CENPK基因过表达载体的构建及鉴定

[目的]构建着丝粒蛋白K (cetromere protein K,CENPK)基因过表达载体,并对其在肝癌FOCUS细胞中的表达进行鉴定.[方法]①从人肝癌组织中扩增出CENPK目的基因并将其克隆到pCMV-3Tag-3载体上,构建真核表达载体pCMV-CENPK;②利用脂质体法将构建好的pCMV-CENPK真核表达载体转染肝癌FOCUS细胞,并用G418筛选出CENPK基因稳定过表达的肝癌FOCUS细胞株;(③通过Real-time PCR及Western Blot的方法对筛选出来的细胞进行鉴定.[结果]①经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-CENPK.②通过Real-time PCR及Western blot的方法鉴定,CENPK基因在筛选出来的肝癌FOCUS细胞株中成功过表达.[结论]成功构建真核表达载体pCMV-CENPK并使其在肝癌FOCUS细胞中稳定过表达,为进一步研究CENPK基因在肝癌发生发展中的作用奠定了基础.     

高通量测序筛选结核分枝杆菌耐药株差异基因

目的比较结核分枝杆菌中敏感株、多耐药株、广泛耐药株三者间基因表达的差异,为进一步针对耐药菌株的研究提供方向。方法从深圳市第三人民医院收集敏感株、多耐药株、广泛耐药株各1株,提取菌株RNA,然后构建cDNA文库,使用Genome Analyzer IIx高通量测序仪进行全基因组测序,经过筛选比对后得到测序结果 ,再比较3个菌株间的基因表达差异。结果高通量测序后共得到基因3 968个。将耐药株与敏感株的基因进行比较,选取表达差异高于10倍的基因,筛选得到多耐药株差异基因16个、广泛耐药株差异基因10个。这些表达差异基因大部分与毒素-抗毒素系统、PE/PPE家族蛋白、金属转运蛋白相关。还在多耐药株中发现了一系列高表达的前噬菌体基因及噬菌体整合相关的基因。结论通过高通量测序筛选得到一系列耐药株差异表达基因,为未来对耐药菌株的研究提供依据。     

中药制剂治疗乙型肝炎肝硬化的疗效观察

目的研究中药复方制剂治疗乙型肝炎肝硬化的效果及安全性。方法治疗组30例乙型肝炎肝硬化患者接受中药制剂治疗。另30例为对照组给予维生素类口服，治疗52周。结果中药制剂治疗组患者治疗结束时肝功能改善、血清肝纤维化标志物下降和B超检查方面均优于对照组，两组均无药物不良反应发生。结论本中药制剂能有效、安全地治疗乙型肝炎肝硬化。     

乙型肝炎病毒多聚酶基因YMDD变异与临床治疗反应

目的：了解深圳地区慢性乙型肝炎患者在长期拉米夫定治疗中HBV多聚酶基因YMDD变异的情况及其对治疗反应的影响。方法：对100例拉米夫定治疗中28例出现血清病毒核酸（HBV DNA）阳性的患者,采用限制性片段长度多态性分析法（PCR－RFLP）检测YMDD变异,并观察其血清HBV DNA及丙氨酸转氨酶（ALT）水平。结果：100例中有17例YMDD变异阳性，其中以YVDD（M550V）变异为主,占64．7％（11／17），YIDD（M550I）变异为35．3％（6／17）。发生YMDD变异的患者均伴有HBV DNA及ALT水平反跳，1例住院患者停用拉米夫定后出现病情加重。结论：深圳地区慢性乙型肝炎患者在长期拉米夫定治疗中（疗程1年，100md/d）HBV多聚酶基因YMDD变异率为17．0％（17／100）。发生变异者较无变异者疗效降低，检测YMDD变异有助于监测疗效。     

通里攻下法治疗重型肝炎的临床研究

目的观察中医通里攻下法治疗重型肝炎的临床疗效。方法将188例重型肝炎患者随机分为治疗组98例和对照组90例,对照组予常规西药综合治疗,治疗组在常规西药综合治疗的基础上,加服通里攻下中药赤芍承气汤,2次/d,200 m l/次,疗程为2周。结果两组患者临床疗效、病死率、肝功能、并发症间差别均有显著性意义(P<0.05)。结论中医通里攻下法治疗重型肝炎疗效确切,值得临床推广应用。     

慢性乙型与丙型肝炎病人重叠HGV感染的调查

慢性乙型与丙型肝炎病人重叠ＨＧＶ感染的调查王火生，周伯平，徐六妹，付涌水，马为民采用逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对深圳地区６１例慢性乙型与３３例性性丙型肝炎病人血清进行ＨＧＶＲＮＡ的检测，结果如下。１．对象慢性乙肝病人６１例，其中男５１例...     

TLMV5’非编码区序列的克隆与序列分析

目的 调查TTV阴性非甲－庚型肝炎患者TLMV(TTV-Like Mini Virus)感染情况，分析TLMV5’非编码区部分基因序列。方法 采用巢式PCR技术检测TTV阴性的非甲－庚肝炎患者血清TLMV DNA，对PCR产物进行克隆、测序和分析。结果 53例病例中TLMV DNA阳性37例（69．8％），对其中8株TLMV基因克隆测序，并与Takahashi报道的TLMV序列（Genebank Accession Nos AB026929-AB026931)比较，其核苷酸序列同源性在64％－83％之间。结论 在TTV阴性的非甲－庚肝炎患者在存在TLMV感染。TLMV基因存在较大的异源性。TLMV的致病性及其与肝炎的关系尚有待进一步研究。     

HBVDNA定量与HBVM及病理关系的探讨

目的 :探讨血清HBVDNA水平与HBV标志物 (HBVM )表现模式、肝功能状态、肝脏病理的关系。方法 :对 467例乙肝肝炎病毒单纯感染的患者进行HBVDNA定量检测 ,同时检测其他乙型肝炎病原学标志物及肝功能 ,并对其中 80例患者进行肝穿刺病理检查。结果 :血清HBVDNA水平与HBVM表现模式有关 ,HBsAg与HbeAg的存在影响HBVDNA水平变化。血清谷丙转氨酶水平与HBVDNA水平无明显相关。 80例患者HBVDNA定量与肝脏病理学分析 ,HBVDNA定量与肝组织炎症及纤维化无明显相关。结论 :HBVDNA定量检测特异性强 ,灵敏度高 ,与HbeAg阳性有明显相关 ,是乙型肝炎诊断和观察抗病毒治疗的一项可靠的判断指标。但与肝组织炎症及纤维化无明显相关     

HCV感染者/慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA含量、外周血淋巴细胞Fas抗原及ALT浓度的相关性

目的探讨HCV感染者/慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA含量、外周血淋巴细胞(PBL)Fas抗原及ALT浓度的相关性。方法对本站献血群中60例HCV感染者,50例正常者及来自本市一院56例慢性丙型肝炎患者,采用荧光定量PCR检测其HCV-RNA含量,用FACSCalibur流式细胞仪为检测外周血淋巴细胞Fas抗原,用生化自动分析仪检测ALT浓度。结果本研究116例HCV感染者/慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA含量与PBLFas抗原表达率、ALT异常率呈正相关(γ值分别为0.94、0.96,均P﹤0.01),但与ALT浓度无相关性γ=0.38,0.03,无统计学意义(P均>0.05),ALT浓度差异无统计学意义(均P>0.05),ALT异常率差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论HCV感染者/慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA含量与外周血淋巴细胞Fas抗原呈正相关、与ALT异常率相关性显著,外周血淋巴细胞Fas抗原与ALT异常率相关性显著。     

基因芯片技术检测HBV DNA及拉米夫定耐药株的应用研究

目的 :研究基因芯片技术检测 HBV DNA及拉米夫定耐药株在临床应用中的特异性、实用性。方法 :利用基因芯片法、双脱氧测序法分别对 4 3例服用拉米夫定且 HBV DNA仍为阳性的乙型肝炎 (乙肝 )患者及 10例非乙肝患者的血清进行 HBV DNA和 P区 5 2 8、5 5 2、5 5 5突变位点检测、对比。结果 :两种方法检测 HBV DNA10 0 %相符 ;检测拉米夫定耐药突变株 12 4个位点结果相符 ,5个位点结果不相符 (P >0 .0 5 ) ,提示两种方法检测HBV DNA及 P区 5 2 8、5 5 2、5 5 5突变位点阳性率相等。结论 :利用基因芯片技术检测 HBV DNA及拉米夫定耐药株 ,其特异性可与 DNA测序媲美 ,在混合株检测方面比 DNA测序有更大的优势。其方法简便 ,能大量地对临床标本进行检测 ,可作为临床常规检测手段。