先天性心脏病患者外周血中Akt1基因PH结构域的突变

目的 探讨 Akt1基因与先天性心脏病(CHD)发病之间的关系.方法 应用PCR-DNA测序技术在18例先天性心脏病患儿外周血中筛查蛋白激酶1(Akt1)基因PH结构的突变情况.结果 18例样本中,未见Akt11编码区的突变,但在Akt1内含子部分筛查到1个单核苷酸基因多态性(SNPs)位点rs3730358,Western blot技术分析显示伴有该SNP的样本中,Akt1蛋白表达水平降低.结论 Akt1基因SNPs影响Akt1的蛋白表达水平,可能与CHD的发病有关.     

Pax6突变杂合子小鼠糖代谢异常的分子机制

目的探讨Pax6突变杂合子小鼠是否存在糖代谢异常,并对其分子机制进行研究。方法采用腹腔注射葡萄糖耐量试验（IPGTT）,观察Pax6突变杂合子小鼠血糖和胰岛素原／总胰岛素比值的变化,胰岛素耐量试验（ITT）分析胰岛素敏感性的变化;小鼠离体胰岛采用定量PCR和Western印迹分析检测激素原转化酶1（PCI）表达;小鼠胰岛8细胞系用于染色质免疫共沉淀Ch1P分析以确定PAX6蛋白能否与Pc1基因启动子区域相结合,进而采用荧光素酶报告分析观察Pax6突变对Pc1基因表达的影响。结果与野生型小鼠相比,Pax6突变杂合子小鼠在6月龄时存在明显的负荷后高血糖,胰岛素敏感性未见显著变化,胰岛素原／总胰岛素比值不适当升高早于负荷后高血糖,类似人类Pax6基因突变的无虹膜症患者中糖代谢异常的表型特征。Pax6突变杂合子小鼠胰岛中PCI表达水平显著降低。PAX6蛋白可直接结合到Pc1基因启动子区域,野生型PAX6可上调Pc1表达,而突变型PAX6则无此作用。结论PAX6通过PCI介导的胰岛素原剪切加工调控葡萄糖代谢,这是PAX6的一种新功能。PCI缺乏引起的胰岛素原剪切加工缺陷是Pax6突变导致葡萄糖代谢异常的最重要分子机制之一。     

重组人红细胞生成素对大鼠急性心肌梗死区域及缺血区毛细血管密度的影响

目的：应用重组人红细胞生成素治疗大鼠急性心肌梗死，观察其对心肌梗死区域细胞凋亡以及缺血区毛细血管密度变化和心功能的影响。方法：实验于2004-06／2005—06在南京大学模式动物研究所完成。选取健康雄性Wistar大鼠16只，随机分为急性心肌梗死组、重组人红细胞生成素组，8只／组。①两组大鼠均结扎左冠前降支建立急性心肌梗死模型，局部心肌变紫色、室壁膨出为模型成功标志。②重组人红细胞生成素组围手术期每天腹腔注射重组人红细胞生成素3000IU／kg，共3d（即手术前1d、手术当天、手术后1d），在术后第14，15，16天以同等剂量再连续注射3d。急性心肌梗死组术后各时间点给予等量生理盐水。③左冠状动脉前降支结扎术后3周末测定缺血区毛细血管密度、Bcl-2和Bax的水平，2d及3周末采用二维超声心动图检查两组大鼠心腔结构及心功能。结果：实验选取大鼠16只，全部进入结果分析。④两组术后3周末毛细血管密度测量结果：与急性心肌梗死组比较，重组人红细胞生成素组毛细血管密度明显增加[（10．4&;#177;1．5），（6．3&;#177;0．7）个／视野，P〈0．05]。②两组术后3周末心肌组织Bcl．2和Bax蛋白的表达：与急性心肌梗死组比较，重组人红细胞生成素组Bax表达明显减弱[（0．1465&;#177;0．0138），（0．1248&;#177;0．0098）A，P〈0．05]，而Bcl-2表达则明显增强[（0．1030&;#177;0．0056）．（0．1163&;#177;0．0050）A，P〈0．05]。③两组术后3周末心功能各项指标的变化：与急性心肌梗死组比较，重组人红细胞生成素组左室舒张末期内径、左室收缩末期内径均显著降低[（6．25&;#177;0．32），（5．51&;#177;0．35）mm；（4．22&;#177;0．21），（3．45&;#177;0．24）mm；P均〈0．05]，左室射血分数明显升高[（69．08&;#177;2．23）％，（75．24&;#177;3．64）％，P〈0．05]。结论：重组人红细胞生成素能减少缺血区心肌细胞凋亡及促进缺血区毛细血管的生成，从而改善和提高心肌梗死大鼠的心脏功能。     

重组人红细胞生成素对大鼠急性心肌梗死区域及缺血区毛细血管密度的影响

目的:应用重组人红细胞生成素治疗大鼠急性心肌梗死,观察其对心肌梗死区域细胞凋亡以及缺血区毛细血管密度变化和心功能的影响。方法:实验于2004-06/2005-06在南京大学模式动物研究所完成。选取健康雄性Wistar大鼠16只,随机分为急性心肌梗死组、重组人红细胞生成素组,8只/组。①两组大鼠均结扎左冠前降支建立急性心肌梗死模型,局部心肌变紫色、室壁膨出为模型成功标志。②重组人红细胞生成素组围手术期每天腹腔注射重组人红细胞生成素3000IU/kg,共3d(即手术前1d、手术当天、手术后1d),在术后第14,15,16天以同等剂量再连续注射3d。急性心肌梗死组术后各时间点给予等量生理盐水。③左冠状动脉前降支结扎术后3周末测定缺血区毛细血管密度、Bcl-2和Bax的水平,2d及3周末采用二维超声心动图检查两组大鼠心腔结构及心功能。结果:实验选取大鼠16只,全部进入结果分析。①两组术后3周末毛细血管密度测量结果:与急性心肌梗死组比较,重组人红细胞生成素组毛细血管密度明显增加犤(10.4±1.5),(6.3±0.7)个/视野,P<0.05犦。②两组术后3周末心肌组织Bcl-2和Bax蛋白的表达:与急性心肌梗死组比较,重组人红细胞生成素组Bax表达明显减弱犤(0.1465±0.0138),(0.1248±0.0098)A,P<0.05犦,而Bcl-2表达则明显增强犤(0.1030±0.0056),(0.1163±0.0050)A,P<0.05犦。③两组术后3周末心功能各项指标的变化:与急性心肌梗死组比较,重组人红细胞生成素组左室舒张末期内径、左室收缩末期内径均显著降低犤(6.25±0.32),(5.51±0.35)mm;(4.22±0.21),(3.45±0.24)mm;P均<0.05犦,左室射血分数明显升高犤(69.08±2.23)%,(75.24±3.64)%,P<0.05犦。结论:重组人红细胞生成素能减少缺血区心肌细胞凋亡及促进缺血区毛细血管的生成,从而改善和提高心肌梗死大鼠的心脏功能。     

伴大细胞转化的蕈样肉芽肿24例临床病理及免疫表型分析

目的:探讨伴大细胞转化的蕈样肉芽肿（TMF）的临床病理特征及预后。方法:回顾性分析2014—2020年中国医学科学院皮肤病医院诊治的24例TMF患者的临床病理资料及其中11例患者的16份外周血样本流式细胞术检测结果。结果:24例患者中男11例,女13例,诊断TMF时年龄平均为50.0（18~77）岁,早期（9例）及肿瘤...     

视黄酸对乙醇致斑马鱼胚胎心脏发育畸形的影响

目的探讨在斑马鱼胚胎发育中外源性视黄酸(RA)是否能逆转乙醇的毒性。方法采用原位杂交方法检测乙醇和RA共同处理、二者单独处理斑马鱼胚胎后nkx2.5基因的表达及DEAB(视黄醛脱氢酶的抑制剂)与乙醇共同处理及单独处理后nkx2.5基因的表达。采用RT-PCR的方法检测gata5、gata6、raldh2基因的表达,并检测raldh2基因敲除后gata5、gata6的表达变化。结果将RA和乙醇共同处理斑马鱼胚胎后,胚胎发育畸形更加明显,在受精后24 h(24 hpf)nkx2.5的原位杂交结果显示双侧心脏原基不能融合成单个原始心管;乙醇单独处理胚胎影响心脏的环化过程,且nkx2.5的表达上调;乙醇与RA共同处理后,gata5、gata6及raldh2的表达较正常对照组轻微上调,但差异无统计学意义,而敲除raldh2基因后,gata5、gata6的表达有显著下调;DEAB处理胚胎后,原始心管融合正常;300 mmol.L-1乙醇处理后,心脏原基不能融合成原始心管,与200 mmol.L-1乙醇及RA共同处理的表型相似。结论RA和乙醇共同处理后,通过影响原始心管融合而加重心脏发育的畸形,这种现象可能是因为乙醇代谢率...     

小檗碱干预Wnt通路抑制Apc(Min/+)小鼠息肉生长的研究

目的 观察小檗碱防治家族性腺瘤性息肉病(FAP)动物模型Apc(Min/+)小鼠息肉生长的疗效并探讨其可能的分子机制.方法 将16只4周龄Apc(Min/+)小鼠均分为对照组(不予处理)和小檗碱组(剂量为150 mg· kg-1·d-1).12周后处死小鼠,记录小鼠肠道息肉数量、大小及分布.免疫组织化学染色法检测小鼠肠道息肉中增殖细胞核抗原(PCNA)、β-链蛋白和细胞周期素D1的表达情况.Western印迹法检测小鼠肠道细胞周期素D1的表达情况.两组间比较行独立样本t检验.结果 小檗碱组小肠及结肠息肉总数较对照组减少66 ％(10.38±1.85比30.50±1.73,t=16.727,P＜0.01).小檗碱组息肉最大径[(1.08±0.65) mm]小于对照组[(1.54±0.62) mm,t=2.114,P=0.041].小檗碱组小鼠肠道息肉中PCNA阳性细胞比例(44.60％±2.88％)较对照组(65.80％±3.27％)减少32％(t=10.875,P＜0.01),β-链蛋白染色异常细胞比例(43.20％±1.63％)较对照组(63.00％±3.08％)减少31％(t=13.956,P＜0.01),细胞周期素D1阳性细胞比例(24.80％±3.11％)较对照组(54.40％±3.78％)减少54％(t=13.510,P＜0.01).小檗碱组肠道细胞周期素D1蛋白表达水平低于对照组.结论 小檗碱可通过干预Wnt通路抑制Apc(Min/+)小鼠肠道息肉的生长,可能成为FAP化学预防的备选药物.     

Ras/Raf/MAPK信号通路与先天性心脏病发生学的研究进展

Ras/Raf/MAPK信号通路参与调控一系列重要的细胞活动,在细胞生长、发育、增殖、分化以及细胞间功能同步及细胞恶性转化等多种生理、病理过程中起重要作用。该通路成员的体细胞突变将会引起肿瘤的发生;生殖细胞突变将会影响胚胎发育过程,从而引起一系列先天性心脏病的发生,例如努南综合征等。     

Duchenne型肌营养不良症药物筛选模型的构建

建立一种能方便检测utrophin表达的方法，制备筛选Duchenne肌营养不良症治疗药物的细胞模型。将Utrophin基因上18号和19号外显子及其周围约6．7kb的DNA，分三段克隆下来，并将TETC报告基因插入插入片段I（其中的18号外显子）中，构建打靶基因。经过电转化的方法，将测序正确的打靶基因转染到C2C12细胞株中。经G418筛选，FlAsH荧光染色，PCR扩增鉴定得到正确同源重组的细胞株。为筛选utrophin表达促进剂建立了细胞模型，为筛选DMD治疗药物打下基础。