腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素-6在真核细胞中的表达效率

目的:构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率.方法:利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素-6(IL-6)真核表达载体pAdCIIL-6和P335ciil-6.将它们瞬时转染COS-7细胞后,利用IL-6依赖株7TD1对上清中的IL-6进行检测.结果:两种新建载体分别能提高IL-6在真核细胞中的表达效率5.5和3.4倍.结论:腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡRNA(virus-associated Ⅰand ⅡRNA, VAⅠand VAⅡ)和腺伴随病毒(adeno associated virus, AAV) 的倒转末端重复序列(inverted terminal repeat, ITR)能提高细胞因子在真核细胞中的表达.     

细胞因子基因工程新药开发研究进展

结合本实验室的相关工作，综合介绍了近年进入临床实验的一些细胞因子动物，包括ＩＬ－１，ＩＬ－１ｒａ，ＩＬ－３，ＧＭ－ＣＳＦ－ＩＬ－３融合蛋白，ＩＬ－６，ＩＬ－１０，ＩＬ－１１，ＩＬ－１２，同时，也介绍了可能在近年进入临床的新细胞因子，包括ＩＬ－１３，ＩＬ－１５，ＩＬ－１６，希望能对国内细胞因子药物开发研究提供启发。     

人IL—1受体拮抗剂研究进展

白细胞介素－１（ＩＬ－１）受体拮抗剂是由单核核巨噬细胞等分泌的小分子蛋白质，通过特异地与白细胞介素－１受体结合阻粘ＩＬ－１的生物活性，在治疗败血性休克，ＡＭＬ，ＣＭＬ，移植物抗宿主反应，炎症，发热等疾病中有显著疗效，是一种很有发展前景的新型生物应签调节剂。     

外源基因在大肠杆菌高效表达的技术进展

利用基因工程,可将外源基因导入大肠杆菌或其它工程细胞,使其作为生物工厂生产人类需要的蛋白质。在利用大肠杆菌表达外源基因时,必须考虑表达的基因载体、外源基因的性质、原核细胞启动子、读码框架及宿主菌调控系统这5个基本条件。本文结合笔者工作,介绍提高外源基因在大肠杆菌表达效率的一些技术进展。为提高外源基因转录水平,可选择合适的启动子、改进宿主菌调控系统和引入转录终止区。在提高外源基因转译水平方面,需改善核糖体结合点结构,考虑密码子使用的问题和增加mRNA稳定性。为提高外源蛋白的稳定性,可选择蛋白酶缺陷的宿主菌、注意蛋白质N端规律,或利用外泌型表达基因载体。     

白细胞介素-2-乙肝病毒前S抗原融合蛋白在真核细胞中的分泌表达

为了协同人白细胞介素-2（IL－2）与乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）前S抗原（preSAg）的生物学功能，探索能打破持续性感染者对HBV表面抗原（HBsAg）的免疫耐受，诱导机体对HB－sAg和preSAg产生体液和细胞免疫应答的基因免疫与治疗药物，用基因重组方法构建了IL－2和HBV完整preSAg的真核表达嵌合基因及表达质粒pCWIIP。pCWIIP转染的Cos－7细胞能分泌表达IL－2－preS融合蛋白，其表达效率与pCIIL－2转染的细胞表达IL－2一致，细胞上清中IL－2活性单位大于3×103u／ml，并用酶免疫实验法（EIA）检测了preSAg，而其细胞裂解液中IL－2活性很低，preSAg未检测到。本文结果说明preSAg2～19位氨基酸序列的滞留效应是可以克服的。该发现不仅为构建带完整preSAg的新型乙肝疫苗和特异性免疫治疗剂提供了理论与实验依据，而且对蛋白质分泌表达调控的研究也有一定意义。     

在大肠杆菌高效表达人白细胞介素4融合蛋白

将在真核细胞表达的pCD-huIL-4质粒,经EcoRV及Bam H1酶切,获人IL-4 cDNA的 EcoRV—Bam H1片段,插入经相应 EcoRV及Bam H1酶切处理的pEX-2ΔH质粒,构成pR-hlL-4质粒。此质粒包含除5’-端9个bp缺失外的编码人成熟1L-4分子的全部bp序列。pR-hlL-4质粒酶切图谱鉴定正确,转化E.colipop 2136菌,表达分子量为60 kd的融合蛋白,它占全部菌体蛋白的30％。表达的融合蛋白无可测出的人IL-4的BCGF或TCGF活性。以融合蛋白免疫小鼠及家兔制成的抗血清,在免疫斑点试验中,与人rIL-4及融合蛋白呈特异反应,表明融合蛋白中具有人IL-4抗原分子。     

一种敏感的改良空斑形成细胞测定法

1963年Jerne建立的空斑形成细胞(Plaque forming-cell,PFC)测定技术(又称溶血空斑技术)“’可用于检查单个抗体分泌细胞,是研究免疫生物学与免疫药理学的重要方法之一。Jerne最初使用的方法为平皿法,以后PFC测定方法不断改进,Kennedy建立的单分子层法比较敏感,但所用的必     

矿物药无名异的研究进展

无名异为一种软锰矿,有活血、止痛、生肌的药理作用。本文通过查阅相关文献,对矿物药无名异的鉴别、动力学研究、药理作用等方面作一综述,并对无名异的研究方向进行展望,为更好地开发利用无名异奠定基础。     

NFкB活化诱导剂筛选细胞的建立

目的：了解不同刺激剂作用ＨＬ－６０细胞后对ＮＦ－ｋＢ活化的特点，为人类功能基因的筛选提供新的方法。方法：采用基因转染技术获得能稳定表达ＩｋＢａ－ＥＧＦＰ融合蛋白的ＨＬ－６０细胞系，定性和定量检测８种刺激剂作用于该细胞系后荧光强度的变化。结果：定性结果发现，在所用的８种刺激剂中，除ＩＬ－１ｒａ作用后的细胞荧光强度没有明显的变化外，其它７种刺激剂作用后都有不同程度的细胞荧光强度的降低，尤以ＰＨＡ作用后的变化更为典型。定量检测结果发现，稳定表达的ＨＬ－６０细胞自身的荧光强度，随时间延长即有降低，ＩＬ－１ｒａ作用后细胞荧光强度的降低同没有刺激时相比没有明显区别；其它７种刺激剂作用后均有明显的荧光强度降低，但它们作用后的特点并不相同。结论：该真核转染的细胞可用于ＮＫ－ｋＢ活化刺激剂的初步筛选，可以作为功能基因组研究中新基因功能初筛的一个平台技术。