莲NnOMT和NnNMT基因家族的鉴定与分析

目的 莲苄基异喹啉生物碱（BIAs）的生物合成途径的解析具有重要的理论和经济价值，为了更好地促进莲BIAs生物合成途径的解析，本研究对莲氧甲基转移酶（NnOMT）、莲氮甲基转移酶（NnNMT）基因家族进行鉴定和生物信息学分析。方法 在莲全基因组的基础上，利用UniPort、美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库对莲NnOMT、NnNMT基因家族进行鉴定，分析其理化性质及亚细胞定位。利用TBtools、MEME、MEGA 11.0、FigTree 1.4.4等工具对前期鉴定出的NnOMT、NnNMT基因的系统发育、序列特征、基因结构、功能注释、顺式作用元件等进行分析。结果 共鉴定出61个莲NnOMT、NnNMT基因，编码的氨基酸数目介于168~580 aa，等电点范围为4.76~9.16，相对分子质量为18 699.52~64 934.53 Da，大部分表现为酸性且多为亲水蛋白，含有10个保守基序；京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析共富集到12个通路，包括新陈代谢、异喹啉生物碱生物合成、苯丙烷的生物合成等；基因本体（GO）富集结果可视化显示，61个莲NnOMT、NnNMT基因共注释到32个类别，其中包括16项分子功能，如谷氨酸合成酶还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）活性、外肽酶活性，以及16项生物过程，如四氯化碳代谢过程、厌氧四氯化碳代谢过程、对外源生物刺激的反应。在莲NnOMT、NnNMT基因的启动子区存在多种顺式作用元件，主要为启动子和增强子区响应元件、光响应和茉莉酸甲酯响应元件。结论 该研究基于莲的基因组数据对61个莲NnOMT、NnNMT基因进行了全面的生物信息学分析，为莲NnOMT、NnNMT基因家族的基因结构和功能研究奠定了基础，并为莲BIAs的生物合成途径解析提供了参考。     

人参调控神经递质代谢的研究进展

人参具有大补元气、安神益智等功效，其主要有效成分为三萜皂苷、多糖和多肽等，可用于中枢神经系统疾病的治疗。人参化学成分及其活性代谢物对氨基酸类、单胺类和乙酰胆碱等神经递质的体内代谢过程等具有广泛的调节作用，其作用途径包含调节脑部代谢微环境、透过血脑屏障直接作用于神经元以及调节神经-内分泌网络等。在人参“安神益智”的理论指导下，结合人参化学成分和神经递质的体内代谢过程综述了人参调节大脑神经递质代谢的主要作用机制，以期为人参的深入研究提供依据。     

基于PI3K/Akt/Beclin-1信号通路探析积雪草苷对OGD/R诱导损伤H9C2心肌细胞的影响

观察积雪草苷(asiaticoside,Ass)对氧糖剥夺/再复(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤的H9C2心肌细胞的增殖、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)/Bcl-2同源结构域蛋白(Beclin-1)信号通路的干预作用,探讨其对H9C2心肌细胞的影响。选用H9C2心肌细胞作为研究对象,采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)法检测H9C2细胞活性。将H9C2细胞分成对照组、OGD/R组、Ass低浓度组(10μmol·L^-1)、Ass高浓度组(80μmol·L^-1)和Ass高浓度+氯喹组(80μmol·L^-1+50μmol·L^-1)。对照组于正常条件下培养,其余各组在处理后进行氧糖剥夺4 h/再复2 h。酶联免疫吸附法检测细胞上清液中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine ki...     

多基原郁金的性状、显微及气味差异性研究

目的 对不同基原的郁金进行性状特征、显微特征和气味信息进行差异分析，建立对不同基原郁金的快速判别方法。方法 利用感官总结比较郁金的性状，运用显微成像系统观察比较郁金的横切面及粉末特征，同时采用电子鼻对4种郁金进行挥发性成分分析。结果 4种郁金的性状、横切面及粉末鉴别特征差异较为明显。结合特征雷达图分析、主成分分析、气味综合值分析对4种郁金检测区分效果显著。结论 本研究结合性状、显微、气味特征，建立郁金基原快速判别方法，对临床用药品质提供保障。     

同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀及其活性和毒性代谢产物的方法建立与应用

目的 建立同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀（ATV）及其活性代谢产物2-羟基阿托伐他汀酸（2-HAT）、4-羟基阿托伐他汀酸（4-HAT）和毒性代谢产物阿托伐他汀内酯（ATL）的分析方法并应用于药代动力学研究。方法 采用液相色谱-串联质谱（LCMS/MS）法进行分析。采用一步沉淀法对血浆样品进行处理（血浆样品经酸化调节pH值防止构型转化），采用梯度洗脱分析样品，分析时间为5 min；采用电喷雾离子源，以多反应监测模式进行正离子检测，ATV及其代谢产物2-HAT、4-HAT、ATL及内标匹伐他汀的定量离子对的质荷比（m/z）分别为559.3→440.2、575.2→440.3、575.0→440.2、540.9→448.2和422.2→290.0。对分析方法进行全面的方法学考察后测定ATV及其代谢产物2-HAT、4-HAT、ATL的浓度，并采用WinNonlin 6.1的非房室模型计算ATV及其代谢产物的药代动力学参数。结果 方法学考察结果表明，空白血浆的内源性物质不干扰待测成分的测定，标准曲线线性关系良好，ATV、2-HAT、4-HAT和ATL的定量下限分别为0.5、0.5、0.25、0....     

菘蓝查尔酮异构酶基因的克隆与体外酶活鉴定

查尔酮异构酶是高等植物黄酮类化合物生物合成中的关键限速酶，决定了植物体内黄酮类化合物的产生。该研究从菘蓝的不同部位中提取RNA,反转录为cDNA,并设计带有酶切位点的特异性引物，克隆得到1个菘蓝查尔酮异构酶基因，命名为IiCHI。该基因全长756 bp,含有1个完整的开放阅读框，编码251个氨基酸。通过同源比对显示IiCHI与拟南芥Arabidopsis thaliana的CHI蛋白亲缘关系较近，并且具有查尔酮异构酶典型的活性位点，系统发育树分析显示IiCHI归属于Ⅰ型CHI。构建原核表达载体pET28a-IiCHI并进行诱导表达，纯化后获得IiCHI的重组蛋白。体外酶活性检测实验显示IiCHI重组蛋白可以把柚皮素查尔酮催化生成柚皮素，而不能把异甘草素催化生成甘草素。实时荧光定量PCR结果显示菘蓝中IiCHI在地上部分的表达量明显高于地下部分，其中地上部分在花中表达量最高，叶与茎次之，在地下部分的须根、根的皮部与木质部几乎不表达。该研究为进一步探讨菘蓝中查尔酮异构酶的功能及其在黄酮类化合物的生物合成研究中提供了参考。     

龙牙楤木化学成分与药理作用研究进展

龙牙楤木是五加科楤木属植物，在我国有着悠久的使用历史，广泛用于治疗肝炎、风湿性关节炎等多种疾病。龙牙楤木的化学成分多样，包括三萜皂苷、多糖类、甾体及其苷类、生物碱、氨基酸、挥发油等，其中研究最多的是皂苷类和多糖类成分，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、保护心脏、保肝护肝等作用。笔者综述了龙牙楤木的化学成分及药理作用研究进展，并对该植物的潜在药用价值和研究不足之处展开讨论，以期为其进一步开发利用提供参考依据。     

至宝三鞭丸的定量“制剂质量标志物”研究

在至宝三鞭丸的定性“制剂质量标志物”的基础上,筛选出其定量“制剂质量标志物”,并评价至宝三鞭丸多个批次制剂间的含量一致性。建立同时测定至宝三鞭丸中34种化学成分的HPLC-MS/MS方法,分析16批次制剂中各成分含量的一致性,并采用一法通用策略分析各成分在中药制剂-血浆-脑组织-脑脊液的移行情况。方法经线性范围、加样回收率、精密度、稳定性和重复性等考察确证适合至宝三鞭丸中以上成分的测定。加样回收率为85.10%～105.07%,精密度RSD为1.37%～4.58%,重复性RSD为3.00%～12.45%。至宝三鞭丸中各成分含量均低于1 mg·g-1,含量和日用剂量耐斯糖最高,其次为松果菊苷、芍药苷、蛇床子素和丹皮酚;系统聚类分析结果显示至宝三鞭丸普通制剂之间的含量一致性较好;松果菊苷、毛蕊花糖苷、远志山酮Ⅲ、β-蜕皮甾酮、蛇床子素、23-乙酰泽泻醇B、甘草苷和甘草酸等的含量在批次间的差异较小。主成分分析结果显示,小檗碱、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、松脂醇二葡萄糖苷、细叶远志皂苷等的含量是影响批次间分组的主要因素。动物实验结果显示,蛇床子素、丹皮酚、甘草苷可被吸收入血,并通过血脑屏障进...     

冠心病急性心肌梗死气阴两虚证动物模型的构建与评价

目的 探索睡眠剥夺（SD）复合异丙肾上腺素（ISO）建立冠心病急性心肌梗死气阴两虚证大鼠模型的构建和评价方法。方法 将40只SD大鼠分为正常组、SD组、ISO组、SD+ISO组。正常组不予处理，SD组使用改良多平台水环境法连续睡眠剥夺96 h，ISO组皮下注射ISO 100 mg·kg^-1，隔日1次，共2次。SD+ISO组在连续睡眠剥夺72、96 h时注射ISO 100 mg·kg^-1。采用小动物超声心动图检测大鼠心功能；生化分析法检测血清肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、心肌肌钙蛋白T（cTnT）水平；苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织病理变化；通过一般状态及体质量、抓力、体温、旷场实验、血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）及cAMP/cGMP、舌象红（R）、绿（G）、蓝（B）值及脉搏幅度观察气阴两虚证的证候指标变化；酶联免疫吸附测定法（EILSA）检测大鼠血清白细胞介素-18（IL-18）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、氧化应激超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、四碘甲状腺原氨酸（T4）及白细胞分化抗原4（CD4）、白细胞分化抗原8（CD8）水平。结果 疾病指标方面，与正常组比较，ISO组和SD+ISO组心功能降低（P<0.01），各模型组心肌酶升高（P<0.01），ISO组和SD+ISO组心肌组织病理损伤明显。证候指标方面，与正常组比较，SD组和SD+ISO组的各时间点体质量下降（P<0.01）、ISO组48、72 h体质量下降（P<0.05，P<0.01），各模型组抓力减弱，舌面R、G、B值降低（P<0.01），SD组爪温、肛温升高（P<0.01），各模型组不动时间延长（P<0.01），总路程和进入中心区次数下降（P<0.01），平均速度减缓（P<0.05，P<0.01）；cAMP、cGMP升高（P<0.05，P<0.01），SD+ISO组cAMP/cGMP增加（P<0.01），SD组和SD+ISO组脉搏幅度降低（P<0.01）。血清学指标方面，与正常组比较，ISO组和SD+ISO组IL-18、TNF-α、SOD、MDA升高（P<0.01）；各模型组的CRF、ACTH、CORT、T3、T4、CD4、CD8升高（P<0.05，P<0.01）。结论 连续睡眠剥夺96 h复合大剂量ISO能够成功建立冠心病急性心肌梗死气阴两虚证大鼠模型，以西医疾病指标、组织病理形态学、中医宏观指标及血清学指标为模型评价体系。