苦参碱诱导U937细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨苦参碱(Mat)抑制人淋巴瘤细胞(U937)增殖及诱导其凋亡的机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对U937细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化;Annexin V双标记染色结合FCM检测凋亡率;RT-PCR方法检测Bcl-2 mRNA表达.结果:Mat(0.2～0.5 g/L)作用24,48,72 h后对U937细胞均有增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50>)为0.4 g/L;Mat 0.2～0.5 g/L组作用U937细胞72 h后,s期细胞比例均增加,细胞发生S期阻滞(P<0.01);细胞凋亡率分别为3.25%,5.32%,8.17%,11.20%,与U937细胞对照组(1.84%)及Mat 0.1 g/L组(1.95%)相比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达明显减弱,且随剂量增加越明显.结论:Mat在一定浓度和时间对U937细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是使细胞发生S期阻滞;Mat可以下调U937细胞Bcl-2表达,促进细胞凋亡.     

微囊化神经组织联合脱细胞神经移植修复犬坐骨神经缺损

目的 了解微囊化神经组织与脱细胞神经联合移植桥接犬坐骨神经30 mm缺损后腓肠肌的变化.方法 将健康成年杂种犬12只随机分为A、B、C、D 4组(n=3):A组截取双侧坐骨神经行化学萃取制备脱细胞神经;B、C组使用脱细胞神经移植修复犬的坐骨神经30 mm缺损,B组同时辅以微囊化神经组织移植;D组行自体神经移植修复缺损.术后定期观察术侧肢体运动功能恢复情况,6个月时检测神经移植段运动传导速度,并取术侧及健侧腓肠肌行琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase,SDH)、突触素和运动终板染色,以及取距远端吻合口以远1 cm的坐骨神经神经行Masson、固蓝及NF-200染色.结果 B、C、D组实验动物均纳入实验动物数量分析、无脱失.图像分析表明B组腓肠肌SDH光密度、肌纤维截面积、突触素及运动终板光密度及面积等与C组有明显统计学差别,而与D组无明显统计学差别,运动功能恢复、电生理及坐骨神经形态学检测均与腓肠肌检测结果相符合.结论 微囊化神经组织细胞与脱细胞神经联合移植修复缺损神经后,重新支配靶器官,使腓肠肌萎缩明显减弱,效果优于单纯脱细胞神经移植,有望代替自体神经移植.     

咳嗽、活动后气促伴左侧胸腔积液

病历摘要 患者，女性，39岁，公务员。因“咳嗽、咳痰、活动后气促1月余，加重2d”入院。发病前2d有受凉史，伴有左胸隐痛，与呼吸无确切关系。不伴咯血、发热、盗汗、消瘦，无关节疼痛，无皮疹及口腔溃疡，无鼻衄及鼻塞。于外院给予头孢哌酮／舒巴坦等治疗效果不佳。入院前2d气促加重，入院前1d门诊胸片示“双下肺少许炎变，左侧胸少到中量积液”（图1）。门诊以“胸腔积液原因待查”收入院。     

RNAi沉默survivin基因表达对膀胱癌EJ细胞增殖的影响

目的 通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达,研究survivin基因沉默后对细胞生长和细胞凋亡的影响.方法 将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4 DNA连接酶连接,重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果.MTT法检测细胞生长的影响,流式细胞仪检测转染后EJ细胞的凋亡变化.结果 酶切及测序证实设计合成的DNA片段已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹检测实验表明:pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体均能有效地阻断EJ细胞中survivin基因的表达,使survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01),后者抑制效果更佳.转染后的EJ细胞生长速度明显变慢.转染pSilencer2.0-SVV2实验组细胞的凋亡增加了17.0%.结论 重组真核载体能有效抑制EJ细胞的survivin表达,抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡.     

裸小鼠人大肠癌淋巴道转移模型的建立

 目的建立一种人大肠癌简便、可行、稳定的淋巴道转移研究动物模型。方法裸鼠爪垫皮下注射人结肠癌HCT-116细胞,接种后在1~6周及8周不同时间段取材;收集腹股沟、腘窝,髂血管旁,肾门淋巴结以及肝肺脏器;进行HE染色及CEA免疫组化检测。观察种植瘤的成瘤率、生长情况以及淋巴结转移规律。结果爪垫种植1周后成瘤率100%。3周后淋巴结开始转移,到6周时第一级腹股沟腘窝淋巴结完全转移,转移率100%,其中腹股沟淋巴结转移阳性率76.9%(10/13);第二级髂血管旁淋巴结部分转移,转移率40%(2/5);未见第三级肾门淋巴结转移。到8周时见髂血管旁淋巴结转移率60%(3/5),肾门淋巴结开始转移(1/5),但均未见肝肺远处转移。HE染色及CEA免疫组化染色发现淋巴结有弥漫性癌细胞浸润。结论裸鼠爪垫皮下注射可成功建立人大肠癌淋巴道转移模型。此模型快速简便、转移集中、转移率高,可为研究结直肠癌淋巴道转移机制,药物干预等抗转移治疗提供理想的动物模型。     

EGFR抑制剂与肿瘤细胞放射敏感性

表皮生长因子受体(EGFR)在多种上皮来源的恶性肿瘤中存在过表达,其表达水平与肿瘤的放射敏感性呈负相关.大量研究表明,阻断EGFR表达的靶向抑制剂能够增加肿瘤细胞的放射敏感性,提高放射治疗的疗效,其机制可能与抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、干扰细胞周期分布、延长DNA的损伤修复有关.因此,运用EGFR抑制剂可以增强肿瘤细胞对放射的敏感性.     

Bmi-1基因与人类恶性肿瘤

Bmi-1（B-cell specific moloney murine leukemia virus insertion site 1，Bmi-1）基因是荷兰癌症中心1991年在鼠淋巴瘤细胞中发现的，属于PcG（Polycomb group，PcG）家族，也属于一种原癌基因。Bmi-1是一种广泛表达的核蛋白，直接参与细胞生长、增殖的调节，同时Bmi-1作为原癌基因（protooncogene）具有阻抑子（repressor）的功能，可以阻断细胞周期中P16^ink4a和P19^arf（在人类为P14^arf）两种关键抑制蛋白，与myc起协同作用参与调节细胞的增殖和衰老。     

HepaCAM基因转染对肾癌细胞侵袭活性的影响

目的：研究肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule，hepaCAM）基因转染对肾细胞癌（renal cell carcinoma，RCC）细胞株786-0侵袭能力的影响，并探讨其作用机制。方法：将携带hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM－pEGFPN2转染786-0细胞后，用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养，以转染了pEGFPN2和未转染的786-0细胞作为对照。采用RT—PCR和实时荧光定量PCR法检测hepaCAM和基质金属蛋白酶（matrixmetalloproceinase，MMP）－2和MMP－9mRNA的表达，明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性变化，Transwell小室法检测786-0细胞的体外侵袭能力。结果：稳定转染hepaCAM基因后。786-0细胞的hepaCAM mRNA表达水平明。显上调（P〈0．01），而MMP－2和MMP-9 mRNA的表达和酶活性明显受抑（P〈0．05），hepaCAM基因的导入显著削弱了RCC细胞的跨膜侵袭能力（P〈0．01）。结论：hepaCAM可能通过下调MMP－2和MMP-9的表达以及抑制明胶酶的活性．进而抑制肾癌细胞786-0的侵袭力。     

复元胶囊对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡和P53、caspase-3 mRNA表达的影响

目的:观察复元胶囊对大鼠膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡及P53、caspase-3 mRNA表达的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用机制。方法:采用Hulth法建立大鼠膝骨关节炎动物模型,4 w后给与壮骨关节丸、复元胶囊灌胃。8 w后取大鼠膝关节软骨作透射电镜观察细胞超微结构,原位末端标记法(TUNEL法)检测软骨细胞凋亡,逆转录/聚合酶链反应(RT-PCR)法检测P53、caspase-3 mRNA的表达。结果:复元胶囊能抑制骨关节炎软骨细胞过度凋亡,减少凋亡基因P53和凋亡执行因子caspase-3 mRNA的表达。结论:复元胶囊通过减少凋亡基因P53和凋亡执行因子caspase-3 mRNA的表达而抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡。     

浅析实习医生的临床自我保护

初次接触临床诊治工作,缺乏自我保护意识,对院内感染的危害性认识不足,不熟悉诊疗操作技术及与病人和谐地交流沟通的经验,是实习医生容易遭受感染或伤害的主要原因。而减少或避免被伤害的有效措施则包括:增强自我健康保护意识;掌握正确的自我保护技术,培养良好的工作习惯;遵守诊疗规程,提高操作技能;充实医学伦理及法律知识,树立正确的道德法制观念。