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目的:构建杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白.方法:根据GenBank上杜氏盐藻MAR结合蛋白的cDNA全长序列设计出含有特定酶切位点的引物,PCR法获得MAR结合蛋白基因序列全长,将其克隆至载体pMD18-T中.酶切连接到pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-MBP,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,Western blotting检验其表达结果.结果:重组质粒经酶切、PCR、测序鉴定,成功构建了原核表达载体pET-MBP,对表达的融合蛋白的Western blotting分析结果表明表达的蛋白质为目的蛋白.Ni2+亲和层析法纯化蛋白质,纯化后目的蛋白在总蛋白中的含量约为70%.结论:成功地克隆杜氏盐藻MAR结合蛋白基因的全长并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,且纯化了MAR结合蛋白的融合蛋白. 相似文献
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目的:研究脐带血来源的基质细胞对脐血CD34+ 细胞体外扩增的促进作用。 方法:应用MACS磁珠分离系统分离脐血CD34+细胞,通过细胞因子对脐血前体基质细胞体外诱导,使其产生基质细胞和形成造血微环境。观察基质细胞的生长状态和细胞表面分子的表达,并建立以该基质细胞为滋养层的脐血造血干细胞体外扩增体系。结果:细胞因子联合培养对CFU-GM增长没有明显影响,但对于CFU-E的形成和细胞增长的影响细胞因子组和细胞因子+基质细胞组所培养的CPU-E与对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01
)。脐带血来源的基质细胞分泌细胞因子的时间-效应曲线显示,脐血基质细胞培养3、7、10、14和20 d后,TPO、SCF浓度在培养第7天时达到最高,而GM-CSF在第7天以后则逐渐降至最低。在脐血基质细胞作为滋养层的扩增体系中,加入相应的细胞因子可以使脐血造血细胞明显扩增,其中细胞因子(SCF+IL-3+EPO+TPO+GM-CSF)联合基质细胞培养体系的扩增作用最强。结论: 应用细胞因子可以体外培养脐血前体基质细胞产生脐血基质细胞,并可在该基础上形成造血微环境支持体外造血。 相似文献
996.
射频线圈在磁共振成像中占有非常重要的位置,线圈的性能直接影响到图像质量。软RF线圈能贴近人体,因此有较高的信噪比,图像质量更好,西门子公司和其他各大公司的磁共振广泛使用这种线圈。我院在2000年安装了一台西门子公司生产的0.2T开放式磁共振OPEN VIVA,配了几种软线圈,线圈质量很好。故障安装后前几年所有的软线圈工作很可靠, 相似文献
997.
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目的:分析S100B和EGFR在特异性肺癌脑转移细胞株中的表达,探讨肺癌脑转移的机制。方法:免疫组化和western blotting检测特异性肺癌脑转移细胞株PC14/B中S100B、EGFR的表达情况,并与原株PCI4、非脑转移肺癌细胞株A549比较。结果:PC14/B中特异性表达2种由S100B参与形成的蛋白聚合体,且这两种蛋白在A549和PCI4中未见表达。EGFR在A549中的表达水平明显高于在PC14和PC14/B中的表达水平。结论:一些含有S100B的蛋白聚合体可能促进了肺癌脑转移的发生,EGFR可能同肺癌的脑转移行为呈负相关。 相似文献
999.
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