高压喷射载VEGF165、bFGF凝胶促缺血心肌血管新生的实验研究

目的探讨高压喷射心肌内给药的可行性以及载VEGF165、bFGF温敏型壳聚糖水凝胶对缺血心肌的促血管新生和心肌保护作用。方法健康杂种犬32只,随机均分为单纯心肌梗死(SMI)组,高压喷射生理盐水(NS)组,高压喷射温敏型壳聚糖水凝胶(Chitosan)组,高压喷射载VEGF165、bFGF温敏型壳聚糖水凝胶(Chitosan+VEGF165+bFGF)组。结扎左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型后,SMI组直接关胸,NS组、Chitosan组和Chitosan+VEGF165+bFGF组在结扎线以下左室前壁行高压喷射心肌内给药8～10次,1次/cm2。术后6周取材行组织学、免疫组化检查并计算心肌梗死面积,处死动物前行血流动力学检测。结果术后6周心肌内仅有少量壳聚糖水凝胶样物质残留,其周围无明显的炎性细胞浸润;与SMI组比较,Chitosan组和Chitosan+VEGF165+bF-GF组梗死区新生血管数量增加(P<0.05),梗死面积缩小(P<0.05),左室舒张末压和左室内压最大下降速率明显改善(P<0.05)。结论高压喷射心肌内给药安全、可行;载VEGF165、bFGF温敏型壳聚糖水凝胶心肌内注射能促进...     

血浆脂肪甘油三酯脂酶水平与肥胖、胰岛素抵抗相关因素的关系研究

目的 探讨初诊2型糖尿病(T2DM)伴肥胖患者血浆脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)水平变化及其与体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)、血脂、血糖、血浆胰岛素水平等的关系.方法 纳入T2DM患者及健康体检者共161例,分为4组:初诊T2DM患者(T2DM)组、初诊T2DM伴肥胖患者(T2DM-ob)组、正常糖耐量伴肥胖者(NGT-ob)组和正常对照(NGT)组.再根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)中位数将上述161例患者分为胰岛素抵抗(IR)组及胰岛素敏感(IS)组.采用酶联免疫法(ELISA)测定上述受试者血浆ATGL水平,并分析其与BMI、WHR、血脂、血糖、血浆胰岛素、HOMA-IR等的关系.结果 4组间血浆ATGL水平差异均无统计学意义,但4组中T2DM-ob组、T2DM组ATGL浓度分别与NGT-ob组、NGT组比较有降低的趋势.IR组ATGL水平(61.7±21.6μg/L)明显低于IS组(75.3±22.9μg/L,P<0.01).血浆ATGL水平与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈明显正相关(r=0.229,P<0.01),而与空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR呈明显负相关(r=-0.199,P<0.05;r＝-0.234,P<0.01).多元回归分析结果表明,HDL-C、BMI、体内脂肪百分比(FAT%)均为影响血浆ATGL水平的独立相关因素.结论 血浆ATGL水平的改变与肥胖相关因素和IR等有关,并可能参与了肥胖、IR和T2DM的发生和发展.     

65例慢性粒细胞白血病染色体核型分析及其临床意义

目的:应用细胞遗传学分析方法研究65例慢性粒细胞白血病(CML)染色体异常特征及其临床意义.方法:采用短期培养法制备骨髓或外周血细胞染色体,以G显带对65例慢性粒细胞白血病患者进行染色体核型分析,并观察接受治疗后患者的临床转归.结果:65例慢性粒细胞白血病患者中,61例检出典型Ph染色体(93.85%) ,6例出现染色体数目异常(9.23%),3例出现复杂变异Ph易位(4.62%),4例出现附加染色体异常(6.15%),染色体数目异常者预后较差.结论:CML患者进行染色体分析对于疾病的临床治疗、预后判断具有重要意义.     

丙酮酸乙酯抑制脓毒症时HMGB1释放的分子机制

【目的】 探讨丙酮酸乙酯(EP)抑制脓毒症巨噬细胞表达和释放HMGB1的相关分子机制?【方法】将小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7分为LPS和LPS+ EP组,分别采用100 ng/mL LPS和100 ng/mL LPS+ 5 mmol/L EP刺激,于刺激后不同的时间点,Western blot检测细胞总蛋白内p-p38MAPK?CBP的含量变化以及胞质和胞核内NF-κB的含量;用免疫细胞化学?激光共聚焦显微镜观察培养细胞内p-p38MAPK?NF-κB和CBP的变化;Real-time PCR检测培养细胞HMGB1的mRNA水平,ELISA检测培养上清HMGB1的蛋白含量?【结果】 LPS和LPS+ EP刺激后2~6 h,细胞内p-p38MAPK蛋白含量逐渐增加,但LPS+ EP组p-p38MAPK蛋白含量明显低于LPS组;NF-κB在细胞质内的含量逐渐减少,而在细胞核内的含量逐渐增多,而LPS+ EP组NF-κB从胞质到胞核的移位明显弱于LPS组;细胞内CBP的蛋白含量逐渐增加,但LPS+ EP组明显低于LPS组?随着p-p38MAPK?NF-κB和CBP等蛋白的变化,LPS和LPS+ EP刺激后24?36和48 h,LPS+ EP组细胞内HMGB1 mRNA表达比LPS组明显减少;在LPS和LPS+ EP刺激后18~48h,LPS+ EP组培养上清中HMGB1蛋白含量明显低于LPS组?【结论】 EP通过抑制单核-巨噬细胞内的信号分子p-p38MAPK?NF-κB?和 CBP的表达,从而抑制LPS诱导单核-巨噬细胞表达和释放HMGB1?     

近红外七甲川菁染料复合物PZ-1009在卵巢癌成像的初步探索

目的：初步探索近红外荧光染料复合物PZ-1009在肿瘤成像中的应用价值。方法成功建立裸鼠肿瘤模型后,尾静脉注射复合物（10 nmoL/20 g）,采用活体显像仪在不同时间点进行图像采集,在荧光强度最高时间点处死裸鼠,取肿瘤组织及重要器官成像。结果注射1h后肿瘤部位即出现强烈的荧光信号,采用图像软件测得6 h时信号强度最大,直至48 h肿瘤部位仍可见少量荧光信号,且肿瘤任何时间点的荧光信号强度都高于正常部位（ P＜0．05）;注射染料后6 h处死裸鼠,取肿瘤及主要器官进行显像,观察到除肠道外各器官都有较低荧光信号,但肿瘤仍为最强。结论近红外七甲川菁染料MHI-148与其他物质耦合后的新物质PZ-1009仍具有明显的肿瘤靶向性,为后期的多模态探针制备奠定了良好的基础。     

低强度超声促进剖宫产术后子宫复旧的研究

目的观察低强度超声对剖宫产术后子宫复旧的影响。方法随机选择122例剖宫产术后患者,其中67例为治疗组、55例
为对照组,治疗组于剖宫产术后24 h用低强度超声治疗仪对患者子宫覆盖区进行治疗,1 次/d,30 min/次,连续3 d;对照组自然
恢复,临床观察两组患者治疗前后宫底下降程度、恶露情况。结果治疗组宫底下降高度明显优于对照组（P<0.05）,产后30 d阴
道流血干净比率明显高于对照组（P<0.05）,子宫复旧不良的发生率明显低于对照组（P<0.05）。结论低强度超声治疗可促进剖
宫产术后子宫康复。
     

不可逆性电穿孔介导HPV16 E6 shRNA干扰质粒对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响

目的:探讨利用治疗剂量脉冲电场产生不可逆电穿孔(IRE)介导HPV16 E6 shRNA干扰质粒进入细胞的可行性,阐明二者共同作用对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响及其作用机制。方法:将HPV16 E6基因特异性干扰序列插入pGenesil-1质粒,构建HPV16 E6 shRNA真核表达载体,将10个电压为800 V、脉宽100 μs、频率1 Hz的IRE作用于SiHa细胞与HPV 16 E6 shRNA干扰质粒的混悬液,根据处理因素组合,分为空白对照组、IRE处理组、pGenesil-N组、pGenesil-N+IRE组、pGenesil-E6组和pGenesil-E6+IRE组。在荧光显微镜下观察SiHa细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达,计算GFP表达效率;RT-PCR法检测HPV 16 E6 mRNA表达水平,Western blotting法检测HPV16 E6蛋白、P53及PCNA蛋白表达水平,CCK-8法检测各组SiHa细胞增殖能力的变化。结果:成功构建HPV16 E6 shRNA真核表达载体,IRE处理后24 h细胞即可见到绿色荧光;与IRE组比较,pGenesil-E6+IRE组E6 mRNA表达水平下降(P<0.05),E6蛋白表达水平降低(P<0.05),P53蛋白表达水平增高(P<0.05),PCNA表达水平下降(P<0.05);CCK-8法检测,与pGenesil-E6组比较,pGenesil-E6+IRE组细胞增殖活性下降更明显(P<0.05)。结论:治疗剂量的IRE可介导外源基因进入细胞,二者联合作用能明显抑制宫颈癌SiHa细胞增殖。     

非小细胞肺癌中TRIM25和PKM2蛋白表达

目的检测临床非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer, NSCLC）病人组织中TRIM25、PKM2蛋白的表达情况,探讨它
们的关联性及意义。方法应用组织免疫荧光法,检测TRIM25、PKM2 蛋白在60 例NSCLC组织和20 例癌旁边正常肺组织
（>5 cm）表达情况,同时运用Western blotting方法检测TRIM25、PKM2在10例新鲜NSCLC组织中表达情况,并结合标本的临
床病理特征进行分析。结果TRIM25在60例非小细胞肺癌组织中的阳性表达率45%,而20例癌旁正常肺组织中仅为10%（P=
0.005）。TRIM25在腺癌中阳性表达率为28.6%,而在鳞癌中为59.4%（P=0.017）。TRIM25被发现与TNM分期、淋巴结转移之
间呈正相关性（P<0.05）。PKM2在60例非小细胞肺癌组织中表达率为73.3%,而在20例癌旁正常肺组织中为30%（P=0.001）。
PKM2 在腺癌的表达为57.1%,而在鳞癌中为87.5%（P=0.008）。通过关联性分析TRIM25 和PKM2 存在相关性（P=0.026）。
Western blot结果表明当TRIM25表达升高时PKM2表达增长放缓。结论TRIM25、PKM2蛋白可能同时参与到NSCLC发生发
展过程中,存在负相关性。
     

四君子汤加味对肺癌化疗骨髓抑制的作用机制

目的:探讨四君子汤加味对肺癌化疗骨髓抑制气阴两虚证的疗效及对血清中粒-巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)水平的影响。方法:将中晚期肺癌患者104例患者,参照数字表法随机分为对照组和观察组各52例。对照组采用化疗方案(TP)。观察组在对照组治疗的基础上给予四君子汤加味,化疗第1天开始内服,2次/d,化疗后继续服用1周。比较两组骨髓抑制程度、白细胞减少、中医症状积分及近期临床疗效。测定两组患者外周血T细胞亚群CD3+,CD4+及CD8+水平变化。记录两组患者重组人粒细胞刺激因子注射液(rh G-CSF)使用量;检测两组患者血清中GMCSF和G-CSF水平。结果:治疗后1周,观察组中性粒细胞、血红蛋白、血小板及白细胞数量均显著高于对照组(P0.01)。观察组的中性粒细胞和白细胞减少发生率均明显低于对照组(P0.05);治疗后1周,观察组白细胞减少、中医症状积分均明显低于对照组(P0.01);观察组的近期总有效率为86.27%,显著高于对照组66%(P0.05)。观察组患者治疗后1周CD3+,CD4+均显著高于对照组,CD8+低于对照组(P0.01)。观察组rh G-CSF使用量明显少于对照组。观察组治疗后1周血清中GM-CSF和G-CSF水平均明显高于对照组(P0.01)。结论:四君子汤加味辅助用于中晚期肺癌化疗气阴两虚证患者,能改善骨髓抑制程度,降低骨髓抑制发生率,提高临床疗效,提高免疫功能和血清中GM-CSF和G-CSF水平可能是其疗效途径之一。     

Hath1在非黏液性结肠腺癌发病中的抑癌基因作用

目的：探讨Hath1基因在结肠腺癌发病中的潜在作用。方法：从48例非黏液性结肠腺癌患者的标本中取材,石蜡切片染色后观察正常结肠黏膜、癌旁黏膜和结肠腺癌组织中杯状细胞数量的变化;用定量实时逆转录PCR、免疫组织化学和Western blotting分别检测这3种组织中Hath1基因和Muc2基因的mRNA和蛋白表达。将Hath1基因转化至HT29人结肠癌细胞中,然后随机挑选3个转化了Hath1基因的克隆,用定量实时逆转录PCR检测Hath1和Muc2的mRNA表达,用Western blotting检测Hath1、Muc2、cyclin D1和p27蛋白的表达;通过软琼脂克隆形成实验和裸鼠移植实验,观察将Hath1基因转化到HT29细胞后, HT29细胞增殖能力的变化。结果：在非黏液性结肠腺癌组织中未发现杯状细胞,并且Hath1基因和Muc2基因的mRNA和蛋白表达均显著下调（P<0.05）;在HT29 细胞中,Hath1基因下调cyclin D1蛋白的表达（P<0.05）,上调p27（P<0.05）和Muc2（P<0.01）蛋白的表达;过表达Hath1基因的HT29细胞在体外的克隆形成显著受到抑制（P<0.01）,移植至裸鼠时移植肿瘤的体积显著缩小（P<0.01）。 结论：Hath1基因表达的下调可能与非黏液性结肠腺癌的发生有关,Hath1基因在非黏液性结肠腺癌的发生中可能起着抑癌基因的作用。