异黄酮类化合物F11抗癌活性的实验研究

目的 研究经结构修饰后的异黄酮类化合物F11是否具较好的体外、体内抗癌活性.方法 采用MTT法,以5,7,4'-三羟基异黄酮(genistein, GEN)作为对照,研究化合物F11对Hela细胞的抗增殖作用;采用荷瘤裸鼠模型,以GEN和环磷酰胺作为对照,研究化合物F11在体抗癌效应.结果 MTT实验结果显示,在相同的作用浓度下,F11处理组Hela细胞形态异常改变,死细胞明显增多,细胞存活率显著低于GEN作用组(P＜0.05).荷瘤动物实验结果表明与GEN相比,F11对Hela细胞裸鼠移植瘤的生长有显著的抑制作用(P＜0.01),效果与环磷酰胺相当,且未观察到毒副反应.结论 异黄酮类化合物经过特定结构修饰,可显著增强其抗癌效应,有值得进一步研究开发的潜在价值.     

小鼠IFIT1多克隆抗体的制备

目的 获取小鼠IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1 )特异性多克隆抗体.方法 扩增培养高效表达IFIT1的重组子pMAL-C2X-IFIT1,超声破碎后的细胞上清过Amylose Pre-packed column亲和层析柱,将所得纯化的融合蛋白MBP-IFIT1作为抗原,添加福氏佐机剂后免疫兔,收集抗血清,用Western blot和ELISA方法测定抗血清特异性反应和效价.结果 纯化的MBP-IFIT1可诱导兔产生特异性免疫应答,所得抗体能够特异性识别融合蛋白中的IFIT1,ELISA结果显示其效价为1∶12 800.结论 MBP-IFIT1具有良好的抗原性,以该融合蛋白为抗原免疫兔成功制备出IFIT1特异性多克隆抗体.     

安定-氯胺酮对严重烧伤小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达的影响

目的 观察严重烧伤早期小鼠腹腔巨噬细胞c-Jun激活区结合蛋白1(JAB1)蛋白表达变化,探讨安定-氯胺酮对其表达变化的影响.方法 将成年健康雄性昆明小鼠随机分为4组,即对照组、严重烧伤组、安定-氯胺酮组和严重烧伤后安定-氯胺酮处理组,以20%～30%体表总面积(TBSA)Ⅲ度烧伤作为严重烧伤模型,肌肉注射安定0.4mg/kg、氯胺酮10mg/kg给予麻醉.收集腹腔巨噬细胞提取总蛋白,运用Western blotting方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的变化.结果 在严重烧伤后30min,小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平与对照组相比明显降低(P<0.05),于6h时达到最低(P<0.01),严重烧伤后12h逐渐恢复至正常水平.然而,严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉,小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平在各时相点变化差异无统计学意义.结论 严重烧伤可引起小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的早期下降,而严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉能显著抑制JAB1蛋白表达水平下调.     

新型异黄酮及甾体类化合物抗辐射作用的实验研究

目的对进行改构的两种异黄酮类化合物F12、F2及一种甾体类化合物ZE1进行体外、体内实验,寻找一种新型的抗辐射药物。方法以Genistein和雌二醇为阳性对照,应用MTT法对比研究三种化合物在不同的浓度对IEC-6、巨核细胞系-Dami细胞株细胞增殖活性的影响;并观察其对8Gy和12Gy60Co-γ射线照射小鼠肠道及造血辐射防护效果。结果F2、F12、ZE1在不同浓度对IEC-6及Dami细胞均有不同的辐射防护作用,效果显著优于Genistein和雌二醇（P〈0.01）。动物实验结果显示F2使辐射损伤小鼠的骨髓和脾脏有核细胞数量增加,肠上皮细胞绒毛高度增加,隐窝变长,效果与雌二醇相当,而未观察到明显的毒副反应。结论经过特定结构修饰的异黄酮类化合物F2,有较好的辐射保护作用,同时无明显的雌激素样作用,提示可能是较为理想的辐射防护剂候选药物。     

乳酸-羟基乙酸共聚物缓释纳米微球的制备及体外释药评价

目的 以乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycohc acid),PLGA]为材料,制备缓释局麻药利多卡因(Lidocaine,LID)-PLGA长效缓释微球.方法 采用乳化溶媒挥发法制备微球;采用紫外分光光度法测定微球载药量、包封率和体外药物释放.结果 纳米微球形态光滑圆整,球体大小均匀,微球粒径为(174.5±15.2)nm,微球载药量和包封率分别为12.48%和54.30%,微球体外释放符合Higuchi方程,半衰期t1/2=3.45 d.结论 LID-PLGA纳米微球具有明显缓释作用.     

VEGF165/HBD3双基因共表达真核质粒载体的构建及其体外表达

目的 构建人血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor,VEGF165) 和人β防御素3 (human beta defensins,HBD3 )双基因共表达真核质粒载体、观察其在293FT细胞中的表达,并检测其活性.方法 利用RT-PCR方法分别从白血病细胞(HL60...     

增塑剂邻苯二甲酸二丁酯低剂量与神经系统毒性效应的评估

目的:探讨增塑剂邻苯二甲酸二丁酯低剂量暴露对PC12细胞的毒性效应与作用机制,为接触人群产生远期效应的生物学检测提供参考评价指标。方法:体外培养神经细胞株PC12细胞,培养基分别含有12.5,25,50,100,200mg/L邻苯二甲酸二丁酯,作用24,48,72和96h后,用细胞计数细胞毒法检测细胞的存活和生长;椎虫蓝拒染法绘制生长曲线;乳酸脱氢酶释放检测细胞损伤程度;DNTB法测定谷胱苷肽过氧化物酶活性,丙二醛比色法测定丙二醛含量;DNA凝胶电泳检测神经细胞凋亡。结果:①细胞毒检测结果显示浓度在12.5～200mg/L的邻苯二甲酸二丁酯剂量暴露对PC12细胞株处理24～96h,对PC12细胞生长存在显著的抑制作用,并呈剂量-效应关系。各实验组在各时相点与对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。②PC12细胞暴露于邻苯二甲酸二丁酯48h,乳酸脱氢酶释放增多,谷胱甘肽过氧化物酶活性降低,丙二醛含量增高;且随着邻苯二甲酸二丁酯的暴露剂量的上升乳酸脱氢酶浓度相应升高。而邻苯二甲酸二丁酯的暴露剂量的变化与谷胱甘肽过氧化物酶活性呈反比关系,与丙二醛含量呈正比关系。③DNA凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形条带。结论:不同剂量的邻苯二甲酸二丁酯暴露对PC12细胞的增殖具有显著的抑制作用,且在低剂量慢性暴露条件下对细胞产生以细胞凋亡为主的毒性效应;主要干扰神经细胞的DNA代谢,直接抑制PC12细胞生长,降低脂质过氧化物酶活性,产生氧化应激,诱导神经细胞凋亡。     

人β防御素2腺病毒表达载体的构建及其在大鼠真皮多能干细胞中的表达

目的 构建和鉴定人β防御素2（HBD2）的重组腺病毒表达载体，并观察其转染大鼠真皮多能干细胞（dMSCs）后的表达。方法反转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增HBD2全长cDNA，亚克隆至穿梭质粒（pAdTrack-CMV）中，然后转化含骨架质粒（pAdEasy-1）的大肠杆菌BJ5183，通过同源重组产生腺病毒载体质粒。PacⅠ酶切阳性的重组质粒后转染293细胞，包装出重组病毒载体。用所得重组腺病毒感染dMSCs细胞，并采用RT-PCR和荧光免疫组织化学检测其在dMSCs中的表达情况。结果 经测序、酶切及聚合酶链反应（PCR）鉴定，表明已成功地扩增到HBD2全长cDNA，并将其顺序克隆到穿梭质粒和骨架质粒中，进而组装出腺病毒表达载体。经RT-PCR和免疫组织化学证实构建的病毒载体可感染dMSCs，并有效表达HBD2。结论 本实验成功地构建了含HBD2基因的腺病毒表达载体，并证实其可在dMSCs中表达。     

安定-氯胺酮对严重烧伤小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达的影响

目的观察严重烧伤早期小鼠腹腔巨噬细胞c～Jun激活区结合蛋白1（JAB1）蛋白表达变化，探讨安定一氯胺酮对其表达变化的影响。方法将成年健康雄性昆明小鼠随机分为4组，即对照组、严重烧伤组、安定～氯胺酮组和严重烧伤后安定～氧胺酮处理组，以20％～30％体表总面积（TBsA）Ⅲ度烧伤作为严重烧伤模型，肌肉注射安定0．4mg／kg、氯胺酮10mg／kg给予麻醉。收集腹腔巨噬细胞提取总蛋白，运用Westernblotting方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的变化。结果在严重烧伤后30min，小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平与对照组相比明显降低（P〈0．05），于6h时达到最低（P〈0．01），严重烧伤后12h逐渐恢复至正常水平。然而，严重烧伤后应用安定氯胺酮麻醉，小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平在各时相点变化差异无统计学意义。结论严重烧伤可引起小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的早期下降，而严重烧伤后应用安定一氯胺酮麻醉能显著抑制JAB1蛋白表达水平下调。     

浅谈医学专业青年教师的教学能力培养

随着我国医学教育事业的不断发展,建设一支高素质医学专业青年教师队伍的重要性日显突出。在分析我国医学专业青年教师现状和特点的基础上,从激发青年教师对教育事业的热爱、建设有利于青年教师成长的外部环境和提高青年教师自身教学素质三个方面阐述如何帮助医学专业青年教师尽快提高教学能力。