携带IL-24的溶瘤腺病毒对裸鼠乳腺癌移植瘤的抑制作用

目的 构建携带IL-24基因的溶瘤腺病毒CNHK600-IL24,评估该病毒在裸鼠体内对乳腺癌的抑瘤能力.方法 将IL-24基因插入腺病毒穿梭载体SG502-△CR2,与5型腺病毒骨架载体pPE3共转染至293细胞,获得溶瘤腺病毒CNHK600-IL24.建立乳腺癌原位成瘤模型、尾静脉注射及左心室注射模拟转移瘤模型,通过尾静脉注射CNHK600-IL24,应用"活体内光学成像系统"动态地观察病毒的疗效.结果 CNHK600-IL24经测序及PCR鉴定正确,滴度为1.9×1010pfu/ml.乳腺癌原位成瘤模型:对照组的光子数以及肿瘤体积均明显高于CNHK600-IL24各治疗组(P＜0.05).CNHK600-IL24治疗后肿瘤组织出现明显的坏死,肿瘤细胞发生显著的凋亡,免疫组化检测可见肿瘤细胞内Hexon和IL-24的表达.尾静脉注射模拟转移瘤模型:对照组的裸鼠大部分于38 d前死亡,而CNHK600-IL24组的生存天数明显延长(P＜0.05).左心室注射模拟转移瘤模型:活体内光学成像可见对照组与治疗组之间具有明显差别.结论 高滴度的溶瘤腺病毒CNHK600-IL24对于乳腺癌具有明显的抑瘤效果.     

重编程肝癌细胞系Huh7为多潜能干细胞样细胞

[摘要] 目的 重编程肝癌细胞系Huh7细胞为多潜能干细胞。方法 包装携带有Oct4、Sox2、Nanog、Lin28基因的慢病毒,将包装好的病毒共感染Huh7细胞,采用碱性磷酸酶染色、免疫荧光、实时定量PCR,免疫组织化学等方法对诱导出的多潜能干细胞样克隆细胞进行鉴定。结果 Huh7细胞被重编程为多潜能干细胞样细胞,碱性磷酸酶染色呈阳性,免疫荧光实验证明其表达多潜能因子,Oct4与TRA-1-60,qPCR实验证明其高水平表达内源性的多潜能相关基因及干细胞特异的microRNAs,体内分化实验结果表明iHuh7可以形成畸胎瘤。结论 通过携带四种多潜能因子的慢病毒介导的重编程, Huh7细胞可以被诱导为多潜能干细胞样细胞。     

携带可诱导共刺激分子基因的重组腺病毒载体构建及其在小鼠间充质干细胞中的表达

目的阻断可诱导共刺激途径协同骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可能能增强急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的防治作用。文中旨在构建携带小鼠可诱导共刺激分子(inducible costimula-tor,ICOS)基因的重组腺病毒载体,转染小鼠骨髓MSCs,为转基因治疗提供实验基础。方法设计含有EcoRⅠ、SalⅠ酶切位点的引物,PCR扩增ICOS,将扩增产物克隆到穿梭质粒PDC318上,筛选阳性克隆,测序鉴定正确,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒pPE3-F11B-EGFP在293细胞中同源重组,筛选获得含有ICOS基因的重组腺病毒质粒,行PCR鉴定。重组腺病毒质粒转染293细胞,扩增后用氯化铯密度梯度离心纯化病毒,用50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度,并转染小鼠MSCs。结果重组腺病毒质粒经鉴定,证实含有ICOS基因,病毒滴度为6.54×109pfu/ml。转染小鼠MSCs,荧光显微镜下可见较多绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测ICOS表达率为90.16%。结论成功构建了携带小鼠ICOS基因的重组腺病毒载体,并获得高滴度的病毒,能高效转染小鼠MSCs,为后续研究奠定了基础。     

大鼠肝癌模型脾内转染IL-2和(或)IL-12基因对NK细胞的激活作用

目的 :研究脾内直接注射携带 IL- 2和 (或 ) IL- 1 2基因的逆转录病毒包装细胞株对血 IL- 2和 IL- 1 2以及 NK细胞活性的影响。方法 :构建携带 h IL- 2和 (或 ) m IL- 1 2基因的逆转录病毒载体。将肝癌细胞 CBRH3注入大鼠腹腔 ,形成肿瘤 ,断颈处死 ,剖腹取出肿瘤组织 ,剪碎后接种于 5 0只 Wistar大鼠肝脏一叶 ,制备肝癌模型。模型大鼠随机分为生理盐水对照组、空载体对照组、IL- 1 2基因治疗组、IL- 2基因治疗组及 IL- 2 / IL- 1 2联合基因治疗组 ,每组 1 0只。含 IL- 2和 (或 ) IL- 1 2基因的包装细胞于肝癌接种后 1、3、5、7d进行脾内注射转染脾细胞。 EL ISA法检测大鼠血 IL- 2和 IL- 1 2浓度 ,放射性活度测定法检测 NK细胞活性 ,并进行病理学和免疫组化检查。结果 :IL基因治疗后 3d,IL - 2 / IL - 1 2联合基因组血清 h IL - 2与单基因治疗组相比无显著差异。病理示治疗后肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多。 IL治疗组 NK细胞活性较对照组显著增高 (P<0 .0 1 )。治疗后 3d血清 IL达高峰 ,以后逐步下降。 IL - 2 / IL - 1 2联合基因组较 IL单基因组增高 (P<0 .0 5 )。 结论 :脾内直接注射携带 IL -2和 (或 ) IL - 1 2基因的逆转录包装细胞株可明显增强 NK细胞活性 ,IL联合基因治疗优于 IL单基因     

增殖型腺病毒载体介导mIL-12基因对胃癌细胞的杀伤作用

目的:观察增殖型腺病毒载体介导的mIL-12基因对胃癌细胞的杀伤作用.方法:利用携带mIL-12基因的增殖型腺病毒转染胃癌细胞株SGC-7901,通过病毒增殖实验、细胞病理效应、酶链免疫反应等分别观察病毒复制能力、病毒对胃癌细胞的杀伤作用及mIL-12表达水平.结果:携带mIL-12基因的增殖型腺病毒转染胃癌细胞株SGC-7901具有肿瘤增殖型腺病毒ONYX-015的相似作用,可在肿瘤细胞内复制、增殖并杀死肿瘤细胞,而并不能在正常细胞内复制及增殖.该病毒在肿瘤细胞内的增殖能力是传统载体的近千倍.该载体携带的mIL-12基因的表达量明显高于传统基因治疗的腺病毒载体体系,是传统基因治疗表达量的百倍.结论:CNHK200-mIL-12能在胃癌细胞中增殖并杀死胃癌细胞,并提高目的基因的表达水平,可能为胃癌治疗提供一新途径.     

腺病毒介导的p16基因表达对体外细胞增殖和衰老的影响

Objective To investigate the influence of exogenous p16 expression on cell proliferation and senescence in normal and tumor cells. Method Genes encoding p16 and GFP were subcloned into an adenovirus vector,then recombinant adenovirus was produced in 293 cells and purified for subsequent infection into MEF and SMMC7721 cells. Cell proliferation was examined by CCK8 assay and senescence by SA-β-gal staining. Results The number of senescent MEF cells was much higher in cultures after infection with adenovirus expressing p16 than after infection with control adenovirus （15±5 vs 0 senescent cells/field）, and p16-expressing cultures showed significantly lower proliferation on days 1-4［（6.8±0.25）%,（10.6±0.68）%,（12.4±0.93）% and（45.7±1.13）%;P<0.01］. In contrast, no significant differences in proliferation or senescence were observed between control SMMC-7721 cultures or cultures expressing p16. Conclusion Expression of p16 alone is insufficient to induce cell growth arrest and senescence in tumor cells.     

用于血液系统恶性肿瘤治疗的单克隆抗体

单克隆抗体（简称单抗）具有高效、低毒和靶向性强等特点,在恶性肿瘤的治疗,尤其是血液系统肿瘤的治疗中越来越受人关注。对单抗的改造方法、应用于血液系统的各种单抗的最新研究进展及其优缺点进行综述,为临床用药提供指导．     

转染Caspase—1基因的人胃癌细胞生物学特性的研究

目的 探讨转染Caspase-1基因对胃癌细胞生物学特性的影响.方法 将人凋亡基因Caspase-1的重组逆转录病毒导入胃癌细胞株X-108,对转染阳性细胞的体外增殖、细胞培养液中CEA含量及裸鼠致瘤性进行分析.结果 导入的Caspase-1基因虽不能直接诱导细胞凋亡,但G_1期细胞数目增多,S期细胞数目减少.转染细胞培养液CEA含量有下降趋势.胃癌细胞株X-108-Caspase-1体外生长速度明显受抑,裸鼠体内致瘤性降低,肿瘤生长缓慢.结论Caspase-1不能促使X-108胃癌细胞凋亡,但可以使其增殖受抑,肿瘤细胞的恶性程度降低.     

转染Caspase-1基因对人胃癌细胞株生物学特性影响的研究

目的　探讨转染Ｃａｓｐａｓｅ１ 基因对胃癌细胞生物学特性的影响。方法　将人凋亡基因Ｃａｓｐａｓｅ１的重组逆转录病毒导入胃癌细胞株Ｘ１０８,对转染阳性细胞的体外增殖、细胞培养液中ＣＥＡ 含量及裸鼠致瘤性进行分析。结果　导入的Ｃａｓｐａｓｅ１ 基因使细胞增殖周期发生变化,Ｇ１ 期细胞数目增多,Ｓ期细胞数目减少。转染细胞培养液ＣＥＡ含量有下降趋势。胃癌细胞株Ｘ１０８Ｃａｓｐａｓｅ１ 体外生长速度明显受抑,裸鼠体内致瘤性降低,肿瘤生长缓慢。结论　Ｃａｓｐａｓｅ１ 不能促使Ｘ１０８ 胃癌细胞凋亡,但可以使其增殖受抑,肿瘤细胞的恶性程度降低。     

基因-病毒治疗系统CNHK200-hA的构建及对结肠癌治疗作用的体内研究

目的:构建一种结合抗肿瘤新生血管生成的基因治疗与病毒治疗优势的新型肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK200-hA,初步研究其在体内对结肠癌的治疗作用. 方法: 克隆人抗血管生成基因Angiostatin(k1-5),命名为hA. 利用病毒重组技术将hA插入肿瘤特异性增殖型腺病毒和非增殖型腺病毒的病毒基因组中,通过动物试验观察其对结肠癌的体内治疗作用. 结果: 构建了一种新型的基因-病毒治疗系统CNHK200-hA. 动物体内试验显示基因-病毒治疗系统CNHK200-hA能在结肠癌HT-29内高效表达K1-5蛋白,使肿瘤内血管明显减少,对结肠癌的疗效明显好于非增殖型腺病毒Ad-hA及肿瘤增殖型病毒ONYX-015. 结论: 插入了抗肿瘤新生血管生成基因hA的基因-病毒治疗系统CNHK200-hA在体内对结肠癌的治疗作用较非增殖病毒Ad-hA及肿瘤增殖病毒ONYX-015进一步提高.