贵州省1例B群流行性脑脊髓膜炎病例的病原学分析

目的对贵州省遵义市2016年4月发现的1例B群流行性脑脊髓膜炎(流脑)病例进行病原学分析。方法采集患者血液标本,分离菌株,进行生化鉴定和血清分型、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST);采用KB纸片扩散法和Etest法对菌株进行药敏试验。结果从患者血液中分离到的菌株其菌落形态、生化特征均符合脑膜炎奈瑟菌特性,玻片凝集试验和Real-time PCR鉴定其血清型为B群,基因MLST分型为ST-12885型。该菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、阿奇霉素、美罗培南、米诺环素、氯霉素、利福平等抗生素敏感,对复方新诺明、左氧氟沙星、环丙沙星耐药。结论贵州省1例流脑患者血液中首次检出B群脑膜炎奈瑟菌,属ST-4821高致病性克隆群。因此应加强对流脑病原菌的检测,采取有效防控措施,合理使用抗菌药物。     

肺炎克雷伯菌脉冲场凝胶电泳及多位点序列分型技术的联合应用

目的 联合使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)及多位点序列分型(MLST)对肺炎克雷伯菌进行分型研究.方法 参照美国疾病预防控制中心及亚太地区PulseNet提供的PFGE相关标准化操作程序,优化相关电泳条件,对某儿童医院于2005-2006年分离到的59株菌分型分析,对其中高度相似性菌株进行MLST分型分析.结果 59株菌经PFGE分型分析,可分成47个PFGE型,19个PFGE群,具有高度相似性的菌株经MLST分型,其型别分别为ST-340、ST-342、ST-343、ST-344、ST-345,其中ST-342、ST-343、ST-344、ST-345为MLST数据库中中国新发现的ST型.结论 具有PFGE高度相似性的肺炎克雷伯菌可以通过MLST进一步确认或区分.     

TaqMan荧光定量PCR检测和鉴别不同血清群脑膜炎奈瑟菌方法的建立及应用

目的 建立TaqMan荧光定量PCR检测方法,用于脑膜炎奈瑟菌不同血清群菌株的检测和鉴别.方法 设计合成7对引物和TaqMan探针,脑膜炎奈瑟菌种属特异性的基因为ctrA;不同血清群的脑膜炎奈瑟菌特异性基因分别为A群(sacB)、B群(siaD)、C群(siaD)、X群(xcbB)、Y群(synF)、W135群(synG).检测和确定不同探针和引物用于脑膜炎奈瑟菌荧光定量PCR检测的特异性、敏感性,并同时将荧光定量PCR和乳胶凝集方法应用于121份疑似脑膜炎奈瑟菌感染患者的脑脊液标本的检测.结果 ctrA、sacB、siaD(B群)、siaD(C群)、xcbB、synF、synG等7对引物和探针能准确检测和鉴定79株不同血清群的脑膜炎奈瑟菌菌株,检测灵敏性比相应的普通PCR高101～103倍,每对引物和探针反应体系中,能检测的最低全基因组DNA拷贝数分别为8、8、80、8、8、80、8;检测121份疑似脑膜炎奈瑟菌感染患者的脑脊液标本,TaqMan荧光定量PCR检测11份阳性,乳胶凝集方法检测6份阳性.结论 TaqMan荧光定量PCR方法能特异地检测和鉴定不同血清群脑膜炎奈瑟菌,具有较高的灵敏性和快速检测的特点,能提高临床疑似脑膜炎奈瑟菌感染病例的阳性检出率.     

环介导等温扩增技术快速检测脑膜炎奈瑟菌属方法的建立

目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立一种快速敏感的脑膜炎奈瑟氏菌属检测方法。方法针对脑膜炎奈瑟菌属(ctrA)基因序列的6个区域设计4条LAMP引物(2条内引物、2条外引物),同时设计2条环引物,并对反应条件和反应体系进行优化。分别验证该方法的特异性及敏感性,并与普通PCR进行了比较。结果在适宜反应条件所设计引物对脑膜炎奈瑟菌的扩增的特异性及敏感性均较好,与普通PCR方法比较,LAMP敏感性比普通PCR高10倍。结论 LAMP检测速度相比PCR更快速,在60 min内即可完成扩增反应。实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测脑膜炎奈瑟氏菌,适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用。     

环境水系分离嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳的分型研究

目的初步揭示中国环境水系嗜肺军团菌分离株的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型特征。方法分别以SfiI和AscI为限制性内切酶,使用PFGE对菌株进行分型和聚类分析。结果单独使用SfiI、AscI和联合使用两种内切酶分别将78株嗜肺军团菌分为47、48和60个型别,分型得到的Simpson差异指数分别为0.9833、0.9817和0.9933;同一水系中分离的菌株既有带型相同或者相似者,又有带型差异较大者;相同型别的菌株可在同一水系中跨年份存在。结论PFGE对嗜肺军团菌具有很好的分辨率;多个克隆系的菌株可以在同一水系中共存,某些克隆系的菌株可以跨年份存在;环境水系中存在优势克隆系,这些优势克隆系应该在今后军团菌的监测中引起注意。     

中国脑膜炎奈瑟菌中插入序列1301的分布与分子流行病学研究

目的 研究中国脑膜炎奈瑟菌(Nm)中插入序列IS1301的分布与分子流行病学特征.方法 设计IS1301引物,应用PCR方法检测2007年1月至2008年10月收集全国16个省、市、自治区219株Nm菌株的IS1301,对IS1301扩增产物进行DNA测序和序列比对,PCR扩增IS1301阳性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析及核酸印迹杂交,研究不同Nm菌株中IS1301的分布特征.结果 219株Nm菌株中,34株携带IS1301(15.53%),A、B、C群和不可分群的Nm菌株IS1301阳性率分别为11.11%、20.75%、6.17%和28.57%;IS1301扩增产物测序结果与GenBank登记编号ZA9092.1的Nm菌株序列相似度为94%～100%,进化树分析可分为两簇;C群Nm菌株与其他血清群菌株IS1301序列存在较大差别;研究的Nm菌株基因组中至少存在6～17个IS1301拷贝,相同PFGE带型Nm菌株所携带的IS1301拷贝数具有多态性特征.结论 IS1301在中国Nm菌株中的分布具有遗传多态性.     

肺炎克雷伯菌脉冲场凝胶电泳及多位点序列分型技术的联合应用

Objective To type Klebsiella pneumonia through methods including pulse-field gel electrophoresis (PFGE) in combination with multilocus sequence typing. Methods Four selected different Eps, referring to the Standard Operating Procedure of PulseNet China, were used. The single colony of Klebsiella pneumonia was quantified after enriched culture. Embedding organisms in agarose and genome DNA were lysed with Proteinase K and then digested by restriction endonuclease Xba Ⅰ , to produce agarose gel. Fingerprint was obtained through PFGE and bands were marked with their molecular weights and then analyzed by BioNumerics software. Using MLST to analyze the strains that were highly similar, by PFGE typing Results By comparing the four results from each Eps, fk3 (switch time from 6s to 36s,total run time is 18.5 hours) seemed to be better than the others.59 strains of Klebsiella pneumonia were divided into 47 PFGE types and 19 PFGE clusters. The highly similar strains could be typed into ST-340、ST-342、ST-343、ST-344、ST-345 by MLST. Among them, ST-342、 ST-343、 ST-344、 ST-345 types were all new MLST types that were reported in China.Conclusion Highly similar Klebsiella pneumonias typed by PFGE could also be typed by MLST.     

C群脑膜炎奈瑟菌血清杀菌力试验的优化及其应用

目的 优化血清杀菌力试验方法,检测和分析A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗接种前后人群血清对C群脑膜炎奈瑟菌(Nm)的杀菌抗体水平.方法 以C群Nm疫苗株(C11)和中国目前C群Nm流行株(053442)作为靶菌,国家Nm标准品测试血清为参考血清,选用Pel-Freez幼兔补体,确定靶菌最适工作浓度.122人接种A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗前后分别采集血清标本,共244份,进行C群Nm杀菌抗体水平的检测.结果 菌株C11和053442均可作为靶菌用于血清杀菌力试验;靶菌的工作浓度为A 0.35(600 nm)的菌液稀释4×104倍;A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗接种前,122份血清对C11和053442的杀菌抗体几何平均滴度(GMT)分别为1:1.75和1:2.63,人群抗体保护率分别为9.8%和17.2%,A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗接种后,122份血清的杀菌抗体GMT和人群保护率均显著升高(P<0.01),对疫苗株和流行株的杀菌抗体GMT分别为1:483.73和1:412.57,保护率分别为100%和95.9%.结论 接种A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗,能够显著提高人群对不同亚型的C群Nm的抵抗力,但仍需要针对不同的靶菌进行疫苗免疫效果的监测.     

三峡库区人群军团菌感染血清流行病学调查

为了解三峡库区军团菌病的流行状况，于2001—2004年开展了三峡库区人群军团菌感染血清流行病学调查及病原菌分离研究。     

嗜肺军团菌血清I型菌株随机扩增多态性DNA指纹图谱研究

目的采用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法研究我国58株嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的基因型特征。方法58株嗜肺军团菌血清1型菌株来自北京和深圳市的集中空调冷却塔水和温泉水,随机引物采用5’-CGGCGGCG-GCGG-3’序列,分析Lp1型军团菌RAPD基因型和温度、pH值的关系。结果58株Lp1型菌株共分为17个RAPD基因型。与集中空调冷却塔水Lp1型菌株相比,温泉水分离的菌株基因型具有较高的多态性。深圳市29株集中空调冷却塔水分离的Lp1菌株,共呈现出3个RAPD基因型,北京市24株来自温泉水的Lp1菌株分为12个RAPD型,5株来自集中空调冷却塔水的Lp1型菌株分为两个RAPD型。温泉水Lp1菌株的基因型差异和水温度和pH值无明显的关联。结论RAPD分型方法可用于我国Lp1菌株的基因分型,不同地区和来源的Lp1型军团菌菌株具有特征性的RAPD基因型,温泉水中分离的Lp1菌株较集中空调冷却塔水分离菌株基因型呈现较高的基因多态性。