兔ADSCs与NPCs共培养后再移植对椎间盘退变影响

目的探讨兔脂肪间充质干细胞(ADSCs)与髓核细胞(NPCs)共同培养后再植入兔腰椎间盘对Ⅱ型胶原和蛋白多糖的影响。方法体外分别提取分离培养兔ADSCs与NPCs。诱导分化兔ADSCs向成骨、成脂方向分化,鉴定兔ADSCs。将兔ADSCs与NPCs共同培养,诱导兔ADSCs向NPCs方向分化。新西兰大白兔30只,分为实验组和对照组,分别将兔ADSCs与NPCs共同培养后的细胞悬液、PBS缓冲液注入针刺抽吸后的椎间盘。4、8周后,采用间苯三酚分光光度法检测两组兔椎间盘髓核蛋白多糖表达的变化,采用反转录-聚合酶链反应对Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达进行半定量分析。结果 ADSCs可诱导向成骨、成脂方向分化,与NPCs共同培养后由梭形、多角形变为成纤维细胞样。对照组髓核Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达低于实验组,差异有显著性(t=6.50～13.04,P<0.05)。结论兔脂肪组织可成功提取分离ADSCs,ADSCs与NPCs共同培养后移植可延缓兔椎间盘退变。     

骨髓基质干细胞片层的制备及其在组织工程骨中应用的初步研究

目的：探讨骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）片层（cell sheet）的制备方法,并观察其在实验犬体内构建组织工程骨时的成骨作用。方法：密度梯度离心法获取实验犬骨髓基质干细胞,经成骨诱导培养后,利用温度感应性培养皿（temperature-responsive culture dish）制备细胞片层后在体外包裹犬同种异体脱钙骨基质（demineralized bone matrix,DBM）,相差显微镜和扫描电镜观察细胞及片层形态;将复合体植入实验犬背阔肌筋膜下,组织学方法观察术后组织工程骨的骨形成情况。结果：细胞片层成功制备,并与支架材料复合良好,术后16周组织学显示形成类似板层骨的致密骨组织。结论：利用温度反应性培养皿可成功制备BMSC细胞片层,细胞片层包裹支架材料后在实验动物体内可形成具有类似板层骨结构的组织工程骨。     

AFP血清浓度及肝癌组织中Cx43的表达与肝癌根治切除后早期复发和预后的关系

目的 研究Cx43、CD105、VEGF在不同血清AFP(α-fetoprotein)浓度的乙型肝炎病毒性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达的关系以及Cx43的表达和RO切除术后复发和预后的关系.方法 应用组织芯片技术和免疫组织化学PV-6000两步法检测234例HBV相关HCC组织标本Cx43和CD105、VEGF的表达,应用RT-PCR检测20例HBV相关HCC标本Cx43mRNA的表达,并分析在不同血清AFP浓度下与Cx43的表达与CD105、VEGF的表达的关联以及与HCC患者根治切除术后的复发和预后的关系. 结果 免疫组织化学法和RT-PCR均检测到Cx43在HCC组织中表达,AFP＜ 400 μg/L的HBV相关HCC组织中Kaplan-Meier分析显示Cx43阳性表达者其1年复发、无瘤生存和总体生存均显著低于阴性表达组(Log Rank P =0.001,0.026,0.000),Cox回归分析表明Cx43阳性表达是HCC早期复发和预后(Log Rank P=0.049、0.035)的独立影响因子,Cx43阳性表达者CD105、VEGF低表达(P=0.018、0.023),并与组织分化程度(P =0.002),病灶数(P =0.033)血管癌栓(P =0.029)有关.结论 Cx43的表达与CD105、VEGF的表达相关,在AFP＜400 μg/L的HBV相关HCC的患者中Cx43阴性表达预示早期复发和不良预后.     

常染色体隐性遗传性远端肾小管酸中毒患儿ATP6V0A4和ATP6V1B1基因突变分析

目的 分析常染色体隐性遗传性远端肾小管酸中毒(rdRTA)患儿ATP6V0A4和ATP6V1B1基因的突变,进行基因型和表型的相关性研究.方法 PCR扩增基因组DNA,直接测序分析来自3个家系3例患儿的ATP6V0A4和ATP6V1B1基因的突变位点,选取不相关的100例健康人作为对照.结果 1例患儿携带ATP6V0A4基因的1个新的纯合无义突变(p.R194X);1例患儿携带ATP6V1B1基因1个新的杂合无义突变(p.R114X)和1个已经报道过的杂合突变p.I386fsX441;第3例患儿未发现以上2个基因的突变.结论 对中国rdRTA患者基因突变分析有利于了解该类疾病的基因型和表型的相关性,增强临床医生对该类疾病的认识和治疗.     

构建及鉴定人生存素基因的慢病毒表达载体

背景：抑制椎间盘细胞的凋亡可以延缓椎间盘的退变,而生存素具有调节细胞增殖和抗凋亡功能。目的：构建人生存素基因的慢病毒载体。方法：应用全基因合成技术合成人生存素基因（BIRC5）,通过 PCR扩增目的基因并对 PCR 结果进行电泳分析。将目的基因克隆到慢病毒表达质粒构建重组慢病毒质粒 Lenti-BIRC5。将重组的慢病毒质粒转化细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性的克隆进行基因测序。将含有目的基因的慢病毒质粒转染293T细胞,应用Western blot技术对重组慢病毒载体 Flag-Survivin 融合蛋白的表达进行检测。结果与结论：PCR鉴定及基因测序结果显示成功构建了含有人Survivin基因的慢病毒表达载体,Western blot检测结果显示目的基因在体外培养细胞中转染成功并且过表达。说明慢病毒表达载体Lenti-BIRC5构建成功,这为下一步研究Survivin在人髓核细胞中的抗凋亡作用提供了载体。     

全反式维甲酸对兔颈动脉粥样硬化病变中Cdk2表达及血管平滑肌细胞增生的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对兔颈动脉粥样硬化病灶中血管内膜的增生、血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期素依赖性激酶Cdk2表达规律的影响。方法36只新西兰雄性大白兔随机分为3组:正常饮食组、手术组、ARTA治疗组,每组12只。手术组和治疗组均给予高脂饮食,两周后用空气干燥法制作颈动脉内膜损伤模型,治疗组于术前3d开始给予ATRA灌胃。于术后1、4周处死动物,取病变血管应用HE染色、免疫组化和计算机图像分析法进行形态学、PCNA和Cdk2表达水平的检测。结果①正常动脉壁未见PCNA及Cdk2表达。②手术组在术后第1周时内膜开始增生,第4周增生明显,且出现泡沫细胞、脂质核心形成、管腔狭窄;增生内膜中Cdk2表达水平增高。③治疗组Cdk2的表达明显低于手术组(P<0.05),VSMCs的迁移、增殖、内膜增生和管腔狭窄显著减轻(P<0.05)。④PCNA表达与Cdk2表达呈显著正相关(P<0.01)。结论ARTA可通过抑制Cdk2表达,抑制VSMCs的迁移和增殖,从而抑制兔颈动脉粥样硬化新生内膜过度增生和管腔狭窄。     

Transwell侵袭实验测定M受体对胆管癌细胞侵袭的影响

目的 探讨Transwell体外侵袭模型适用于胆管癌侵袭性研究的实验条件和方法.观察M受体兴奋剂及拈抗剂对胆管癌侵袭力的影响.方法 将不同浓度(0.5×105/mL、1.0×105/mL、1.5×105/mL、2.0×105/mL)的胆管癌细胞200μL置入Transwell小室侵袭模型,分别培养12 h、24 h、3...     

硫普罗宁联合奥沙利铂对抗肿瘤作用的影响

目的探讨硫普罗宁（Tio）联合奥沙利铂（L-OHP）在人胃癌裸鼠模型中对抗肿瘤作用的影响。方法建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为6组,每组10只动物。A组腹腔注射50 g/L葡萄糖注射液;B组腹腔注射L-OHP 6 mg/kg;C组腹腔注射Tio 30 mg/kg;D组腹腔注射L-OHP 6 mg/kg＋Tio 30 mg/kg;E组腹腔注射L-OHP 6 mg/kg＋Tio 45 mg/kg;F组腹腔注射L-OHP 6 mg/kg＋Tio 60 mg/kg,连续用药14 d。测裸鼠体质量、瘤体积,计算抑瘤率;处死动物,查血常规,肝、肾功能,行肝、肾、肿瘤病理组织学检查。结果用药后B、D、E、F组裸鼠体质量均出现了不同程度的下降,与用药前比较差异有显著性（t=5.52~9.74,P〈0.01）。B、D、E、F组表现出了明显的抗肿瘤作用,瘤质量与A组比较差异有显著性（F=130.77,t=8.58~18.94,P〈0.01）;而D、E组之间,E、F组之间的抗肿瘤作用差异无显著性（P〉0.05）。B组血白细胞降低,D、E、F组白细胞较B组出现不同程度的升高,差异有显著性（F=13.07,t=4.32~12.20,P〈0.05）。各组肝、肾功能未见明显损害。结论 Tio可能降低了L-OHP的抗肿瘤作用,但表现出了明显的肝、肾保护作用。     

EGFR和HER-3在人肺腺癌细胞及培美曲塞二钠耐药细胞中的表达差异

目的 探讨EGFR和HER-3基因在人肺腺癌细胞株A549和培美曲塞二钠(PEM)诱导的耐药细胞株A549/PEM中的表达变化.方法 用大剂量PEM诱导、建立耐药细胞株A549/PEM,CCK-8法检测A549和A549/PEM细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞的周期分布,RT-PCR检测EGFR与HER-3 mRNA在A549和A549/PEM细胞中的表达量.结果 CCK-8法测得PEM对A549细胞的半数抑制浓度(IC50)为3.43×10-6mol/L,用PEM反复处理细胞4个月,成功诱导出耐药指数(RI)为5.15倍的耐药细胞株A549/PEM.流式细胞术检测结果显示,A549和A549/PEM细胞处于G1/G0期的比例分别为(56.25±0.10)％和(65.12±0.40)％(P＜0.05),处于S期的细胞比例分别为(40.87±0.30)％和(31.74±0.40)％(P＜0.05).EGFR mRNA在A549和A549/PEM细胞中的相对表达量分别为0.55±0.08和0.64±0.07,HER-3 mRNA在A549和A549/PEM细胞中的相对表达量分别为1.29±0.03和1.56±0.12,其差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 与A549细胞相比,A549/PEM中EGFR和HER-3的表达量均增高,提示这两种基因表达量的变化可能与PEM耐药相关.     

Ras与NIS在甲状腺乳头状癌癌旁组织中的表达

目的探讨甲状腺乳头状癌（PTC）癌旁组织Ras及钠碘同向转运体（NIS）蛋白的表达及意义。方法收集2008年1月1日-2011年12月1日我院病理科PTC石蜡包埋切块62例,其中PTC癌旁组织为正常甲状腺组织者34例（G正常组）,癌旁组织为结节性甲状腺肿组织者28例（G结甲组）。采用免疫组化方法检测两组癌旁组织中Ras及NIS蛋白表达,结果以免疫组化评分（IHS）表示。结果Ras蛋白在G正常组和G结甲组IHS得分分别为（5．65±3．45）和（4．52±2．28）分,两组比较无统计学差异（t=0．192,P〉0．05）;NIS蛋白在G正常组和G结甲组IHS得分分别为（7．78±3．97）和（4．93±2．05）分,两组比较差异有显著性（t=2．128,P％0．05）。结论伴有不同周围组织背景的PTC在术后清甲治疗中对放射碘治疗敏感性可能有所不同,伴有结节性甲状腺肿的PTC病人清甲治疗效果相对较差。