寡核苷酸微阵列法检测高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性的临床应用

目的　了解血管紧张素转换酶(ACE)的单核苷酸多态性 (SNPs)与高血压的相关性。方法　制备一种基于PCR 序列特异寡核苷酸探针法 (PCR SSOP)原理的寡核苷酸阵列芯片,用于对ACE基因的多个SNPs位点(C5467T,A9596G,A11860G,intron16上 287bpI/D)的同步检测, 并采用该芯片测定了 50名健康者和 80例高血压患者ACE基因的多态性谱。结果　高血压患者ACE基因A11860G的基因型分布为(AA: 24;AG: 10;GG: 46),与健康者的基因型分布 (AA: 15;AG: 18;GG: 17)相比较差异有统计学意义 (χ2 = 11 39,P< 0 01);高血压患者ACE基因I/D的基因型分布为 (II: 37;ID: 12;DD:31),与健康者的基因型分布(II: 23;ID: 5;DD: 22 )相比较差异有统计学意义 (χ2 =12 87,P< 0 01);而C5467T、A9596G的基因型分布在两组人群中未见差异有统计学意义。结论　ACE基因A11860G和I/D一样可能与高血压发生、发展密切相关;ACE寡核苷酸基因芯片技术实现了对ACE基因的多个SNPs多态性位点的同步检测,方法简单、操作方便。     

靶向微小RNA的病毒感染疾病治疗新策略

微小RNA(microRNA,miRNA)是真核生物细胞的一类长度约为19～25个核苷酸的非编码小RNA,在生物体发育和基因表达过程发挥重要的调控作用。miRNA分子通过与靶mRNA的互补配对,在转录后水平上对基因的表达进行负调控。近来研究表明miRNA在病毒感染宿主过程中发挥重要作用。通过设计抗miRNA反义寡核苷酸促进或阻断特定miRNA的表达可以实现抑制病毒复制的目标。本文综述了抗miRNA反义寡核苷酸研究现状和面临的挑战。     

cDNA芯片技术杂交效率的优化

目的cDNA芯片杂交影响因素很多,如固定于玻片的DNA片段的浓度、溶解DNA片段的点样液、荧光探针浓度及纯度杂交液、杂交温度、杂交时间和Cy3与Cy5荧光素标记探针等,本实验针对其中重要影响因素进行优化筛选,以提高杂交效率。方法通过逐一改变cDNA杂交技术重要影响因素的实验条件,平行设置多组实验,从中筛选出最佳实验数据。结果与结论重复实验结果表明,杂交效率较高的条件为:浓度约为0.50 μg·μL^-1 DNA片段，溶于1×Micro Spotting Solution(ArrayIt^TM)中，与纯化后的荧光标记在0.5%SDS/10×SSC甲酰胺杂交液，在42℃杂交。     

寡核苷酸亲和纯化人端粒酶的研究

寡核苷酸亲和纯化人端粒酶的研究＊郑晓飞王升启邢瑞云朱宝珍孙志贤军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０端粒（ｔｅｌｏｍｅｒｅ）是真核细胞染色体末端的ＤＮＡ序列，其功能是保持染色体的稳定。端粒ＤＮＡ的稳定性与细胞的癌变和衰老密切相关。端粒是由ＲＮＡ...     

SARS冠状病毒CT基因型发现及相关特征

目的 研究SAPS冠状病毒基因型及相关特征。方法 对杭州市首例SAPS病人分离的SAPS冠状病毒ZJ01株进行全基因组测序，并在GenBank数据库登录。记录号：AY297028，版本号：gi：30910859。整个全基因组由29715bp组成。使用GeaBank数据库中最新登陆的SARS病毒的基因组进行序列比对、突变点分析和多态性分析、特殊片段的系统进化分析。结果 发现在ZJ0l株的9391、17555、21712、22213和27819位点，分别是T、T、G、T和T核苷酸碱基，和CenBank数据库中的其他SARS冠状病毒株比较，除第l、2、4和5突变位点(C：G：C：C／T1 T1 T2 T)之外，发现在21712位点(第3个)A／G突变也参于这一遗传标识。因此我们提出5个突位点将17株病毒分为两种基因型的新概念，即C：G：A：C：C与T：T：G：T：T两型，简称C型和T型。ZJ01病毒株属于T基因型．在中国大陆内地是首次发现和发表。突起蛋白基因片断的进化树分析，广州的GZ01 C基因型株进化距离和其他病毒株相差甚远；比较而言，和C基因型BJ0l、CUHK-Wl病毒株较为接近，其次是T基因型的Fl和F2组。5个突变位点(C：G：A：C：C／T：T：G：T：T)的两个发生在编码突起蛋白(S)的基因中，分别是A／G和C／T突变，由此引起的突起蛋白(S)氨基酸变化是Asp／Gly(天门冬氨酸／甘氨酸)和Thr／Ile(苏氨酸／异亮氨酸)。结论 这些基因型特征和变异是否会引起生物学及临床症状的差异是非常值得重视的。     

PCR检测泪液中乙肝病毒DNA

ＰＣＲ检测泪液中乙肝病毒ＤＮＡ白求恩国际和平医院孙殿兴，耿云琴，王法印，孙晓燕，胡荣军事医学科学院王升启虽泪液中已检出乙肝病毒表面抗原（ＨＢＳＡｇ）的存在ｌ’］，但（ＨＢＳＡｇ）是乙肝病毒（ＨＢＶ）核衣壳，也发现血液或体液中存在游离的非感染性ＨＢＳＡ...     

肺鳞癌组织中208个肺癌相关基因的表达(英)

目的:病理学上诊断同样为肺鳞癌的患者,其治疗疗效和愈后往往存在一定差异,本研究利用本实验室制作的208个肺癌相关基因芯片,探讨了7例肺鳞癌组织中基因表达的异质性,试图为患者的治疗和预后提供分子依据。方法:提取7例男性肺鳞癌患者(年龄在55～65岁之间)癌组织的总RNA并用LD-PCR标记成探针,然后与含有208个肺癌相关基因的cDNAMicroarray杂交,芯片用ImaGene软件分析和处理数据。结果:7例肺鳞癌组织之间208个肺癌相关基因表达的相似性在60.65%～82.69%之间。结论:本研究首次对肺鳞癌患者不同个体之间基因的表达进行研究并发现存在一定的差异,提示应注意癌症患者的个体化诊断和治疗。     

bcr-abl基因检测寡核苷酸芯片的制备及分析

为了研究bcr-abl融合基因检测芯片在白血病诊断、分型、治疗方案选择及预后判断中的应用价值，设计了融合基因检测探针，制戍寡核苷酸芯片；采用逆转录方法、荧光标记白血病细胞cDNA并进行杂交，以检测白血病细胞中bcr-abl基因。结果表明：通过对不同杂交温度、洗涤条件等的探索获得了较好的反应条件并用制备的芯片检测出了细胞株中的bcr-abl融合基因。结论：应用寡核苷酸芯片检测白血病细胞bcr-abl融合基因有独特的优势，具有一定的临床应用价值，但也存在一定的不足，若对芯片进一步改进，则今后在血液病方面应用前号是非常广阔的。     

基因芯片分型中荧光标记引物的多重扩增及试验优化

基因芯片技术以其平行高效多位点多态性分型的优势，在基础和临床研究中被广泛应用。然而，随着位点增多，扩增目的片段更繁琐，为了提高效率和降低成本，就需要在同一反应体系内进行多重扩增。而多重扩增的关键问题是，同一体系内引物对的最大化，并有效减少非特异扩增。目前，此环节可通过计算机辅助设计和尝试不同引物对组合解决。由于芯片分型以杂交信号强弱为检测指标，扩增片段要载有荧光剂，因此多重扩增必须考虑到荧光标记物——青色素（Cy3）的大分子位阻效应。但是，Cy3的存在不可避免地降低了PCR的效率，为此本研究对相关试验条件进行优化。