荷瘤小鼠气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调基因的表达及特征

目的：筛选荷瘤小鼠中晚期气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调的基因并描述其特征。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法，及Gene Chip Mouse Exonl．0ST Array等技术，检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表达的差异，重点关注那些表达量大、差异显著的基因，筛选气阴阳虚证独特上调和下调的基因。结果：筛选到气阴阳虚证独特上调的基因13个：Apoe、S100a8、Anxal、LOC383949、Iq2-Ea、S100a6、Vim、Tjnf2、Ngp、Gbp5、Myc、Cls、Ltf；独特下调的基因5个：Klklb5、A1bl、Scdl、Bglap2、Gc。结论：①存活到中晚期的气阴阳虚证荷瘤小鼠，垂体细胞的增殖与代谢十分活跃；②这些基因的表达变化可能是肿瘤小鼠气阴阳诸虚证的标志之一。     

正常与不同证候H22荷瘤小鼠肾上腺高表达的基因

目的:揭示正常与不同证候昆明种荷瘤小鼠肾上腺高表达的基因.方法:采用昆明种正常小鼠与腋下接种H22腹水瘤细胞的小鼠,取接种肿瘤后第8天(早期)邪毒壅盛证与气虚证、第21天(中期)阳气虚证、第29天(中晚期)气阴阳虚证荷瘤小鼠与正常对照组小鼠肾上腺,抽提RNA、纯化及Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array检测.结果:筛选到402条高表达的基因,其中有1个及以上组别芯片读数计算值大于5 000的有88条.这些基因主要参与代谢和基因表达的调控,部分参与化学合成、化学加工修饰、运输和信号转导,以及部分参与免疫、细胞周期和细胞凋亡、发育:另有许多基因功能未知.结论:这些在正常与疾病小鼠肾上腺内持续且稳定表达的基因,可能对于维持肾上腺的正常生理功能具有重要的生物学意义;鉴于气虚证荷瘤小鼠这些基因大多表达量低于正常小鼠和同期的邪毒壅盛证小鼠,反映出气虚证候的本质及特征;再次,4个不同证候荷瘤小鼠肾上腺这些基因表达差异分别有集中的趋势,印证了中医学“同病异证“的理论及其本质,要求辨证论治.     

气虚证H22荷瘤小鼠甲状腺独特上下调基因的表达特征

目的：揭示荷瘤小鼠气虚证甲状腺基因表达的特征。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,应用GeneChip Mouse Exon1.0STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候甲状腺基因表达的差异,重点关注早期气虚证上下调且表达量高的基因。结果：气虚证荷瘤小鼠甲状腺独特上调基因有33个,其中表达较高的基因6个,分别为Mta2d1、Comd3、Ucp1、Psmc6、LOC665964、Cyp2j11;独特下调的基因有31个,其中正常组表达较高的基因有5个,分别为Lcn2、Arntl、Mansc1、Hk1、Rpl29。结论：肿瘤发生后,H22荷瘤小鼠甲状腺存在大量的基因表达改变,其中早期气虚证独特上调或下调基因,可能与气虚证本质有关。     

邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠甲状腺独特上调和下调基因的检测

我们以往的研究一再发现,荷瘤小鼠在肿瘤发生后,会自发形成证候及其演变,早期以邪毒壅盛证、气虚证多见,且发现邪毒壅盛证动物预后差,带瘤生存时间短.鉴于学术界以往的研究观察到中医证候的形成与甲状腺密切相关,那么,邪毒壅盛证发生时,甲状腺是否存在独特的基因表达特征,是否与该证候形成有关?因此,我们通过业已建立的小鼠四诊工作站及其系列标准[1-2],对H22荷瘤小鼠进行辨证,筛选出早期邪毒壅盛证、气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证等4个常见证型,继而采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术对以上各证候荷瘤小鼠甲状腺等组织的基因进行了检测,本文重点报道邪毒壅盛证甲状腺独特上调与下调且表达量较高的基因.     

肝癌小鼠不同阶段有关证候肾上腺差异表达的基因分析

目的：揭示肝癌小鼠不同阶段常见证候肾上腺基因表达的特征。方法：采用实验小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22肝癌小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因。结果：筛选到不同阶段一致上调的基因73个,一致下调的基因26个。其中一致上调的基因包括Hp、C3、Anxa1、Procr、C2、Il4ra、Cd14、Ptprc、Cd52、C4b以及Eno3、Xdh、Gpx3等。一致下调的基因涉及到神经系统相关基因如Plp1、Mbp、Aldh1a1、Cck和Atn1,与水电解质代谢有关的基因如Aldh1a1和Slc22a17等,与信号转导有关的基因如Cxcr4、Spag5和Stmn3等,以及参与转录调控和蛋白质生物合成的基因,如Hspa1a、Dnajb1、Thra和Hhex等。结论：H22肝癌小鼠在疾病发生发展过程中,存在证候的演变及肾上腺组织基因表达的差异,不同阶段一致上调或下调的差异表达基因可能是肝癌小鼠及其证候区别于正常小鼠的特征之一。     

邪毒壅盛证和气虚证荷瘤小鼠垂体上调与下调的基因

目的：揭示荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证与气虚证垂体基因表达的差异。方法：采用小鼠标准化四诊及辨证方法,及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证3阶段4个证候垂体的基因表达,筛选邪毒壅盛和气虚两证候垂体基因表达与正常比较一致上调或下调的基因。结果：①邪毒壅盛证和气虚证垂体表达上调的基因有5个,其中邪毒壅盛证Alas2、Sgk、Cbln3表达高,十分突出,可能与该证候形成有关;②邪毒壅盛证和气虚证的垂体有13个基因表达几乎关闭,其中Abpg、Pip,以及Car6、Klk1b22、Klk1b3、Klk1b9、Muc10、Ren1、Hspa1a、Wfdc12等基因在正常组表达量大。结论：荷瘤小鼠垂体早期出现显著的衰退表现,而个别基因表达的增加,可能与邪毒壅盛有关。     

中医结合细胞自噬治疗原发性肝癌研究进展

中医治疗原发性肝癌以"扶正固本"和"祛邪"为原则,调和阴阳,创立了健脾、化瘀等治法,在提高患者生活质量,缓解痛苦,减轻术后不良反应方面具有很好的临床疗效。细胞自噬是广泛存在于真核细胞中的一种自我保护机制。研究表明,其对肿瘤细胞的生长与凋亡具有双重调节作用,这与阴阳的制约互用关系极其相似。肝癌发生时,往往伴随细胞自噬的失调,说明中医治疗肝癌的机制与调节细胞自噬水平相关。结合细胞自噬,为深入探讨中医药治疗肝癌的微观机制开拓新的思路。     

BOPPPS教学模式在医学生物化学教学中的实践与思考

<正>医学生物化学是联系基础与临床的桥梁课程,在医学教育中起着承前启后的作用。但由于其理论性强、内容繁多、概念抽象枯燥,且传统的医学教育模式重理论、轻实践,使得部分学生对生物化学的学习缺乏兴趣和信心。因此,近年来,在借鉴国际医学教育的先进理念和教学模式基础上,国内众多医学院校生物化学课程都进行了各具特色的教学改革,并取得了一定的成效[1-3]。笔者尝试在医学生物化学教学活动中引入BOPPPS教学模式,总结如     

癌-睾丸抗原GAGE-1基因的重组、表达及纯化

目的 为进一步研究临床应用癌-睾丸抗原GAGE-1诱导特异性抗肿瘤免疫反应,对GAGE-1基因进行克隆、体外原核重组表达及蛋白分离纯化。方法 运用RT-PCR技术从人QGY-7701肝癌细胞株中扩增GAGE-1基因片段,插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GAGE-1,并导入大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达;经包涵体透析复性及GST柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析鉴定。结果 扩增得到GAGE-1基因5’端251 bp片段,与GeneBank公布的序列一致,构建的PGEX-6p-1-GAGE-1原核表达质粒经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达分子量约35.7 kD的GST-GAGE-1融合蛋白,纯化后蛋白纯度为90%以上。结论 成功构建PGEX-6p-1-GAGE-1重组表达质粒,并成功表达纯化了GST-GAGE-1融合蛋白,为进一步深入研究GAGE蛋白奠定了基础。     

基于循证医学思维应用PBL教学法提高中医内科研究生科研素质的实践与评价

目的:基于循证医学思维,探讨应用PBL教学法在培养中医内科研究生科研素质的教学效果与评价。方法:观察我校2011级、2012级中医内科学研究生24人,基于循证医学思维在科研选题、撰写研究报告和论文方面应用PBL教学模式,采用问卷调查形式就查阅文献、学习兴趣、分析解决问题能力、对专业现状与动态了解情况等方面对研究生进行调查,在PBL教学法结束后发放问卷调查及评价效果。结果:PBL教学模式使研究生查阅文献能力得到提高,学习主动性和兴趣得到充分调动,78%以上的研究生认为PBL教学模式对自身分析解决问题能力、对本专业知识动态了解和个人临床科研综合素质的提高有极大帮助,近80%的研究生对于PBL教学模式在科研工作中的作用给予了充分肯定。结论:与传统教学相比较,PBL教学法结合循证医学思维模式更能调动学生自主学习的兴趣,增强学生的中医科研思维能力。