0.962,P=0.000)、凋亡率(r=0.982,P=0.000)和浓度呈正相关;3药物干预组和对照组相比,兔VSMC的细胞骨架结构有所改变,对照组中细胞骨架呈极性分布,定向伸展,可见伪足;药物干预组细胞骨架呈非极性分布,未见伪足。结论丹参酮A对体外兔VSMC的增殖和迁移有抑制作用,上述作用可能是通过阻滞兔VSMC通过细胞周期的限制点,使其停滞于G0/G1期,诱导细胞凋亡以及影响细胞骨架微丝结构来实现。     

ATP缺失时大鼠近端肾小管上皮细胞骨架重组与ERM蛋白的重分布相关

目的:探讨ATP缺失时大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E细胞)肌动蛋白细胞骨架重组情况及其可能机制.方法:用含0.1 μmol/L antimycin A的ATP缺失缓冲液处理培养的NRK52E细胞,建立细胞的体外ATP缺失模型;采用FITC标记的鬼笔环肽标记纤维型肌动蛋白(F-actin),用流式细胞仪检测技术分析肌动蛋白细胞骨架的重组情况;用Western blot及免疫印迹技术检测ATP缺失后NRK52E细胞内骨架组分(Triton不溶组分)及上清组分(Triton可溶组分)中ERM(Ezrin/Radixin/Moesin)蛋白的分布改变.结果:体外ATP缺失模型建立,各实验组细胞内ATP浓度呈时间依赖性的下降(P＜0.05);ATP缺失后,NRK52E细胞内纤维型肌动蛋白的量渐增,且肌动蛋白的聚合程度随ATP缺失时间延长而增加(P＜0.05);ATP缺失后,ERM蛋白从细胞骨架解离进入胞浆,且ERM蛋白从细胞骨架的解离程度随ATP缺失的程度的增加而增加(P＜0.05).结论:ATP缺失后NRK52E细胞骨架重组可能与ERM蛋白的重分布相关.     

波形蛋白在增生性瘢痕中表达与作用的研究

目的 波形蛋白是中等纤维的主要成分之一，在细胞骨架与运动中起着重要的作用。探讨波形蛋白在增生性瘢痕中表达程度及对瘢痕增生与挛缩的作用。方法 收集患者不同时期增生与非增生瘢痕作为研究标本，利用基因芯片筛选出的差异基因，选择波形蛋白的基因特异片段，制成寡核苷酸探针与瘢痕组织切片原位杂交。同时，将各标本进行组织块培养，制成成纤维细胞爬片，进行原位杂交。结果 波形蛋白基因在3个月，6个月的增生性瘢痕中表达均明显强于9个月，12个月增生瘢痕及非增生瘢痕，阳性细胞比例也高于9个月，12个月增生瘢痕及非增生瘢痕。结论 瘢痕增生挛缩与细胞骨架运动的相关基因存在密切关系，而波形蛋白起到关键的作用。同时，抑制该基因的表达，可能实现减轻瘢痕增生与挛缩。     

Cytoskeleton reorganization and ultrastructural damage induced by gliadin in a three-dimensional in vitro model

AIM: To evaluate the interplay between gliadin and LoVo cells and the direct effect of gliadin on cytoskeletal patterns. METHODS: We treated LoVo multicellular spheroids with digested bread wheat gliadin in order to investigate their morphology and ultrastructure (by means of light microscopy and scanning electron microscopy), and the effect of gliadin on actin (phalloidin fluorescence) and the tight-junction protein occludin and zonula occluden-1. RESULTS: The treated spheroids had deep holes and surface blebs, whereas the controls were smoothly surfaced ovoids. The incubation of LoVo spheroids with gliadin decreased the number of intracellular actin filaments, impaired and disassembled the integrity of the tight-junction system. CONCLUSION: Our data obtained from an "in vivo-like" polarized culture system confirm the direct noxious effect of gliadin on the cytoskeleton and tight junctions of epithelial cells. Unlike two-dimensional cell culture systems, the use of multicellular spheroids seems to provide a suitable model for studying cell-cell interactions.     

缺血再灌注损伤对新生鼠肾小管上皮细胞calpain的影响

calpain是一种钙依赖性半胱氨酸蛋白酶,钙离子浓度升高使其激活。细胞骨架蛋白和膜蛋白都是calpain的水解底物。过去calpain被认为介导了缺氧对心脏、肝脏和大脑所致的损伤。现在的研究发现其在缺血再灌注导致肾小管上皮细胞损伤过程中也起了重要的作用。2002年1月-2003年3月,我们进行实验研究,探讨新生大鼠肾小管上皮细胞在缺血再灌注不同时段calpain变化的特点,calpain对细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白（α-actinin）、F-肌动蛋白（F-actin）和细胞膜黏合分子β1-整合素（β1-integrin）的水解作用以及探讨calpain抑制剂对上述蛋白的保护作用。     

蛋白激酶对内毒素休克后内皮细胞骨架的作用

目的　探讨内毒素休克发病机制中蛋白激酶G(PKG)的作用。　方法　用脂多糖 (LPS)刺激培养的内皮细胞 ,通过细胞裂解和离心获得细胞裂解液 ,用放射性同位素法标记法检测PKG的活性。同时采用特异性荧光染色法检测LPS刺激后细胞内肌动蛋白微丝 (F actin)的结构和分布变化。用PKG特异性抑制剂KT5 82 3预处理细胞后 ,再检测LPS介导的细胞内PKG活性和F actin的变化。以空白组为阴性对照 ,以PKG激动剂 8 Br cGMP刺激细胞作为阳性对照组。　结果　LPS分别刺激 5、10、30和 6 0min后细胞内PKG活力呈时间依赖性的增高 (与空白组相比P <0 .0 1) ,细胞内的F actin出现极性分布 ;而KT5 82 3预刺激 2 0min后再用LPS刺激没有出现上述变化。PKG的激动剂 8 Br cGMP刺激细胞后的变化与LPS的刺激相似。　结论　LPS可以介导血管内皮细胞PKG的激活和F actin的应力性变化 ;内毒素休克后内皮细胞通透性增高与cGMP PKG通路的激活有关。